外源性MPA与hMG在制备动物模型药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用，所述的MPA的剂量为2.8‑3.2mg/kg/天，所述的hMG为4.5‑5.5IU/kg/天。其旨在弥补现有技术中高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物的空白，为高孕激素状态下超促排卵方案疗效及作用机制提供必要的实验基础。

Application of exogenous MPA and hMG in preparation of animal model drugs

The present invention provides an application of a combination of exogenous MPA and hMG in the preparation of an animal model for promoting ovulation in the state of high progesterone. The dose of the MPA is 2.8 3.2mg/kg/ days, and the hMG is 4.5 5.5IU/kg/ days. The aim of this study is to make up the blank of the animal model of the high progesterone induced ovulation in the existing technology, and to provide the necessary experimental basis for the effect and mechanism of the superovulation program under the high progesterone state.

【技术实现步骤摘要】
外源性MPA与hMG在制备动物模型药物中的应用
本专利技术涉及疾病的动物模型构建领域，具体涉及外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用。
技术介绍
随着人们生活方式的改变，不孕不育已成为仅次于癌症和心脑血管疾病的世界第三大疾病。不孕不育指一年未采取任何避孕措施，性生活正常而没有成功妊娠，分为男性不孕和女性不孕。目前，我国育龄夫妇的患病率在12％-15％，导致越来越多的不孕不育患者寻求辅助生殖技术(ART)来孕育新生命。控制性促排卵(COH)和体外受精/卵泡浆内单精子显微注射(IVF/ICSI)是经典的ART过程，然而，在COH过程中面临的一系列问题已成为影响IVF/ICSI成功的关键因素之一。传统的COH方案是使用促性腺激素释放激素(GnRH)的类似物或者拮抗剂联用hMG来促进卵泡发育及控制早发LH峰。然而这些方案在抑制早发LH峰上的效果并不理想，依然有0.34％-38％的发生率。早发LH峰的出现会导致过早排卵和黄素化，进而导致促排卵周期取消率增加。因此，寻求更加安全、有效的促排卵方案迫在眉行。卵泡期高孕激素促排卵(PPOS)是在冷冻胚胎移植和黄体期促排卵方案基础上创立，在卵泡早期口服MPA联用hMG达到了促排卵和抑制早发LH峰及OHSS的目的。该方案在促排卵过程中，无一例早发LH峰及OHSS的发生，同时获得了较好的临床结局。目前，PPOS方案已在临床得到推广，然而对其具体机制还不清楚，需要建立相应的动物模型来探究其作用机制。卵巢是雌性的生殖器官，其主要功能是产生类固醇激素及排卵。卵巢作为类固醇激素及卵泡发育的主要场所，在促排卵过程中主要是通过外源性促性腺激素刺激卵巢，在下丘脑-垂体-卵巢轴的调控下，改变体内类固醇激素的分泌，促使多个卵泡发育为成熟的卵母细胞并诱发排卵。从1978年世界上第一例试管婴儿诞生以来，多种促排卵方案应运而生，如短方案、长方案、超长方案、微刺激方案等，这些方案对卵巢的刺激程度均不同，其导致的卵巢过度刺激综合(OHSS)发生率也不同。OHSS是一种医源性疾病，发生率为0.6％-14％。在促排卵过程中，OHSS主要是由于多个卵泡发育、雌激素水平过高等因素引起血液浓缩、肝肾功能损坏、成人呼吸窘迫综合征等一系列并发症，严重时会危害生命。研究发现，OHSS的发生与促排卵中大剂量GnRH类似物的使用有关。PPOS方案不同于传统促排卵方案，该方案在促排过程中通过口服外源性孕激素MPA，来代替GnRH类似物在促排卵过程中带来的副作用，使用该方案的患者无一例出现OHSS，且具有便于临床应用和安全、费用低等优势，因此，PPOS显示出更为广泛的应用前景。MPA是一种与孕酮结构相关的17α羟孕酮类衍生物，作为人工合成的孕激素，其具有较高的促孕活性。研究证实孕激素对下丘脑-垂体-性腺轴具有重要的调节作用，其可通过抗雌激素对下丘脑-垂体-性腺轴的正反馈作用而抑制脉冲性的GnRH和LH分泌，从而达到对早发LH峰的控制。虽然传统研究认为，卵巢内高孕激素环境下卵泡是无法生长的。但后来研究发现，在女性的生理周期中至少发生两次卵泡波，黄体期高的孕激素环境下依然有卵泡可以生长发育。并且在黄体期促排卵后行IVF-ET，获得了47.8％的妊娠率，促排卵过程中无早发LH峰出现。那么高孕激素促排卵对卵巢及卵泡有哪些影响，以及其促排卵机制如何呢？这正是目前需要解决的问题。到目前为止，关于高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物未见报道。