一株重盐碱地植物根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用。该菌株可提高柽柳在重盐碱环境中的耐盐碱能力。将本发明专利技术的重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌制成生物菌剂，接种到柽柳根系周围，经一定时间的盐分胁迫后，同不接种菌剂相比，可促进柽柳生长，提高柽柳的根系及植株含水量。因此，本发明专利技术可作为接种剂在重盐碱生境中应用，为提高成柽柳的抗盐碱能力提供了优良的菌株资源。

【技术实现步骤摘要】
一株重盐碱地植物根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于农林微生物
，具体涉及一株重盐碱地植物根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
土地盐碱化是制约农林业发展的重要因素之一。盐渍化严重限制了植物生长，从而对作物产量造成很大影响。据统计，全世界由于盐渍化造成灌溉区作物的损失多达110亿美元，且在不断增加。目前，盐渍化土壤占陆地总面积的30％左右，全世界约有10亿多hm2的土地处于盐渍化状态。根据农业部组织的第2次全国普查资料统计报道，中国的盐渍土总面积占全国可利用土地面积的4.88％，其中耕地中盐渍化面积达到920.9万hm2，占全国耕地面积的6.62％。NaHCO3与Na2CO3是内陆苏打盐碱土的主要成分，生长在此类土壤上的植物容易受到Na+、高pH及低水势的多重胁迫，造成土壤透水性与通气性降低，土壤溶液的渗透压增加，土壤养分的有效性降低，严重限制了植物的正常生长，导致地表植被群落多样性不断降低。微生物在提高植物耐盐碱能力方面发挥着重要作用。杨庆山等人申请了一株阴沟肠杆菌TIA062(CN201610330288.8)，可有效提高一定盐分条件下白蜡的耐盐性；杜传英等人采用温度筛选与表面定向培养相结合的方法对东北地区土壤中可培养耐盐芽胞杆菌进行分离和筛选，认为弯曲芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌的耐盐能力较好；王慧捷等人研究认为，番茄接种桔黄假单胞菌后，可耐酸碱，对病菌表现出较高的抗菌活性。植物根际促生细菌(Plantgrowth-promotingrhizobacteria，PGPR)是一类生存于植物根际、根表，对植物生长有促进或对病原菌有拮抗作用的有益细菌。大量试验表明，许多PGPR菌株表现出明显的促进植物生长、防治土传病害、提高植物对非生物胁迫的抗逆性、促进土壤生物修复等效果。PGPR可以通过一种或几种作用机制直接或间接促进植物生长，PGPR的直接促生机制包括：产生植物激素、溶鳞、固氮、产嗜铁素、分泌ACC脱氨酶等。然而多数植物和植物根际促生细菌不具有抵抗高盐、高盐碱的能力，尤其是在重度盐碱的情况下，植物根际环境中的有益微生物减少，导致植物根际的生物活性降低，耐盐性下降。筛选适宜重度盐碱环境下适宜植物根际促生细菌，提高植物耐盐碱性，发挥微生物-植物联合修复作用，在重盐碱地生态修复中具有巨大的应用潜力。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的问题，专利技术人针对重盐碱地植物根际土壤进行筛选，从柽柳根际土壤中获得一株重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌，可提高柽柳在重盐碱环境中的耐盐碱能力。具体的，本专利技术涉及以下技术方案：本专利技术的目的之一在于提供一株重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌(Bacillusaryabhattai)GPR018，已于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11973。本专利技术的目的之二在于提供重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌(Bacillusaryabhattai)GPR018的培养方法，尤其是包括在脱脂奶粉培养基上进行发酵的过程。本专利技术的目的之三在于提供重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌(Bacillusaryabhattai)GPR018的发酵培养物，所述发酵培养物包括阿氏芽孢杆菌GPR018菌体。优选的实施方案中，发酵培养物中阿氏芽孢杆菌GPR018菌落数为103-108cfu/mL。本专利技术的目的之四在于提供一种包含GPR018菌株或其发酵培养物的使用产品，包括微生物菌剂或组合物形式。优选的实施方案中，所述产品包括载体，所述载体可以为固体载体或液体载体；例如固体载体可以选自黏土、滑石、高岭土、蒙脱石、沸石、硅石、玉米粉。豆粉、聚乙烯醇或聚乙二醇、海藻糖等；液体载体可以为植物油、矿物油、水等。优选的实施方案中，所述产品可以为粉末形态、溶液形态、颗粒形态等。例如产品的粉末形态可以是菌株或其发酵物的冻干粉末。