人源性降胆固醇植物乳杆菌ZY08及其应用制造技术

本发明专利技术涉及食品微生物技术领域，具体而言，本发明专利技术公开了一种植物乳杆菌ZY08：为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，其保藏号为CGMCC NO.14847。其具有强降胆固醇功能，以及具有较强的胆盐水解酶活力。本发明专利技术还同时公开了上述植物乳杆菌ZY08在制备具有降低胆固醇功能的产品中的应用。

【技术实现步骤摘要】
人源性降胆固醇植物乳杆菌ZY08及其应用
本专利技术涉及食品微生物
，具体涉及到具有降胆固醇功能的植物乳杆菌ZY08及应用。
技术介绍
目前，心血管疾病已经成为世界人口死亡的首要病因。血清中胆固醇含量被认为是诱发高血压、冠心病等众多心血管疾病的主要因素。因此，降低血清胆固醇水平直接关系到人体的健康。迄今为止，已有大量试验证实了服用部分乳酸菌及其相关制品具有减少人体血清胆固醇含量，降低心血管疾病发病率的功效。乳酸菌是人体肠道中重要的益生菌，其数量和组成对维持宿主的微生态平衡和提高免疫系统功能起着至关重要的作用。乳杆菌与人类生活密切相关，是广泛应用于食品发酵、工业乳酸发酵及医疗保健领域的有益微生物之一。植物乳杆菌作为乳杆菌的一种，将其添加到食品中，可以改善食品的口感、质地和风味。植物乳杆菌也能够定植于人体内发挥益生作用，如调节肠道菌群、抑制肠道病原菌生长、降低血清胆固醇、增强机体免疫力、提高乳糖消化和抗肿瘤、抗氧化等。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种人源性降胆固醇植物乳杆菌ZY08及其应用。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种植物乳杆菌ZY08：为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，其保藏号为CGMCCNO.14847。作为本专利技术的植物乳杆菌ZY08的改进：植物乳杆菌ZY08的16SrDNA全序列为SEQIDNo：1所示。本专利技术还同时提供了上述植物乳杆菌ZY08在制备具有降低胆固醇功能的产品中的应用。作为本专利技术的应用的改进：所述具有降低胆固醇功能的产品为具有降低胆固醇功能的食品、药物、保健品及饲料。具有降低胆固醇功能的食品包括具有降低胆固醇功能的发酵果蔬汁(例如为发酵南瓜火龙果汁)；具有低胆固醇功能性发酵酸肉；具有降低胆固醇功能的药物包括具有降低胆固醇功能的活菌制剂，该活菌制剂中植物乳杆菌ZY08的活菌数为1.0×1010～5×1010CFU/g；具有降低胆固醇功能的饲料为具有降低胆固醇功能的青贮饲料(例如为青贮苜蓿饲料)。本专利技术的植物乳杆菌ZY08单独或与其他菌株混合发酵用于制备具有降低胆固醇功能的青贮饲料。本专利技术的植物乳杆菌ZY08，保藏名称：植物乳杆菌Lactobacillusplantarum；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCCNO.14847，保藏时间2017年11月1日。本专利技术从健康母乳喂养婴儿的粪便中筛选出一株植物乳杆菌ZY08(LactobacillusplantarumZY08)，通过细菌形态学、生理学和培养特征，结合API50CH鉴定试剂条(法国梅里埃)和16SrDNA测序等对该菌进行了鉴定。本专利技术所提供的植物乳杆菌ZY08(LactobacillusplantarumZY08)的菌落形态学特征为：在MRS琼脂培养基上形成明显的菌落，菌落大小0.3～1.5mm。菌落圆形，边缘整齐，白色，表面湿润光滑。其菌体形态特性为：革兰氏染色呈阳性，不产芽孢，圆端直杆菌，单个、成对或短链状。本专利技术所提供的植物乳杆菌ZY08(LactobacillusplantarumZY08)的降胆固醇能力达到62.1～68.6％。其具有以下能力：1、具有较强的胆盐水解酶活力；2、能耐受酸和胆盐，并且具有一定的增殖能力；对常见的抗生素敏感；具有抗菌活性；即，能耐受胃肠道环境、无抗生素耐性、能抑制肠内有害的病原菌。本专利技术所提供的植物乳杆菌ZY08(LactobacillusplantarumZY08)与植物乳杆菌CGMCCNO.14216、植物乳杆菌CGMCCNO.14217相比，其降胆固醇能力和益生特性更为突出。综上所述，本专利技术从健康母乳喂养婴儿的粪便中分离获得的益生菌中筛选出来具有强降胆固醇功能的植物乳杆菌。该菌株具有较强的胆盐水解酶活力。