一种纯化有机酸肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种纯化多肽药物的方法，特别涉及一种纯化有机酸肽的方法。包括如下步骤：树脂处理：将阴离子树脂处理成有机酸根型的阴离子树脂；转盐：将多肽粗品加水溶解，加入有机酸根型的阴离子树脂，在温度为20～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2～5.5，过滤收集滤液；纯化：将转盐后收集的滤液经过反相色谱柱进行纯化，分段收集洗脱液，进行浓缩冻干或直接冻干，得到粉末状有机酸肽纯品。本发明专利技术结合有机酸根型的阴离子交换树脂和反相高效液相色谱，最终可获得纯度99％以上，收率为50％以上的有机酸肽。

A method for purification of organic acid peptide

The invention relates to a method for purifying polypeptide drugs, in particular to a method for purifying organic acid peptides. The following steps are as follows: resin treatment: anionic resin is treated as anionic resin of organic acid root type; conversion of salt: dissolving the crude polypeptide with water, adding organic acid root anionic resin, stirring at the temperature of 20~30 centigrade, controlling the pH of the solution to 2 ~ 5.5, filtering the filtrate, purifying the salt and collecting the salt. The filtrate of the set was purified by reversed-phase chromatographic column, and the eluent was segmented and concentrated, freeze-dried or directly freeze-dried to obtain powdered organic acid peptide pure product. The invention combines the anion exchange resin with the organic acid root type and the reversed phase high performance liquid chromatography, and the organic acid peptide with more than 99% purity and more than 50% yield can be obtained.

