一种组合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于细胞生物学领域，尤其涉及一种组合物及其制备方法与应用。本发明专利技术提供了一种组合物，本发明专利技术还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明专利技术还提供了一种上述组合物或上述制备方法得到的产品在体外培养免疫细胞中的应用。本发明专利技术提供的技术方案中，组合物和/或制备方法制得的产品成分明确，不含动物源成分，具有：适合免疫细胞生长、无病原污染、不同批次间差异小、质量可控以及成本低的优点。解决了现有技术中，无血清培养基，主要为进口产品，具有价格昂贵的技术缺陷。本发明专利技术提供的技术方法，有效降低了免疫细胞扩增培养成本，对于肿瘤细胞免疫治疗起到了很好的推广促进作用。

A composition and its preparation method and Application

The invention belongs to the field of cell biology, in particular to a composition, preparation method and application thereof. The invention provides a composition, and the invention also provides a preparation method of the composition, and the invention also provides an application of a product obtained by the above preparation method in the culture of immune cells in vitro. In the technical scheme provided by the invention, the composition of the composition and / or the preparation method is clear and contains no animal source components, and has the advantages of suitable for immune cell growth, no pathogen contamination, small difference between different batches, controlled quality and low cost. The existing serum-free medium is mainly imported products with high price and technical defects. The technical method provided by the invention effectively reduces the cost of immune cell expansion and cultivation, and plays a good role in promoting and promoting tumor cell immunotherapy.

