利用双试剂的生物样品发光测量制造技术

在利用两种不同的发光试剂测量生物样品的发光的方法中，晃动样品以改善与第二发光试剂的混合，允许注入第二试剂和测量所得发光活性之间的延迟时间缩短。改善的混合也可以缩短测量时间，从而在测定大量样品时提高了产量。

Bioluminescence measurement of biological samples with double reagents

In the method of measuring the luminescence of biological samples with two different luminescent reagents, the sloshing sample is used to improve the mixture of the second luminescent reagents, and the delay time between the injection of second reagents and the measured luminescence activity is shortened. The improved mixing can also shorten the measuring time, thus increasing the yield when measuring a large number of samples.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用双试剂的生物样品发光测量相关申请本申请要求于2015年7月24日提交的美国专利申请No.14/808,593的优先权，该美国专利申请的内容通过引用方式整体并入本文。
本专利技术一般涉及用于测量生物样品的发光的方法，特别是使用如萤火虫萤光素酶底物和海肾荧光素酶底物等两种不同的发光试剂，并且涉及用于实施这种方法的部件、设备和系统。
技术介绍
用于分析许多类型的样品的有用模式是样品的发光(光发射)的测量。例如，在生物样品的情况下，发光在生物化学反应、细胞生理学、基因表达等的研究中是有用的。样品中的发光可以因称为萤光素酶的报告酶(reporterenzyme)类型的活性而产生，其随着根据特定应用的需要注射另一种试剂、辅酶和/或催化剂而产生。发光测量可能涉及使用单一类型的萤光素酶。然而，经常期望需要使用两种不同类型的萤光素酶(例如萤火虫萤光素酶和海肾荧光素酶)的所谓的双报告测定法，这是由于该测定法能够使实验变异性最小化从而提高所获得的数据的可靠性。在猝灭剂抑制或消除与第一类荧光素酶反应所产生的信号的同时，第二类萤光素酶产生随后的信号。在双报告测定方案的一个实例中，第一类荧光素酶存在于注射前样品中，然后将产生第一信号的试剂加入到样品中。在通常为几秒钟(例如2秒)的延迟时间段之后，在一段时间段(例如十秒)上测量所得到的发光活性。然后将从第二类萤光素酶产生第二信号的试剂与猝灭剂一起分配到样品中。在同样通常为几秒钟的第二延迟时间段之后，在一段时间段(例如十秒)上测量所得的发光活性。可以使用单管光度计或微孔板(多孔光学读取板)光度计来执行该双报告测定方案。双报告测定的一个重要方面是猝灭剂与样品的混合。在混合过程(在试剂注射之后且在测量第二萤光素酶的活性之前)所分配的时间段上，混合需要足够有效，以提供由第一萤光素酶产生的信号的有效猝灭，从而允许从第一信号中分离出第二信号，从而获得高质量的数据。例如，在测量第二信号之前，该过程可以要求第一信号被抑制4log(对数)(超过10,000倍)。当使用常规的相对高的试剂注入速度操作单管或微孔板光度计时，上述的约2秒的延迟(混合)时间段常常足以有效地混合。高的注射速度，例如几百微升每秒(μL/sec)量级的流量，经常赋予样品管或井穴足够的浊度，以在短时间段内产生有效的混合。然而，对于许多微孔板应用来说，由于例如确保高分配精度，例如低至1-μL的增量，期望的是较低的注射速度。由于较低的注射速度所导致的较低的浊度，短的延迟时间段可能不能提供足够的时间进行有效的混合，因此可能无法提供足够的时间来进行适当的猝灭。因此，需要提供一种在某些应用中增强或加速混合的方法，例如那些利用低注射速度和/或受限于短混合时间段的应用。此外，当使用微孔板对大量样品进行测定时，在长积分时间(例如10秒)内对每个样品进行发光测量可能需要大量的总读板时间。加速混合可以减少在每个样品上进行发光测量所需的时间量。因此，需要提供一种在期望更高产量的应用中增强或加速混合的方法。