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，方便对PPOS方案的机制进行充分研究，本专利技术提供了一种外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用，旨在弥补现有技术中高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物的空白，为高孕激素状态下超促排卵方案疗效及作用机制提供必要的实验基础。本专利技术第一方面提供了一种外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用，所述的MPA的剂量为2.8-3.2mg/kg/天，所述的hMG为4.5-5.5IU/kg/天。较佳地，所述的药物为灌胃干预药物。较佳地，所述的MPA的浓度为25-30mg/ml，所述的hMG的浓度为15-25IU/ml。本专利技术第二方面提供了上述的高孕激素状态下促排卵的动物模型的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：检测所述动物模型的FSH、LH、E2和P水平，初步观察和评价所述的动物模型的构建情况；步骤(2)：使用HE染色，观察所述的动物模型的卵巢形态和各级卵泡数占总卵泡数比例，进一步验证所述的动物模型的构建情况；步骤(3)：采用免疫组织化学法，检测所述的动物模型的卵泡形态及激素受体表达，最终确定所述的动物模型是否构建成功。一般来说，所构建成功的动物模型的FSH升高，LH、E2和P降低；FSHR高，LHR低。动物模型的FSH为16.16±3.2，LH为10.12±1.5、E2为171.71±9.5和P为3.09±0.4。本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术针对高孕激素状态下超促排卵方案成功的提供了一种高孕激素状态下超促排卵动物模型的药物；(2)本专利技术中模型动物饲养周期短，廉价易于饲养，模型动物(小鼠)的干预过程与人类干预过程类似，可以通过多种检测手段，观察模型构建后多项指标，并以各项检测指标，确定模型是否构建成功；(3)本专利技术的动物模型生物学特性稳定，可做病理形态学对比分析，还可以进行统计学处理、分析；(4)本专利技术的动物模型构建周期短、发展快，重复性好，不孕不育的治疗提供了新工具，为PPOS方案机制的探究提供了新材料。附图说明：图1为本专利技术实施例中动物模型构建的流程图。图2A为本专利技术实施例中模型构建后血清激素FSH检测结果，图2B为本专利技术实施例中模型构建后LH检测结果，图2C为本专利技术实施例中模型构建后E2检测结果，图2D为本专利技术实施例中模型构建后P检测结果。图3是本专利技术实施例中卵巢形态学检测。图4是本专利技术实施例中各级卵泡占总卵泡比图片。图5A为免疫组织化学法检测激素受体FSHR检测结果，图5B为免疫组织化学法检测激素受体LHR检测结果，图5C为免疫组织化学法检测激素受体ER检测结果，图5D为免疫组织化学法检测激素受体PR检测结果。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术作进一步地说明，以更好地理解本专利技术。实施例采用MPA和hMG的药物进行一种高孕激素状态下超促排卵的动物模型的构建方法，流程如图1所示，是通过如下步骤实现的：(1)选取6周龄的雌性小鼠，于每日早8:00观察性周期，连续观察两个性周期，选取性周期正常的小鼠作为模型构建对象；(2)将步骤(1)中选出的小鼠随机分成实验组、正常对照组、阴性对照组和阳性对照组；将MPA片碾磨成粉状，用色拉油配制成30mg/ml的MPA悬浮液，同时将hMG粉状配制成20IU/ml的hMG液体，(MPA悬浮液和hMG液体的每日饲喂量)，于每日早8:00灌胃，连续灌胃5天；正常对照组以同等剂量的色拉油灌胃；阴性对照组以同等剂量的MPA悬浮液灌胃；阳性对照组施以同等剂量的hMG；每日早8:00将小鼠从笼中取出，将占有生理盐水的小棉签轻轻插入雌鼠阴道中，并轻轻转动，抽出涂到多聚甲醛包被的玻片上。于光学显微镜下观察玻片上细胞形本文档来自技高网...

【技术保护点】
外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用，其特征在于，所述的MPA的剂量为2.8‑3.2mg/kg/天，所述的hMG为4.5‑5.5IU/kg/天。

【技术特征摘要】
1.外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用，其特征在于，所述的MPA的剂量为2.8-3.2mg/kg/天，所述的hMG为4.5-5.5IU/kg/天。2.根据权利要求1所述的外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用，其特征在于，所述的药物为灌胃干预药物。3.根据权利要求1所述的外源性MPA与hMG联合使用在制备高孕激素状态下促排卵的动物模型的药物中的应用，其特征在于，所述的MPA的浓度为25-30...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴蔚然，匡延平，温晓薇，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：上海,31