The invention discloses a constant temperature fluorescent detection method and a detection kit for prawn peach pull virus (TSV) RAA. The detection kit includes a positive primer SEQ ID NO.1, a reverse primer SEQ ID NO.2, a specific fluorescent probe SEQ ID NO.3, a reaction liquid, a reverse transcriptase, a recombinant polymerase and a control product. The kit has strong specificity, high detection sensitivity, can reach 0.10fg/ mu L, high accuracy, reliable, simple and quick operation, suitable for field detection, and has extensive application scene.
【技术实现步骤摘要】
对虾桃拉病毒(TSV)的RAA恒温荧光检测方法及试剂
本专利技术属于分子生物学
,涉及海洋水产养殖业的检测方法,具体涉及一种对虾桃拉病毒的RAA恒温荧光检测方法及试剂盒。
技术介绍
桃拉病毒(TauraSyndromeVirus,TSV)是一种给对虾养殖业造成极大危害的病原。该病毒可感染对虾种类众多,诸如:凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)、细角滨对虾(L.stylirostris)、中国对虾(Fenneropenaeuschinensis)、斑节对虾(P.monodon)和日本囊对虾(Marsupenaeusjaponicus)等,其中以凡纳滨对虾最为敏感,感染后造成对虾死亡率高达40-95%。TSV为单链RNA病毒,目前归类于细小RNA病毒科中一个新命名的蟋蟀麻痹病毒属。近几年随着我国引进凡纳滨对虾并进行大规模养殖,该病毒也传入了我国,给我国的对虾养殖业造成了危害。迄今仍然没有能有效控制桃拉病毒疫情的技术措施,国内外学者普遍认为,综合预防是相对有效的方法,即尽早发现疾病并采取诸多措施阻止病毒传播。因此,建立灵敏、准确、快捷、方便的TSV病原检测方法是减少虾肝肠胞虫发生和危害的重要途径。目前对TSV引起的对虾病害尚无有效的治疗方法,只能以预防为主;而这又主要依赖于早期快速的诊断和筛查。近年来基于临床组织病理学、免疫学以及PCR技术等的各种诊断方法已被用于TSV的检测。但是现有的这些方法都存在一定的不足,例如:基于组织病理学的方法不仅操作繁琐、费时,而且灵敏度较低;基于免疫学的方法虽然具有敏感性高、检测快速等特点,可用于大批标本的检 ...
【技术保护点】
一种对虾桃拉病毒(TSV)核酸的检测试剂盒,包括:对虾桃拉病毒正向引物、反向引物以及特异性荧光探针,其中所述对虾桃拉病毒正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示、所述对虾桃拉病毒反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3,其5’端标记有荧光报告基团,3’端标记有荧光淬灭基团。
【技术特征摘要】
1.一种对虾桃拉病毒(TSV)核酸的检测试剂盒,包括:对虾桃拉病毒正向引物、反向引物以及特异性荧光探针,其中所述对虾桃拉病毒正向引物核苷酸序列如SEQIDNO.1所示、所述对虾桃拉病毒反向引物核苷酸序列如SEQIDNO.2所示,所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3,其5’端标记有荧光报告基团,3’端标记有荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒,所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、TexasRed或LCRED460中的一种,荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。3.根据权利要求1和2所述的核酸检测试剂盒,还包括引物混合液、特异性荧光探针、ABuffer、BBuffer、RAA干粉试剂、对虾桃拉病毒标准品和DEPC处理水中至少一种。4.根据权利要求3所述的试剂盒,所述的逆转录体系由RTE逆转录酶、RNA酶抑制剂组成。5.根据权利要求3所述的试剂盒,其中,所述ABuffer为20%PEG;BBuffer为280mMMgAc。6.根据权利要求5所述的试剂盒,其中,所述的RAA干粉试剂的成分如下:1mmol/LdNTP、90ng/μLSSB蛋白、120ng/μLrecA重...
【专利技术属性】
技术研发人员:程奇,钱冬,黄震巨,张建勋,肖文,余国君,陶智勇,徐锦余,霍胜楠,沈弘,郑晓叶,郑天伦,沈伟良,吕文浩,
申请(专利权)人:杭州众测生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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