该菌株在耐酸耐胆盐方面比其他乳酸菌有明显的优势，适合肠胃环境并具有增殖能力。无抗生素耐性，具有抗菌活性。本专利技术植物乳杆菌可广泛用于开发降胆固醇相关益生功能产品。附图说明图1为植物乳杆菌ZY08的菌落形态图。图2为植物乳杆菌ZY08革兰氏染色的菌体形态图。图3为植物乳杆菌ZY08的16SrDNA的电泳鉴定图；图3中1和2均为本专利技术菌株，M为DNAMarker。图4为OPA法测得胆固醇标准曲线。图5为空白样品(未接菌)胆固醇峰图。图6为阳性对照菌株(嗜酸乳杆菌ATCC43121)发酵上清液胆固醇峰图。图7为植物乳杆菌ZY08发酵上清液胆固醇峰图。图8为植物乳杆菌ZY08的胆盐水解酶活性测定图。图9为植物乳杆菌ZY08对抗生素敏感性的平板示例。图10为植物乳杆菌ZY08抗菌活性的平板示例。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1、植物乳杆菌ZY08的筛选及鉴定：1.植物乳杆菌ZY08的筛选1.1样品来源本专利技术所使用的菌株均从母乳喂养健康婴儿(3～6月)粪便样品中分离获得。粪便样品共采集20份，其中所有采样对象在被采样前的至少一个月时间内未服用任何含有活菌的发酵食品和益生菌制剂、未出现腹泻等胃肠道疾病、未服用任何种类的抗生素类药物。1.2菌株的分离纯化取大约5g新鲜粪便样品用无菌管收集，立即送至实验室进行菌株分离。取1g样品放入9mL的MRS液体培养基中，涡旋混匀后于37℃下富集培养48h；然后在超净台中吸取富集液1mL，用无菌生理盐水进行十倍梯度稀释，选取10-6、10-7、10-8三个稀释梯度，每个梯度取菌液100μL涂于MRS琼脂培养基上，于37℃培养48h。培养结束后，从琼脂培养基中选择生长有50～150个单菌落的平板，挑取典型菌落，在MRS琼脂平板上多次划线纯化，直至整个平板上的菌落形态一致，挑取单菌落到MRS液体培养基增菌培养。得到的菌株均在含40％甘油的MRS液体培养基中于-80℃冷冻保存。1.3菌株发酵液的制备将于甘油管中保存的菌株先在MRS琼脂平板上划线活化2～3次，然后挑取单菌落在MRS液体培养基中扩大培养18h，菌液的浓度达到108CFU/mL左右。将扩大后的菌悬液以2％(体积％)的接种量接种于胆固醇(水溶性)浓度为100μg/mL的MRS液体培养基中，于37℃培养48h后得到菌株发酵液，用于后面的测定。每个菌种做3个平行，每组实验重复3次，同时以不接菌的含有胆固醇的MRS液体培养基作阴性对照，以嗜酸乳杆菌ATCC43121作阳性对照菌株。1.4邻苯二甲醛比色法(OPA法)测菌株的降胆固醇能力1.4.1标准曲线的绘制配置胆固醇浓度为20μg/mL，40μg/mL，60μg/mL，80μg/mL，100μg/mL的胆固醇标准溶液(正己烷作为溶剂)，4℃保存备用。各取0.5mL标准溶液(0.5mL正己烷为空白对照)进行氮吹，加入2mL邻苯二甲醛溶液(浓度为50mg/100mL)，混匀10min静置，再加入1mL浓硫酸，混匀后静置10min，测550nm吸光度。以胆固醇浓度为横坐标，吸光值为纵坐标做标准曲线，计算出其线性回归方程为y＝3.47x+0.076，相关系数为R2＝0.9952。标准曲线如图4所示。1.4.2具体操作方法将上述1.3中所制备的菌株发酵液于8000r/min离心5本文档来自技高网...

【技术保护点】
植物乳杆菌ZY08，其特征是：为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，其保藏号为CGMCC NO.14847。

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌ZY08，其特征是：为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，其保藏号为CGMCCNO.14847。2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌ZY08，其特征是：植物乳杆菌ZY08的16SrDNA全序列为SEQIDNo：1所示。3.如权利要求1或2所述的植物乳杆菌ZY08在制备具有降低胆固醇功能的产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征是：所述具有降...

【专利技术属性】
技术研发人员：任大喜，郑志瑶，刘建新，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33