The invention discloses a tyrosinase mutant with improved enzyme activity and stability and a construction method thereof, belonging to the field of gene engineering technology. The mutant of the present invention is based on the amino acid shown in SEQ ID NO.2 187, and is obtained from the transformation of valine into threonine. The enzyme activity of the mutant enzyme increased by 38% compared with that of the mutant enzyme, and the half-life (t1/2) at 60 C increased by 2.9 times than that in the mutant stage. The invention shows that 10 amino acid residues are transformed into cysteine and natural tyrosinase 30 - bit cysteine residues to form the correct two sulfur bonds, thus improving the stability and catalytic efficiency of the enzyme, and strengthening the industrial application potential of the enzyme.
【技术实现步骤摘要】
一种酶活和稳定性提高的酪氨酸酶突变体及其构建方法
本专利技术涉及一种酶活和稳定性提高的酪氨酸酶突变体及其构建方法，属于基因工程
技术介绍
酪氨酸酶(Tyrosinase,EC1.14.18.1)是一种含有双铜离子的金属酶。酪氨酸酶是多功能酶，在氧气的参与下可以催化单酚生成二元酚(一元酚酶活性)；催化二元酚生成相应的醌(二元酚酶活性)。而醌在经过一系列酶催化及非酶催化的氧化还原反应后最终生成黑色素。酪氨酸酶广泛的存在于动植物及微生物中。一般认为人类的毛发、眼睛、皮肤上的颜色都是由酪氨酸酶决定的，因而大多数化妆品行业通过研究酪氨酸酶酶抑制剂来开发美白产品。人体内如果酪氨酸酶代谢异常将会导致一系列疾病的发生，例如白癜风和白化病等。同时禽类的羽毛，及昆虫甲壳的颜色也酪氨酸酶相关，它的产物黑色素可以与蛋白交联结合成坚硬的支架，起到保护作用。在植物体内，酪氨酸酶可以催化生成一些对人体有益的物质，例如茶多酚。此外，水果表面受损时的褐变也与酪氨酸酶相关，食品行业研究开发酪氨酸酶抑制剂来保鲜水果。此外，酪氨酸酶在工业上也有重要的应用。首先，酪氨酸酶可以催化酪氨酸合成左旋多...
【技术保护点】
一种酪氨酸酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种酪氨酸酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述突变体的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。4.一种含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体。5.一种表达权利要求1所述酪氨酸酶突变体的基因工程菌。6.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以大肠杆菌为宿主。7.一种制备权利要求5所述基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法是在SEQIDNO.2所示氨基酸序列的基础上，将187位氨基酸由缬氨酸突变成苏氨酸，得到重组基因，将重组基因连到表达载体得到重组质粒，重组质粒...
【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，杨套伟，张显，徐美娟，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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