【技术实现步骤摘要】
一种组合物及其制备方法与应用
本专利技术属于细胞生物学领域，尤其涉及一种组合物及其制备方法与应用。
技术介绍
肿瘤细胞免疫治疗是继手术切除、化疗和放疗外的新一代肿瘤治疗技术，它的原理是向肿瘤患者体内输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，特异性或非特异性直接杀伤肿瘤细胞或激发机体免疫应答杀伤肿瘤细胞。肿瘤细胞免疫治疗包括抽血、培养和回输三个过程。首先，抽取患者的血液；然后，分离血液中的外周血单个核细胞，在细胞因子的作用下扩增培养；最后，回输到患者体内。免疫细胞扩增培养是整个过程中耗时最长的步骤，免疫细胞培养需要消耗大量培养基。目前，实验室常用的免疫细胞培养基由基础培养基加血清组成。基础培养基用于提供基础营养物质，常用RPMI-1640；血清用于提供激素、结合蛋白等基础培养基中没有的功能分子，常用10％胎牛血清。动物血清供应充足，价格相对便宜，但由于培养后的细胞要回输人体，可能导致人体排异反应，且可能传播疾病。人血清供应有限，价格昂贵，也有传播疾病风险。血清中含有的未知成分可能带来未知的不良影响。因此，用无血清培养基代替血清培养基是发展趋势。现有技术中的无血清培养基，主要为进口产品，具有价格昂贵的技术缺陷，导致免疫细胞扩增培养成本高昂，对于肿瘤细胞免疫治疗有很大的阻滞作用。因此，研发出一种组合物及其制备方法与应用，用于解决现有技术中，无血清培养基，主要为进口产品，具有价格昂贵的技术缺陷，导致免疫细胞扩增培养成本高昂，对于肿瘤细胞免疫治疗有很大的阻滞作用，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种组合物及其制备方法与应用，用于解决现有技术中，无血清培养基，主要为进口产品，具有价格昂贵的技术缺陷。本专利技术提供的技术方法，有效降低了免疫细胞扩增培养成本，对于肿瘤细胞免疫治疗起到了很好的推广促进作用。本专利技术提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：RPMI-1640、NaHCO3、HEPES、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚油酸、乙醇胺、亚硒酸钠、人血白蛋白、人转铁蛋白、人胰岛素和植物血凝素。优选地，所述组合物的原料包括：RPMI-164010.4g/L、NaHCO32g/L、HEPES2.38～5.95g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸钠110mg/L、亚油酸5～10mg/L、乙醇胺1～3mg/L、亚硒酸钠5～10μg/L、人血白蛋白0.5～2g/L、人转铁蛋白5～20mg/L、人胰岛素5～20mg/L和植物血凝素2～20mg/L。优选地，所述组合物的原料包括：RPMI-164010.4g/L、NaHCO32g/L、HEPES4.76g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸钠110mg/L、亚油酸7.5mg/L、乙醇胺2mg/L、亚硒酸钠7.5μg/L、人血白蛋白1g/L、人转铁蛋白10mg/L、人胰岛素10mg/L和植物血凝素10mg/L。本专利技术还提供了一种包括以上任意一项所述组合物的制备方法，所述制备方法为：步骤一、备液：配制人转铁蛋白PBS储液，配置植物血凝素PBS储液，配制人胰岛素HCl储液，配制亚硒酸钠水溶液和乙醇胺水溶液，配制亚油酸-人血白蛋白混合液；步骤二、溶解：将RPMI-1640、NaHCO3、HEPES、L-谷氨酰胺和丙酮酸钠溶于水中，得第一产物；步骤三、混合：所述第一产物与所述人转铁蛋白PBS储液、所述植物血凝素PBS储液、所述人胰岛素HCl储液、所述亚硒酸钠水溶液、所述乙醇胺水溶液和所述亚油酸-人血白蛋白混合液混合，得第二产物；步骤四、调pH：调节所述第二产物的pH至7.2，得第三产物；步骤五、定容：所述第三产物定容，得产品。优选地，所述人胰岛素HCl储液中，所述HCl的浓度为0.01M；所述亚油酸—人血白蛋白混合液中，所述人血白蛋白的浓度为20％。优选地，所述调pH步骤中，调节pH所使用的试剂为HCl溶液和/或NaOH溶液；所述HCl溶液的浓度为1M，所述NaOH溶液的浓度为1M。优选地，所述第一产物与所述产品的体积比为4:5。优选地，所述定容步骤后，还包括灭菌步骤；所述第三产物定容后灭菌得产品。优选地，所述灭菌的方法为：用正压过滤器以0.22μm孔的滤膜过滤杀菌。本专利技术还提供了一种包括以上任意一项所述的组合物或以上任意一项所述制备方法得到的产品在体外培养免疫细胞中的应用。综上所述，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：RPMI-1640、NaHCO3、HEPES、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚油酸、乙醇胺、亚硒酸钠、人血白蛋白、人转铁蛋白、人胰岛素和植物血凝素。本专利技术还提供了一种包括以上任意一项所述组合物的制备方法，所述制备方法为：备液、溶解、混合、调pH和定容。本专利技术还提供了一种上述组合物或上述制备方法得到的产品在体外培养免疫细胞中的应用。本专利技术提供的技术方案中，组合物和/或制备方法制得的产品成分明确，不含动物源成分，具有：适合免疫细胞生长、无病原污染、不同批次间差异小、质量可控以及成本低的优点。解决了现有技术中，无血清培养基，主要为进口产品，具有价格昂贵的技术缺陷。本专利技术提供的技术方法，有效降低了免疫细胞扩增培养成本，对于肿瘤细胞免疫治疗起到了很好的推广促进作用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1为实施例1～实施例3制得的产品1～产品3在体外培养免疫细胞过程中，细胞的增殖速率对比图；图2为实施例1～实施例3制得的产品1～产品3在体外培养免疫细胞过程中，细胞表型对比图；图3为实施例1～实施例3制得的产品1～产品3培养所得的体外培养免疫细胞，对于肿瘤细胞的杀伤作用示意图。具体实施方式本专利技术提供了一种组合物及其制备方法与应用，用于解决现有技术中，无血清培养基，主要为进口产品，具有价格昂贵的技术缺陷。本专利技术提供的技术方法，有效降低了免疫细胞扩增培养成本，对于肿瘤细胞免疫治疗起到了很好的推广促进作用。下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。为了更详细说明本专利技术，下面结合实施例对本专利技术提供的一种组合物及其制备方法与应用，进行具体地描述。实施例1称取人转铁蛋白100mg溶于10mL20mMPBS(pH7.4)溶液中，配制人转铁蛋白PBS储液1，所得人转铁蛋白PBS储液1的浓度为10mg/mL。称取植物血凝素100mg溶于10mL20mMPBS(pH7.4)溶液中，配制植物血凝素PBS储液1，所得植物血凝素PBS储液1的浓度为10mg/mL。称取人胰岛素100mg溶于10mL0.01mol/L的HCl溶液中，配制人胰岛素HCl储液1，所得人胰岛素HCl储液1的浓度为10mg/mL。称取亚硒酸钠7.5mg溶于100mL注射用水中，配制亚硒酸钠水溶液1，所得亚硒酸钠水溶液1浓度为75μg/mL。称取乙醇胺200μL溶于10mL注射用水，配制乙醇本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：RPMI‑1640、NaHCO3、HEPES、L‑谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚油酸、乙醇胺、亚硒酸钠、人血白蛋白、人转铁蛋白、人胰岛素和植物血凝素。

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：RPMI-1640、NaHCO3、HEPES、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚油酸、乙醇胺、亚硒酸钠、人血白蛋白、人转铁蛋白、人胰岛素和植物血凝素。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：RPMI-164010.4g/L、NaHCO32g/L、HEPES2.38～5.95g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸钠110mg/L、亚油酸5～10mg/L、乙醇胺1～3mg/L、亚硒酸钠5～10μg/L、人血白蛋白0.5～2g/L、人转铁蛋白5～20mg/L、人胰岛素5～20mg/L和植物血凝素2～20mg/L。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：RPMI-164010.4g/L、NaHCO32g/L、HEPES4.76g/L、L-谷氨酰胺300mg/L、丙酮酸钠110mg/L、亚油酸7.5mg/L、乙醇胺2mg/L、亚硒酸钠7.5μg/L、人血白蛋白1g/L、人转铁蛋白10mg/L、人胰岛素10mg/L和植物血凝素10mg/L。4.一种包括权利要求1至3任意一项所述组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：步骤一、备液：配制人转铁蛋白PBS储液，配置植物血凝素PBS储液，配制人胰岛素HCl储液，配制亚硒酸钠水溶液和乙醇胺水溶液，配制亚油酸-人血白蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：马玉国，
申请(专利权)人：广州航华生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44