一种非人哺乳动物焦虑症或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途技术

本发明专利技术提供了一种非人哺乳动物焦虑症或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途，具体地，本发明专利技术提供了一种非人哺乳动物的焦虑症或其相关疾病动物模型的制备方法，包括以下步骤：(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的Glce基因失活，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞；(b)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的细胞，制备得到Glce基因失活的焦虑症或其相关疾病动物模型。本发明专利技术的动物模型是一种有效的焦虑症或其相关疾病动物模型，可用于研究广泛性焦虑、急性焦虑发作、恐怖症、创伤后应激障碍、急性应激障碍、强迫障碍等疾病，并可以用于特定药物的筛选和测试试验。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地，涉及一种非人哺乳动物焦虑症或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途。
技术介绍
焦虑症，又称为焦虑性神经症，是神经症这一大类疾病中最常见的一种，以焦虑情绪为主要特征，其核心症状为担忧。主要包括广泛性焦虑、急性焦虑发作、恐怖症、创伤后应激障碍、急性应激障碍、强迫障碍。主要表现为无明确客观对象的紧张担心、坐立不安、植物神经症状(心悸、手抖、出汗、尿频等)。世界卫生组织(WHO)统计表明，从1990年至2003年，遭受抑郁症或焦虑症痛苦的人数从4.16亿增至6.15亿，几乎达到了全球人口的10％。并且，精神障碍疾病占到了非致命疾病的30％。据估算，在发生紧急情况的人员中，每5名中就有1名患抑郁症或焦虑症。全球每年需要负担约1万亿美元来治疗抑郁症和焦虑症。由于焦虑症的发病机制非常复杂，至今焦虑症的致病机理尚未研究清楚，缺乏安全有效的治疗手段，因此深入探讨其发病机理是治疗焦虑症的重要基础。小鼠疾病模型在研究人类疾病的致病机理和药物筛选中起到了非常重要的作用。在探究人类的认知功能、神经退行性疾病、神经精神疾病等方面，小鼠模型具有巨大的优势。基因敲除是上世纪80年代发展起来的一项复杂的分子生物学技术，其基于小鼠胚胎干细胞DNA同源重组原理，也称为“基因打靶”技术。其后利用这项技术构建了数千种基因突变小鼠，这些基因工程小鼠不仅为生物科学和医学的研究带来了突破，也在新药研发中发挥了至关重要的作用。目前已有的小鼠焦虑症模型的建立方法主要包括两类：一类是基于非条件化的行为模型，根据其特点又可分为探究行为模型和社会行为模型。然而，这类模型基本仅限于躯体应激反应，缺乏有效的病因学监测手段。另一类焦虑模型是基于条件反射的模型，主要包括饮水冲突模型、条件性电击模型等。然而，这类模型包含有电击这类物理应激的成分，使得心理应激中躯体应激的比例增大是其主要缺陷。因此，本领域迫切需要开发一种可以较好地模拟临床上原发性的焦虑症，个体差异较小，其遗传背景高度一致，可以作为研究焦虑症的发病机理以及新药筛选的有力工具的动物模型，并将构建的动物模型用于研究焦虑症的发病机理以及筛选或鉴定治疗焦虑症的物质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可以较好地模拟临床上原发性的焦虑症，个体差异较小，其遗传背景高度一致，可以作为研究焦虑症的发病机理以及新药筛选的有力工具的动物模型，并将构建的动物模型用于研究焦虑症的发病机理以及筛选或鉴定治疗焦虑症的物质。本专利技术的第一方面提供了一种非人哺乳动物的焦虑症或其相关疾病动物模型的制备方法，包括以下步骤：(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的Glce基因失活，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞；(b)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的细胞，制备得到Glce基因失活的焦虑症或其相关疾病的动物模型。在另一优选例中，在步骤(a)中，还包括如下步骤：(a1)利用DNA同源重组技术，将所述Glce基因中的外显子3至外显子5中的一个或多个外显子剔除或中断，并用筛选标记替换，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞。在另一优选例中，在步骤(b)中，还包括如下步骤：(b1)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的非人哺乳动物细胞制备得到嵌合非人哺乳动物；(b2)将步骤(b1)中得到的嵌合非人哺乳动物和正常野生型非人哺乳动物交配繁育，在后代中筛选获得Glce基因失活的杂合子非人哺乳动物；(b3)通过将步骤(b2)中得到的杂合子非人哺乳动物相互交配获得Glce基因失活的纯合子非人哺乳动物，从而得到Glce基因失活的非人哺乳动物的动物模型。在另一优选例中，在步骤(b3)中，还包括步骤(b4)：将Glce基因失活的纯合子非人哺乳动物与同一物种的神经元特异性敲除工具非人哺乳动物进行杂交，从而获得神经元特异性的Glce基因失活的非人哺乳动物的动物模型。在另一优选例中，所述将Glce基因失活包括基因剔除、基因中断或基因插入。在另一优选例中，所述基因失活包括Glce基因不表达，或表达没有活性的Glce蛋白。在另一优选例中，所述Glce基因失活是通过缺失或敲除Glce的外显子3而失活。在另一优选例中，所述的Glce基因失活是神经元特异性的Glce基因失活。