本专利技术的目的之四在于提供上述菌株或其发酵培养物、以及产品在重盐碱环境下促进植物生长、提高植物叶片含水量或降低植物膜质过氧化损害中的应用。优选的，所述植物为柽柳。优选的实施方案中，所述应用中，将上述菌株或其发酵培养物、以及产品施用到植物根系周围。本专利技术所述盐碱环境，主要是NaHCO3与Na2CO3为主要成分是苏打盐碱土，生长在此类土壤上的植物容易受到Na+、高pH及低水势的多重胁迫，造成土壤透水性与通气性降低，土壤溶液的渗透压增加，土壤养分的有效性降低，严重限制了植物的正常生长。本专利技术取得了以下有益效果：本专利技术的一株重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌及其应用，可提高柽柳在重盐碱环境中的耐盐碱能力。将本专利技术的重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌制成生物菌剂，接种到柽柳根系周围，经一定时间的盐分胁迫后，同不接种菌剂相比，可促进柽柳生长，提高柽柳的根系、叶片及植株含水量。因此，本专利技术可作为接种剂在重盐碱生境中应用，为提高成柽柳的抗盐碱能力提供了优良的菌株资源。附图说明图1本专利技术菌株GPR018菌落形态；图2本专利技术菌株GPR018光学显微镜镜检视野图；图3本专利技术菌株GPR018的系统发育树图4实施例3不同盐分浓度下不同菌株的所测OD600值具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明，以下所述，仅是对本专利技术的较佳实施例而已，并非对本专利技术做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本专利技术的保护范围内。实施例1重盐碱地根际促生菌的筛选分离及保藏采集黄河三角洲柽柳根际土样样品6个。通过梯度稀释法，从根际土样中分离出细菌分离物。通过三区划线法对分离到的细菌进行纯化，并通过镜检判断菌株是否纯化，对纯化后的细菌进行编号，挑取单菌落，用灭菌牙签接种于脱脂奶粉培养基平板上。37℃培养2d后，选取出现透明圈的菌落，测量菌落直径d和透明圈直径D，并计算D/d，选出比值大的进行纯化并反复验证产蛋白酶的效果，选取功能稳定的菌株进一步复筛。复筛采用Folin酚法。将1mL原发酵液加2mL质量分数为0.5％的酪蛋白液在pH值7.0、37℃水浴15min，再用质量分数为10％的三氯乙酸灭活，然后取1mL上述反应液的离心上清液加1mLFolin酚在5mL0.55mol/L的Na2CO3的碱性条件下37℃水浴15min测660nm下的吸光度值。以加灭活酶液的反应系统为空白。将复筛得到的菌株通过柽柳育苗及盆栽实验，确定一株促进柽柳生长效果最好的细菌，编号为GPR018。实施例2重盐碱地根际促生菌GPR018的生理生化及分子鉴定菌落特征及菌体形态：菌落圆形规则，菌落大，表面凸起，较湿润，微黄色，不透明，菌体较小，呈杆状，有芽孢，其菌落形态如图1所示，其光学显微镜镜检如图2所示。生理生化特征：接触酶试验阳性，柠檬酸盐利用试验阳性，水解淀粉试验阴性，V-P测定试验阴性，D-葡萄糖试验阴性，D-甘露醇试验阴性，海藻糖试验阴性，D-山梨醇试验阴性，蔗糖试验阴性，葡萄糖产气试验阴性。功能定性及定量测定：将1mL原发酵液加2mL质量分数为0.5％的酪蛋白液，在pH值7.0、37℃水浴15min，再用质量分数为10％的三氯乙酸灭活，然后取1mL上述反应液的离心上清本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)GPR018，已于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11973。

【技术特征摘要】
1.一株重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌(Bacillusaryabhattai)GPR018，已于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11973。2.权利要求1所述重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌(Bacillusaryabhattai)GPR018的培养方法，包括在脱脂奶粉培养基上进行发酵的过程。3.权利要求1所述重盐碱地根际促生阿氏芽孢杆菌(Bacillusaryabhattai)GPR018的发酵培养物，其特征在于，所述发酵培养物包括阿氏芽孢杆菌GPR018菌体。4.根据权利要求3所述的发酵培养物，其特征在于，发酵培养物中阿氏芽孢杆菌GPR018菌落数为103-108cfu/mL。5.一种包含权利要求1所述菌株或权利要求3-4任一项所述发酵培养物的使用产品，包括微...

【专利技术属性】
技术研发人员：井大炜，马海林，刘方春，刘幸红，马丙尧，杜振宇，杨庆山，周健，彭琳，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37