【技术实现步骤摘要】
一种纯化有机酸肽的方法
本专利技术属于多肽纯化的
，特别是涉及一种纯化有机酸肽的方法。
技术介绍
全球多肽药物的研发已广泛涉足疫苗、抗肿瘤药物、心脑血管药物、抗病毒多肽以及抗菌活性肽、诊断试剂盒的研究。多肽药物的制备主要通过人工合成，其中Fmoc法是在Boc法的基础上发展起来的一种多肽固相合成的新方法，该法具有反应条件温和、副反应少、产率高、易于检测控制反应等优点，成为合成多肽的常用方法。但该法合成的多数肽是在TFA体系下分离纯化的，获得的粗品中会含有游离的TFA和TFA盐，游离的TFA和TFA盐会影响多肽的理化性质，虽然游离的TFA通过冻干容易除去，但与肽形成的TFA盐，因存在强的离子键，难以通过冻干除去。目前主要通过离子交换法和反相色谱法实现多肽转盐。此法下获得的多肽盐包括药学上可用的盐(如醋酸盐)和其他有机酸盐。为了进一步得到纯度高的多肽产品，通常采用反相高效液相色谱，根据多肽及其类似物的亲疏水性差别，实现它们的分离。现在世界主要的化学合成多肽公司，如Bachem公司，Novabiochem公司、AmericanPeptide公司等，其最主要制备分离纯化的方法还是依赖于反相高效液相色谱。申请号为201110073257.6的专利技术专利公开了一种戈舍瑞林多肽的纯化方法，经Source柱和反相色谱柱进行梯度洗脱纯化，得到较高纯度的戈舍瑞林三氟乙酸盐，然后采用阴离子交换转盐法转成醋酸盐，最终获得纯度达98％以上，收率40-46％的纯品醋酸肽，纯化效率和收率都不理想，且已发表的文献和专利中，没有出现规模化生产具有高收率的纯化有机酸肽的方法。专利技术内容本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种简单、节约成本、纯化效率高的纯化有机酸肽的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种纯化有机酸肽的方法，包括如下步骤：步骤1、树脂处理：阴离子树脂处理成有机酸根型的阴离子树脂；步骤2、转盐：将多肽粗品加水溶解，加入步骤1的有机酸根型的阴离子树脂，在温度为20～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2～5.5，过滤收集滤液；步骤3、纯化：反相色谱柱用流动相平衡，所述流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为水和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，所述流动相B为乙腈和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，将步骤2所得的滤液上样，进行洗脱，分段收集洗脱液，将洗脱液浓缩后冻干或直接冻干，获得粉末状有机酸肽纯品。本专利技术的有益效果在于：本专利技术先采用有机酸根型的阴离子交换树脂将多肽粗品转有机酸盐，再进行反相高效液相色谱纯化，能减少有机酸根型的阴离子交换树脂的使用量，减少生产成本；本专利技术结合有机酸根型的阴离子交换树脂和反相高效液相色谱纯化可获得纯化高达99％以上，收率为50％以上的有机酸肽，不仅操作更简单，缩短制备时间、原材料便宜易得、价格成本更低，而且不存在大量使用流动相的问题，减少对环境污染，更适合规模化纯化有机酸肽的工艺方法，达到产业化要求。附图说明图1为本专利技术具体实施方式中实施例1的甲酸爱啡肽纯品纯度的HPLC图；图2为本专利技术具体实施方式中实施例2的苹果酸奥曲肽纯品纯度的HPLC图；图3为本专利技术具体实施方式中实施例3的柠檬酸利拉鲁肽纯品纯度的HPLC图；图4为本专利技术具体实施方式中实施例4的甲酸爱啡肽纯品纯度的HPLC图；图5为本专利技术具体实施方式中实施例5的苹果酸奥曲肽纯品纯度的HPLC图；图6为本专利技术具体实施方式中实施例6的柠檬酸利拉鲁肽纯品纯度的HPLC图。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。本专利技术最关键的构思在于:本专利技术先将多肽粗品转有机酸盐，再用反相高效液相色谱纯化，减少有机酸根型的阴离子交换树脂和流动相的用量，节约了成本、减少对环境污染，且纯化效率高，适合实现规模化纯化有机酸肽。本专利技术提供一种纯化有机酸肽的方法，包括如下步骤：步骤1、树脂处理：阴离子树脂处理成有机酸根型的阴离子树脂；步骤2、转盐：将多肽粗品加水溶解，加入步骤1的有机酸根型的阴离子树脂，在温度为20～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2～5.5，过滤收集滤液；步骤3、纯化：反相色谱柱用流动相平衡，所述流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为水和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，所述流动相B为乙腈和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，将步骤2所得的滤液上样，进行洗脱，分段收集洗脱液，将洗脱液浓缩后冻干或直接冻干，获得粉末状有机酸肽纯品。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：本专利技术先采用有机酸根型的阴离子交换树脂将多肽粗品转有机酸盐，再进行反相高效液相色谱纯化，能减少有机酸根型的阴离子交换树脂的使用量，减少生产成本；本专利技术结合有机酸根型的阴离子交换树脂和反相高效液相色谱纯化可获得纯化高达99％以上，收率为50％以上的有机酸肽，不仅操作更简单，缩短制备时间、原材料便宜易得、价格成本更低，而且不存在大量使用流动相的问题，减少对环境污染，更适合规模化纯化有机酸肽的工艺方法，达到产业化要求。进一步的，所述阴离子树脂为氢氧根型树脂、醋酸根型树脂或氯型树脂。进一步的，所述步骤3中的有机酸为含羧基的有机酸，所述有机酸包括甲酸、苹果酸或柠檬酸。进一步的，所述步骤2中多肽粗品：水：有机酸根型的阴离子树脂的重量比为1：100～450：10～250。进一步的，所述步骤3中的反相色谱柱为C18填料，粒径为5～10μm，孔径为100～120A°，流速为8～10mL/min。进一步的，所述步骤3中的洗脱为等度洗脱，所述流动相A与所述流动相B的体积比为90:10～40:60。进一步的，所述步骤3中的洗脱为等度洗脱，所述流动相A与所述流动相B的体积比为80:20～55:45。进一步的，所述步骤3中的洗脱为梯度洗脱，所述流动相B％的变化率为0.05％～2％/min。进一步的，所述步骤3中的有机酸肽为多肽的有机酸盐或包含螯合矿物质的有机酸肽复合物，所述矿物质包括常量元素和微量元素。实施例1一种纯化甲酸爱啡肽的方法，包括如下步骤：步骤1、树脂处理：用2个床体积的1mol/L甲酸溶液，以2cm/min的速度，淋洗氢氧根型树脂，淋洗至淋洗液pH＜2，再以超纯水洗至pH＞4.8，使氢氧根型阴离子树脂转为甲酸根型阴离子树脂，过滤，收集甲酸根型阴离子树脂。步骤2、转盐：将1g爱啡肽粗品加100ml水溶解，加入步骤1的甲酸根型的阴离子树脂10g，在温度为20℃的条件下搅拌1h，控制溶液的pH为2，过滤收集滤液。步骤3、纯化：将粒径为5μm，孔径为100A°的反相C18柱用流动相平衡，所述流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为水和质量分数为0.05％的甲酸的混合溶液，所述流动相B为乙腈和质量分数为0.05％的甲酸的混合溶液，将步骤2所得的滤液上样，进行等度洗脱，流速为8mL/min，流动相A与流动相B的体积比的变化范围为80:20，检测波长220nm，分段收集洗脱液，直接冻干后获得粉末状甲酸爱啡肽纯品25mg，收率为50％，纯度达到99.346％，甲酸爱啡肽纯品纯度的HPLC图谱如图1所示。实施例2一种纯化苹果酸奥曲肽的方法，包括如下步骤：步骤1、树脂处理：用3个床体积本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纯化有机酸肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、树脂处理：阴离子树脂处理成有机酸根型的阴离子树脂；步骤2、转盐：将多肽粗品加水溶解，加入步骤1的有机酸根型的阴离子树脂，在温度为20～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2～5.5，过滤收集滤液；步骤3、纯化：反相色谱柱用流动相平衡，所述流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为水和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，所述流动相B为乙腈和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，将步骤2所得的滤液上样，进行洗脱，分段收集洗脱液，将洗脱液浓缩后冻干或直接冻干，获得粉末状有机酸肽纯品。

【技术特征摘要】
1.一种纯化有机酸肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、树脂处理：阴离子树脂处理成有机酸根型的阴离子树脂；步骤2、转盐：将多肽粗品加水溶解，加入步骤1的有机酸根型的阴离子树脂，在温度为20～30℃的条件下搅拌，控制溶液的pH为2～5.5，过滤收集滤液；步骤3、纯化：反相色谱柱用流动相平衡，所述流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为水和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，所述流动相B为乙腈和质量分数为0.05％～1％的有机酸的混合溶液，将步骤2所得的滤液上样，进行洗脱，分段收集洗脱液，将洗脱液浓缩后冻干或直接冻干，获得粉末状有机酸肽纯品。2.根据权利要求1所述的纯化有机酸肽的方法，其特征在于，所述阴离子树脂为氢氧根型树脂、醋酸根型树脂或氯型树脂。3.根据权利要求1所述的纯化有机酸肽的方法，其特征在于，所述步骤3中的有机酸为含羧基的有机酸，所述有机酸包括甲酸、苹果酸或柠檬酸。4.根据权利要求1所述的纯化有机酸肽的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：林健勇，符友伟，叶燕军，滕景斌，张娜，张会会，谢治平，张旭，
申请(专利权)人：福州博中技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35