在另一优选例中，所述非人哺乳动物为啮齿动物或灵长目动物，较佳地包括小鼠、大鼠、兔和/或猴。在另一优选例中，所述非人哺乳动物是小鼠，并且在步骤(b4)中把GlceLoxp/Loxp小鼠与工具鼠NSE(neuron-specificenolase)-Cre交配，即得到在神经元细胞特异性Glce基因敲除小鼠简称cKO小鼠(即神经元特异性Glce失活小鼠)。在另一优选例中，所述筛选标记选自下组：抗性基因、荧光蛋白基因、或其组合。在另一优选例中，所述筛选标记包括neo基因。在另一优选例中，所述步骤(b)中得到的Glce基因失活的非人哺乳动物的动物模型中，与野生型对照动物相比，具有选自下组的一个或多个特征：(t1)焦虑样的行为增加；(t2)焦虑程度增加；(t3)旷场活动水平减少；(t4)探索新异环境的欲望降低；(t5)抑郁样行为增加；(t6)抑郁程度增加；(t7)恐惧样行为增加；(t8)恐惧程度增加；(t9)认知障碍增加；(t10)中风的发生率增加；(t11)形态的肥胖程度增加；(t12)肥胖症状的发生率增加；(t13)脂肪组织湿重增加。在另一优选例中，所述焦虑样行为选自下组：在旷场实验中探索中央区域的时间减少，表现出探索新异环境的欲望降低、在高架十字迷宫实验中探索开放臂的时间减少，停留在封闭臂的时间增加，表现出焦虑样行为、或其组合。在另一优选例中，所述旷场活动水平选自下组旷场活动的路程、活动时间、活动速度、或其组合。在另一优选例中，所述抑郁样行为选自下组：在旷场实验中探索中央区域的时间减少，表现出探索新异环境的欲望降低、在强迫游泳实验中的不动时间增加，表现出行为绝望、或其组合。在另一优选例中，所述脂肪组织湿重选自下组：内脏脂肪组织湿重、皮下脂肪组织湿重、或其组合。在另一优选例中，所述内脏脂肪组织湿重选自下组：双侧性腺周围脂肪组织湿重、双侧肾周脂肪组织湿重、或其组合。在另一优选例中，所述皮下脂肪组织湿重包括双侧腹股沟脂肪组织湿重。本专利技术第二方面提供了一种本专利技术第一方面所述方法制备的非人哺乳动物模型的用途，将该模型用作研究焦虑症或其相关疾病的动物模型。在另一优选例中，所述焦虑症或其相关疾病选自下组：广泛性焦虑、急性焦虑发作、恐怖症、创伤后应激障碍、急性应激障碍、强迫障碍、或其组合。在另一优选例中，所述慢性焦虑症包括广泛性焦虑。在另一优选例中，所述急性焦虑症包括惊恐障碍。本专利技术第三方面提供了一种本专利技术第一方面所述方法制备的非人哺乳动物模型的用途，用于筛选或鉴定可减轻或治疗焦虑症或其相关疾病的物质(治疗剂)。在另一优选例中，所述焦虑症或其相关疾病选自下组：广泛性焦虑、急性焦虑发作、恐怖症、创伤后应激障碍、急性应激障碍、强迫障碍、或其组合。在另一优选例中，所述慢性焦虑症包括广泛性焦虑。在另一优选例中，所述急性焦虑症包括惊恐障碍。本专利技术第四方面提供了一种筛选或鉴定治疗或缓解焦虑症或其相关疾病的潜在治疗剂的方法，包括以下步骤：(a)在测试组中，在测试化合物的存在下，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非人哺乳动物的焦虑症或其相关疾病动物模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的Glce基因失活，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞；(b)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的细胞，制备得到Glce基因失活的焦虑症或其相关疾病的动物模型。

【技术特征摘要】
1.一种非人哺乳动物的焦虑症或其相关疾病动物模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的Glce基因失活，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞；(b)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的细胞，制备得到Glce基因失活的焦虑症或其相关疾病的动物模型。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，还包括如下步骤：(a1)利用DNA同源重组技术，将所述Glce基因中的外显子3至外显子5中的一个或多个外显子剔除或中断，并用筛选标记替换，得到Glce基因失活的非人哺乳动物细胞。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，还包括如下步骤：(b1)利用步骤(a)中得到的Glce基因失活的非人哺乳动物细胞制备得到嵌合非人哺乳动物；(b2)将步骤(b1)中得到的嵌合非人哺乳动物和正常野生型非人哺乳动物交配繁育，在后代中筛选获得Glce基因失活的杂合子非人哺乳动物；(b3)通过将步骤(b2)中得到的杂合子非人哺乳动物相互交配获得Glce基因失活的纯合子非人哺乳动物，从而得到Glce基因失活的非人哺乳动物的动物模型。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(b3)中，还包括步骤(b4)：将Glce基因失活的纯合子非人哺乳动物与同一物种的神经元特异性敲除工具非人哺乳动物进行杂交，从而获得神经元特异性的Glce基因失活的非人哺乳动物的动物模型。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)中得到的Glce基因失活的非人哺乳动物的动物模型中，与野生型对照动物相比，具有选自下组的一个或多个特征：(t1...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁侃，李艳玲，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31