一种木瓜SOD的提取及纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种木瓜SOD的提取及纯化方法，其通过对木瓜榨取的原汁依次进行浓缩、醇沉、浸提、冷冻离心处理之后得到粗酶液，然后再将粗酶液采用盐析法的方式进行进一步纯化，由此得到木瓜纯化SOD。本方法操作简单，可控性好，重复性好，可以进行规模化生产。

A method for the extraction and purification of SOD of papaya

The invention provides a method for extracting and purifying the SOD of papaya. By concentrating, alcohol precipitation, extraction and freezing centrifugation in the juice extracted from papaya, the crude enzyme is further purified by salting out the crude enzyme solution, and SOD is purified by papaya purification. The method is simple, controllable and repeatable, and can be used for large-scale production.

【技术实现步骤摘要】
一种木瓜SOD的提取及纯化方法
本专利技术涉及一种SOD提取工艺，具体是一种木瓜SOD的提取及纯化方法。
技术介绍
超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。外源SOD一旦进入人体内，进入血液，进入微循环，就能有效地保护机体细胞里的脂质、蛋白质、DNA、细胞膜等生命物质，使它们免受人体内多余的超氧阴离子自由基和羟自由基的破坏，增强机体细胞和各种重要器官的免疫功能，对治疗自身免疫性疾病，病毒性疾病，心血管疾病，如各种炎症、高血压、血栓病、糖尿病、风湿关节炎、红斑狼疮和癌症等，有特殊功效，对辐射有防护作用。所以，SOD被称为是21世纪最有开发前途的药用酶。由于动物性SOD的排他性、不易常温保存、艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险，所以国际卫生组织呼吁：立刻停止动物性SOD的使用，因此我们更倾向与从植物及其果实中提取SOD，其中木瓜中含有较为丰富的SOD，是一种理想的SOD提取原料。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种木瓜SOD的提取及纯化方法。本专利技术的具体技术方案为：一种木瓜SOD的提取及纯化方法，包括以下步骤：（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理；（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入pH7.850mmol/L磷酸盐缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h；（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；（4）、向一定体积的粗酶液中加入中性盐至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；（5）、继续向上清液中加入中性盐至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化SOD，将纯化SOD取样溶于磷酸盐缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。在步骤（1）中，醇沉液的含醇量为50-60%，醇沉温度为60℃。在步骤（2）和（5）中，所述磷酸缓冲液采用磷酸钾缓冲液或磷酸钠缓冲液。在步骤（2）中，浸提时采用3-4层纱布过滤。在步骤（5）中，所述中性盐采用硫酸按、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠中的任意一种。本专利技术通过对木瓜榨取的原汁依次进行浓缩、醇沉、浸提、冷冻离心处理之后得到粗酶液，然后再将粗酶液采用盐析法的方式进行进一步纯化，由此得到木瓜纯化SOD。本方法操作简单，可控性好，重复性好，可以进行规模化生产。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明。下述实施例仅为本专利技术的典型实施例，并不用于限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。实施例一：本专利技术的木瓜SOD的提取及纯化方法，包括以下步骤：（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理，醇沉液的含醇量为50%，醇沉温度为60℃；（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入pH7.850mmol/L磷酸钾缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h，采用3层纱布过滤；（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；（4）、向一定体积的粗酶液中加入硫酸铵至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；（5）、继续向上清液中加入硫酸铵至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化SOD，将纯化SOD取样溶于磷酸钾缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。实施例二：本专利技术的木瓜SOD的提取及纯化方法，包括以下步骤：（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理，醇沉液的含醇量为60%，醇沉温度为60℃；（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入pH7.850mmol/L磷酸钠缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h，采用4层纱布过滤；（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；（4）、向一定体积的粗酶液中加入硫酸镁至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；（5）、继续向上清液中加入硫酸镁至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化SOD，将纯化SOD取样溶于磷酸钠缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。实施例三：本专利技术的木瓜SOD的提取及纯化方法，包括以下步骤：（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理，醇沉液的含醇量为55%，醇沉温度为60℃；（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入pH7.850mmol/L磷酸钾缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h，采用4层纱布过滤；（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；（4）、向一定体积的粗酶液中加入硫酸钠至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；（5）、继续向上清液中加入硫酸钠至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化SOD，将纯化SOD取样溶于磷酸钾缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种木瓜SOD的提取及纯化方法，其特征是包括以下步骤：（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理；（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入pH7.8 50mmol/L磷酸盐缓冲液，放在 0‑4℃环境中浸提3h；（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；（4）、向一定体积的粗酶液中加入中性盐至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；（5）、继续向上清液中加入中性盐至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化SOD，将纯化SOD取样溶于磷酸盐缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。

【技术特征摘要】
1.一种木瓜SOD的提取及纯化方法，其特征是包括以下步骤：（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理；（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入pH7.850mmol/L磷酸盐缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h；（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；（4）、向一定体积的粗酶液中加入中性盐至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；（5）、继续向上清液中加入中性盐至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦俊超，
申请(专利权)人：韦俊超，
类型：发明
国别省市：广西,45