靶向破骨细胞相关蛋白Siglec-15的抗体制造技术

提供使用在破骨细胞中强表达的基因的骨代谢异常的检测方法、具有骨代谢异常治疗和/或预防效果的化合物的筛选方法、以及治疗和/或预防骨代谢异常的医药组合物。提供以人Siglec‑15基因的表达为指标的骨代谢异常的检测方法，以及提供包含具有特异性识别人Siglec‑15，并抑制破骨细胞形成的活性的抗体的药物组合物等。

Antibodies targeted to osteoclast related protein Siglec-15

A method for detecting abnormality of bone metabolism using genes strongly expressed in osteoclasts, methods for screening compounds with abnormal bone metabolism and / or preventive effects, and medical compositions for the treatment and / or prevention of abnormality of bone metabolism. A method for detecting bone metabolism abnormality based on the expression of the human Siglec 15 gene is provided, and a pharmaceutical composition including an antibody that contains a specific identification of Siglec, and an antibody against the activity of osteoclast formation.

【技术实现步骤摘要】
靶向破骨细胞相关蛋白Siglec-15的抗体本申请是分案申请，其母案的中国申请号是：200880110441.X，国际申请号是PCT/JP2008/068287，申请日是2008年10月8日。
本专利技术涉及可用作骨代谢异常的治疗和/或预防剂的物质、可用作骨代谢异常的治疗和/或预防剂的物质的筛选方法、骨代谢异常的检查方法以及骨代谢异常的治疗和/或预防方法。
技术介绍
已知骨骼为通过重复形成和吸收，以进行持续重建的动态性器官，以使其本身的形态变化以及维持血钙浓度。健康的骨骼维持由成骨细胞进行的骨形成和由破骨细胞进行的骨吸收的平衡关系，从而骨质量保持恒定。然而，当骨形成和骨吸收之间的平衡关系被破坏时，则产生骨质疏松症等骨代谢异常(EndocrinologicalReview，(1992)13，第66-80页，PrinciplesofBoneBiology，AcademicPress，NewYork，(1996)第87-102页)。作为调节骨代谢的因子，报道了很多全身性激素以及局部性细胞因子，且这些因子互相合作以形成和维持骨(EndocrinologicalReview，(1992)13，第66-80页，EndocrinologicalReview)，(1996)17，第308-332页)。因老龄化导致的骨组织的变化，骨质疏松症的发病众所周知，但是其发病机理包含各种因素，如性激素的分泌降低以及该激素受体异常、骨局部细胞因子表达变动、老化基因的表达、破骨细胞或成骨细胞的分化衰退或功能不全，因此，难以理解为老龄化引起的单纯的生理现象。原发性骨质疏松症主要分为由于雌激素的分泌降低导致的绝经后骨质疏松症和老龄化导致的老年性骨质疏松症，为了了解其发病机理和开发治疗药物，在骨形成和骨吸收的调节机制方面的进一步基础研究很重要。破骨细胞是来自造血干细胞的多核细胞，通过在破骨细胞粘附的骨表面上业已发现破骨细胞的前体细胞通过在骨表面的成骨细胞/基质细胞的细胞膜上表达的RNAKL(NF-κB配体的受体活化因子)的刺激，分化为破骨细胞(ProceedingsoftheNationalAcademyofScienceoftheUnitedStatesofAmerica，(1998)95，第3597-3602页，Cell，(1998)93，第165-176页，)。还发现RNAKL是成骨细胞/基质细胞所产生的膜蛋白，其表达受骨吸收因子的调节，以及RNAKL诱导由破骨细胞前体细胞向多核破骨细胞的分化等(ProceedingsoftheNationalAcademyofScienceoftheUnitedStatesofAmerica，(1998)95，第3597-3602页，JournalofBoneandMineralResearch，(1998)23，S222)。此外，还发现敲除RNAKL的小鼠产生典型的骨硬化病样疾病，因此，证明RNAKL是生理性破骨细胞分化诱导因子(Nature，(1999)397，第315-323页)。使用二膦酸盐、活性维生素D3、降钙素及其衍生物、雌二醇等激素制剂、SERMs(选择性雌激素受体调节剂)、依普黄酮、维生素K2(四烯甲萘醌)、PTH(甲状旁腺激素)制剂和钙制剂等作为骨代谢疾病的治疗以及缩短治疗的持续时间的药物。但是，这些制剂没有始终表现满意的治疗效果，人们希望开发治疗效果更高的药物。免疫细胞的细胞膜上被如唾液酸等多种多糖高度覆盖，所述多糖被各种多糖结合蛋白识别。唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(Sialic-acid-bindingimmunoglobulin-likelectins，下面称为“Siglecs”)为识别并结合唾液酸化的多糖的I型膜蛋白家族。人们认为Siglecs大多在免疫细胞的细胞膜上表达，并识别类似地存在于免疫细胞的细胞膜上的唾液酸，调节细胞间的相互作用以及细胞功能，并被认为参与免疫应答(NatureReviewsImmunology，(2007)7，第255-266页)。然而，也有很多生理功能尚不明了的Siglec分子。最近报道了Siglec-15(唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素15)为属于Siglecs的分子(Glycobiology，(2007)17，第838-846页)，其与被称为CD33L3(CD33分子样3)的分子相同。该分子从鱼类到人类的进化高度保守，业已发现，在人脾以及淋巴结中，在树突细胞/巨噬细胞中有强的表达。此外，使用唾液酸探针的结合测试的结果是，还发现人Siglec-15与Neu5Acα2-6GalNAc结合、小鼠Siglec-15除与Neu5Acα2-6GalNAc结合外，还与Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc结合(Glycobiology，(2007)17，第838-846页)。直至最近，还未明了Siglec-15的生理作用，但业已报道伴随着破骨细胞的分化和成熟，Siglec-15表达增加，以及通过用RNA干扰使Siglec-15的表达下降，从而抑制破骨细胞的分化(WO2007/093042)。但是，还不明确抗Siglec-15抗体对破骨细胞分化的作用。
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于提供：在各种形式的骨代谢异常中特异表达的基因，如骨质疏松症、类风湿性关节炎、癌的骨转移等中可见的骨破坏；抑制破骨细胞的分化和成熟及其活性的物质；用于筛选骨代谢异常的治疗和/或预防剂的新方法；抑制破骨细胞的分化和成熟及其活性的物质；以及骨代谢异常的治疗和/或预防剂。解决问题的手段为了找到具有骨代谢异常的治疗和/或预防效果的物质，本专利技术人以阐明破骨细胞的分化、成熟和活化机制为目标进行研究，结果发现，伴随着破骨细胞的分化、成熟，Siglec-15基因的表达增加，还发现通过与Siglec-15特异性结合的抗体，抑制破骨细胞的分化，从而完成本专利技术。即，本专利技术包括以下专利技术。(1)抗体或该抗体的功能性片段，其特异性地识别包含以下的(a)至(i)中任一项记载的氨基酸序列的一个或多个多肽，并抑制破骨细胞的形成和/或由破骨细胞产生的骨吸收：(a)序列表中SEQIDNO：2表示的氨基酸序列；(b)由序列表中的SEQIDNO：22表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第328位构成的氨基酸序列；(c)由序列表中的SEQIDNO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第1位至第260位构成的氨基酸序列；(d)由序列表中的SEQIDNO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第260位的构成的氨基酸序列；(e)序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列；(f)由序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第341位构成的氨基酸序列；(g)由序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第1位至第258位构成的氨基酸序列；(h)由序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第258位构成的氨基酸序列；(i)包括(a)至(h)中所述的氨基酸序列中一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加的氨基酸序列。(2)抗体或该抗体的功能性片段，其特异性地识别包含以下的(j)至(n)中任一项记载的核苷酸序列编码的氨基酸序列的一个或多个多肽，并抑制破骨细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种cDNA，其包含编码抗体的重链和轻链或其功能片段的多核苷酸序列，该抗体或其重链或轻链的功能片段特异性地识别包含以下(a)至(i)中任一项所述的氨基酸序列的一个或多个的多肽，并抑制破骨细胞的形成和/或破骨细胞性的骨吸收：(a)序列表中的SEQ ID NO：2表示的氨基酸序列；(b)由序列表中的SEQ ID NO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第328位构成的氨基酸序列；(c)由序列表中的SEQ ID NO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第1位至第260位构成的氨基酸序列；(d)由序列表中的SEQ ID NO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第260位的构成的氨基酸序列；(e)序列表中的SEQ ID NO：4表示的氨基酸序列；(f)由序列表中的SEQ ID NO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第341位构成的氨基酸序列；(g)由序列表中的SEQ ID NO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第1位至第258位构成的氨基酸序列；(h)由序列表中的SEQ ID NO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第258位构成的氨基酸序列；和(i)包括(a)至(h)中所述的氨基酸序列中一个或数个氨基酸残基的取代、缺失或添加的氨基酸序列。...