技术实现思路
为了全部或部分地解决上述问题和/或本领域技术人员可能已经观察到的其他问题，本公开提供了如在下面阐述的实施方式中通过示例的方式所描述的方法、过程、系统、设备、仪器和/或装置。根据一个实施例，一种用于测量生物样品的发光的方法包括：将生物样品分配到井穴中；将第一试剂分配到井穴中，其中样品与第一试剂反应以发射第一发光；在第一延迟时间段之后，在第一测量时间段上在发光检测器处测量第一发光；将第二试剂分配到井穴中，其中样品与第二试剂反应以发射第二发光；在第二延迟时间段之后，在第二测量时间段上在发光检测器处测量第二发光；以及晃动井穴以增强第二试剂与样品的混合，其中在选自由以下时间构成的组的时间开始晃动：在分配第二试剂时；在第二延迟时间段期间；以及在测量第二发光时。在一些实施例中，第一试剂和第二试剂以500μL/sec或更低、或50-500μL/sec的范围、或100μL/sec或更低、或50-500μL/sec的范围或者大约100μL/sec的流量进行分配。根据另一个实施例，一种样品分析设备包括：样品载体，其被配置用于晃动生物样品；液体分配系统，其被配置用于分配选定的试剂以与所述生物样品接触；发光检测器，其被配置用于测量从样品发射的发光；以及计算装置，其被配置用于控制样品载体、液体分配系统和液体分配系统以执行本文公开的任一方法。本专利技术的其它装置、设备、系统、方法、特征和优点对于本领域技术人员来说在研究以下附图和详细描述后将会或将变得显而易见。所有这些附加的系统、方法、特征和优点旨在被包括在本说明书内，在本专利技术的范围内，并由所附权利要求书保护。附图说明参考以下附图可以更好地理解本专利技术。附图中的部件不一定按比例绘制，而是将重点放在说明本专利技术的原理上。在附图中，贯穿不同的视图，相似的附图标记表示相应的部分。图1是根据一些实施例的样品分析设备的实例的示意图。图2是根据一些实施例的样品分析系统或设备的实例的示意图。图3是根据一些实施例的注射器或注射器/读取器组件的实例的透视图。图4是根据一些实施例的绘制出在五个实验期间获得的发光信号的曲线图，其中将LARII试剂添加到样品中，随后将STOP&试剂添加到样品中，并晃动样品。具体实施方式图1是根据一些实施例的样品分析设备或系统100的实例的示意图。样品分析设备100被配置用于对例如化学化合物、生物化合物、生物细胞或它们的组分等样品进行光学测量。在本文公开的具体实施例中，光学测量基于发光。如本文所用，术语“发光”可以包括化学发光或生物发光。在一些实施例中，样品分析设备100配置为专用光度计。然而，在其他实施例中，样品分析设备100也可以配置为基于例如荧光、吸光度、光谱、例如细胞成像等显微镜成像来执行光学测量。例如，样品分析设备100配置为使得用户能够选择要执行的期望类型的光学测量。用户能够重新配置样品分析设备100的光学器件以执行期望类型的发光、荧光或吸光度测量。因此，在一些实施例中，样品分析设备100可以是多模式读取器。如本领域技术人员所理解的，通过使得用户能够从大量可用的不同盒中选择应用特定盒，并且将所选择的盒加载到多模式读取器中以便建立针对所需应用的光学和电气电路来重新配置多模式读取器。将所选择的盒与仪器联接，由此仪器被适当地配置用于执行所选择的实验。盒可以容纳针对特定类型应用或为特定类型应用优化的光学器件。容纳在盒内的内部光学器件可以通过盒的壳体的光学端口与容纳在仪器内的外部光学器件进行通信。取决于与这种盒相关联的光学测量的类型，一些盒可以附加地包括内部光源和/或光检测器。基于盒的多模式读取器的实例在以下文献中进行了描述：美国专利No.8,968,658；8,496,879；8,119,066；和6,891,618；以及美国专利申请No.2014/0191138；2013/0119277；2011/0278472；2005/0105080；和2005/0012929，它们的全部内容通过引用方式整体并入本文。通常，基于光学的样品分析仪器中提供的各种部件的结构和操作是本领域技术人员了解的，因此在本文中仅简要描述以便于理解本公开的主题。在所示的实施例中，样品分析设备100包括配置用于支持(或保持)一个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于测量生物样品的发光的方法，所述方法包括：将生物样品分配到井穴中；将第一试剂分配到所述井穴中，其中所述生物样品与所述第一试剂反应以发射第一发光；在第一延迟时间段之后，在第一测量时间段上在发光检测器处测量所述第一发光；将第二试剂分配到所述井穴中，其中所述生物样品与所述第二试剂反应以发射第二发光；在第二延迟时间段之后，在第二测量时间段上在所述发光检测器处测量所述第二发光；以及晃动所述井穴以增强所述第二试剂与所述生物样品的混合，其中在选自由以下时间构成的组的时间开始晃动：在分配所述第二试剂时；在所述第二延迟时间段期间；以及在测量所述第二发光时。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.24 US 14/808,5931.一种用于测量生物样品的发光的方法，所述方法包括：将生物样品分配到井穴中；将第一试剂分配到所述井穴中，其中所述生物样品与所述第一试剂反应以发射第一发光；在第一延迟时间段之后，在第一测量时间段上在发光检测器处测量所述第一发光；将第二试剂分配到所述井穴中，其中所述生物样品与所述第二试剂反应以发射第二发光；在第二延迟时间段之后，在第二测量时间段上在所述发光检测器处测量所述第二发光；以及晃动所述井穴以增强所述第二试剂与所述生物样品的混合，其中在选自由以下时间构成的组的时间开始晃动：在分配所述第二试剂时；在所述第二延迟时间段期间；以及在测量所述第二发光时。2.如权利要求1所述的方法，包括以选自由以下流量构成的组的流量分配所述第一试剂和分配所述第二试剂：500μL/sec或更小；从50到500μL/sec的范围；100μL/sec或更小；从50到500μL/sec的范围；以及约100μL/sec。3.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一延迟时间段和所述第二延迟时间段各自在大约1秒到2秒的范围内。4.如权利要求1所述的方法，其中所述第一测量时间段和所述第二测量时间段各自在大约5秒到10秒的范围内。5.如权利要求1所述的方法，其中所述第二延迟时间段和所述第二测量时间段中的至少一者短于约2秒，或短于约1秒。6.如权利要求1所述的方法，其中所述第二测量时间段是大约1秒。7.如权利要求1所述的方法，其中在所述第二延迟时间段之后开始测量所述第二发光。8.如权利要求1所述的方法，其中在所述第二延迟时间段期间并且在晃动所述井穴的同时开始测量所述第二发光。9.如权利要求8所述的方法，包括在所述第二延迟时间段之后继续晃动所述井穴。10.如权利要求1所述的方法，包括在所述第二延迟时间段期间继续晃动所述井穴。11.如权利要求1所述的方法，其中所述第二试剂包括有效诱导所述第二发光的发射的发光试剂和有效抑制所述第一发光的发射的猝灭剂。12.如权利要求1所述的方法，其中所述第一试剂包含萤火虫萤光素酶底物，且所述第二试剂包含海肾荧光素酶底物。13.如权利要求1所述的方法，其中晃动所述井穴包括以回转方式摇动所述井穴。14.如权利要求1所述的方法，其中晃动所述井穴包括操作支撑所述井穴的机动的样品载体。15.如权利要求1所述的方法，其中所述井穴是多孔板的多个井穴中的一个井穴，并且所述方法进一步包括对于分别容纳在所述多孔板的一个或多个其他井穴中的一个或多个其他样品重复权利要求1的步骤。16.如权利要求1所述的方法，其中分配所述第一试剂的步骤包括从与第一试剂储器连通的第一注射器针注射所述第一试剂，并且分配所述第二试剂的步骤包括从与第二试剂储器连通的第二注射器针注射所述试剂。17.如权利要求16所述的方法，其中所述第一注射器针和所述第二注射器针彼此邻近地安装在注射器组件中，并且所述方法还...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·斯托克，格奥尔格·克龙贝格尔，迈克尔·卡茨林格，
申请(专利权)人：分子装置有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US