【技术特征摘要】
2007.10.11 JP 2007-2654201.一种cDNA，其包含编码抗体的重链和轻链或其功能片段的多核苷酸序列，该抗体或其重链或轻链的功能片段特异性地识别包含以下(a)至(i)中任一项所述的氨基酸序列的一个或多个的多肽，并抑制破骨细胞的形成和/或破骨细胞性的骨吸收：(a)序列表中的SEQIDNO：2表示的氨基酸序列；(b)由序列表中的SEQIDNO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第328位构成的氨基酸序列；(c)由序列表中的SEQIDNO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第1位至第260位构成的氨基酸序列；(d)由序列表中的SEQIDNO：2表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第260位的构成的氨基酸序列；(e)序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列；(f)由序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第341位构成的氨基酸序列；(g)由序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第1位至第258位构成的氨基酸序列；(h)由序列表中的SEQIDNO：4表示的氨基酸序列的氨基酸残基第21位至第258位构成的氨基酸序列；和(i)包括(a)至(h)中所述的氨基酸序列中一个或数个氨基酸残基的取代、缺失或添加的氨基酸序列。2.根据权利要求1的cDNA，其中所述抗体抑制破骨细胞的细胞融合过程。3.根据权利要求1或2的cDNA，其中所述抗体抑制由TNF-α诱导的破骨细胞形成。4.根据权利要求1的cDNA，其中所述抗体在30μg/ml或以下的浓度下抑制体外破骨细胞形成。5.根据权利要求4的cDNA，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：昼间由晴，津田英资，
申请(专利权)人：第一三共株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP