一株植物乳杆菌、该植物乳杆菌冻干粉及其制备方法技术

本申请提供一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum LP4)，其微生物保藏编号为CGMCC No.14533。本申请还提供一种制备所述植物乳杆菌LP4冻干粉的方法及使用该方法制备的植物乳杆菌LP4冻干粉，所述方法在对所述植物乳杆菌LP4进行冻干前对所述植物乳杆菌LP4进行包被处理，组合使用多种保护剂，特别地，在对所述植物乳杆菌LP4表面进行首次包被后，再进行二次包被，从而弥补首次包被可能存在的包被不完全的缺陷，在所述植物乳杆菌LP4菌体表面形成至少完全的致密的保护层，并与所述菌体构成微囊结构，从而有效地将所述植物乳杆菌LP4菌体与外界环境隔离，并在微囊内部形成稳定地内环境，从而使得所述植物乳杆菌LP4在常温条件下也能够保持活力。

【技术实现步骤摘要】
一株植物乳杆菌、该植物乳杆菌冻干粉及其制备方法
本申请涉及生物
，特别涉及一株植物乳杆菌、该植物乳杆菌冻干粉及其制备方法。
技术介绍
相比于乳酸菌深冷制剂，乳酸菌冻干粉由于具有便于贮藏和使用等优点被广泛使用。乳酸菌冻干粉中菌体的活菌数、存活率、活力等稳定性指标对其能否正常使用具有重要影响。通常，乳酸菌冻干的方法为将含有液相组分的乳酸菌菌体在低温环境下急速冷冻，再按照程序升温获得乳酸菌冻干粉，这种方法在冻干过程中，菌体细胞由于遭遇冷冻冲击会导致细胞壁通透性改变和代谢损伤，从而造成菌体失活。在贮存期间，乳酸菌冻干粉中乳酸菌菌体则会因为与环境中水、氧和自由基接触造成损伤，进一步造成菌体失活。由于冻干过程和贮藏期间的双重损失，从而导致在实际使用时乳酸菌冻干粉中活菌数量低，存活率低，菌体活力不足等问题。现有技术有大量研究来减少在冻干过程中乳酸菌活菌的损失，相比于直接进行冻干的方法，通过这些方法制备的冻干粉中活菌数量有所提高，但是，这些方法并不能解决贮藏阶段活菌的损失，制得的乳酸菌冻干粉仍需低温保藏，通过使乳酸菌休眠的方法来保持乳酸菌的活性。而在没有低温保藏设备的条件下，乳酸菌冻干粉则被置于常温环境中，从而导致乳酸菌冻干粉中的活菌存活率会急剧下降，表现为乳酸菌冻干粉失效，进而影响其功效，这为乳酸菌冻干粉的使用带来了极大的不便。
技术实现思路
本申请的目的之一是提供一株植物乳杆菌，本申请的目的之二是提供一种将所述植物乳杆菌制备成冻干粉的方法，以解决现有冻干方法制得的乳酸菌冻干粉中活菌数量低及常温贮藏菌体易失活，货架期内无法有效保证活菌数的问题。为达到上述目的，本申请通过以下技术方案来实现：植物乳杆菌LP4(LactobacillusplantarumLP4)通过以下方法筛选得到：所述植物乳杆菌LP4(LactobacillusplantarumLP4)是从传统泡菜中分离得到的潜在益生特性的益生菌；该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号：CGMCCNo.14533；分类命名为：植物乳杆菌(LactobacillusplantarumLP4)；保藏时间：2017年8月18日；保藏地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。本申请所分离的植物乳杆菌LP4(LactobacillusplantarumLP4)具有如下生物学特性：菌种为革兰氏样性菌，呈直杆状，单个、有时成对或成链状。MRS固体培养基上菌落直径1-3mm，乳白色，凸起，呈圆形，表面光滑。最适生长温度为30～37℃，厌氧或兼性厌氧，最适pH＝6.5左右，在MRS液体培养基中生长浑浊。本申请提供一种制备所述植物乳杆菌LP4(LactobacillusplantarumLP4)冻干粉的方法，包括：步骤1-1，将湿菌体与抗氧化剂混合，搅拌；步骤1-2，将步骤1-1制得的体系与多元醇混合，搅拌；步骤1-3，将步骤1-2制得的体系与碱性多糖或其水分散体系混合，搅拌；步骤1-4，将步骤1-3制得的体系与非碱性多糖或其水分散体系混合，搅拌；步骤1-5，将步骤1-4制得的体系与蛋白质及小分子糖混合，搅拌；步骤1-6，将步骤1-5制得的体系与碱性多糖或其水分散体系混合，搅拌；步骤1-7，将步骤1-6制得的体系冷冻干燥。本申请提供的方法在对所述植物乳杆菌LP4进行冻干前对所述植物乳杆菌LP4进行包被处理，组合使用多种保护剂，包括抗氧化剂、多元醇、碱性多糖、非碱性多糖、蛋白质、小分子糖等，特别地，在对所述植物乳杆菌LP4表面进行首次包被后，再进行二次包被，从而弥补首次包被可能存在的包被不完全的缺陷，在所述植物乳杆菌LP4菌体表面形成至少完全的致密的保护层，并与所述菌体构成微囊结构，从而有效地将所述植物乳杆菌LP4菌体与外界环境隔离，并在微囊内部形成稳定地内环境，从而使得所述植物乳杆菌LP4在常温条件下也能够保持活力。采用本申请提供的方法，制得的植物乳杆菌LP4冻干粉中菌体的外表面包覆有两层包覆物，使包覆物及菌体形成微囊结构，在微囊内部具有隔氧、隔水、隔气并且相对稳定的内部环境，从而减小冻干过程对植物乳杆菌LP4菌体的冷冻冲击，降低冻干过程中菌体损失。而且，制得的植物乳杆菌LP4冻干粉保留有微囊结构，隔绝菌体与环境中水、氧、自由基等的接触，从而使得植物乳杆菌LP4冻干粉在常温条件下贮藏也能够长期保持菌体的活性。同时，本专利技术人发现，根据本申请提供的方法制备的植物乳杆菌LP4冻干粉，在使用时，包覆于菌体表面的包覆物能够较为容易地从菌体表面脱覆，使菌体裸露出来，发挥其功用。本申请提供的方法不同于常见的真空冷冻干燥方案，片面追求新制备的冻干粉中活菌含量，而是在冷冻干燥前对菌体进行双重包被，形成微囊，从而对菌体进行隔离保护，解决了植物乳杆菌LP4冻干粉在常温贮藏过程中易失活，货架期内无法有效保证活菌数的问题，以便其在不同领域产品中的开发和应用。本申请提供的制备植物乳杆菌LP4冻干粉的方法还可以应用于制备其它乳酸菌冻干粉。本申请还提供一种根据上述方法制备的植物乳杆菌LP4冻干粉，所述植物乳杆菌LP4冻干粉中活菌含量为6015亿CFU/g以上，在25℃条件下贮藏6个月后活菌存活率为65％以上。所述植物乳杆菌LP4冻干粉中菌体的表面包覆有致密的包覆物，与被包覆的菌体形成微囊结构，能够有效地将菌体与外界隔离，使得在常温下，植物乳杆菌LP4冻干粉也能够保持菌体的活性，而无需低温保存，使植物乳杆菌LP4冻干粉的保存条件更为温和，保存植物乳杆菌LP4冻干粉更为方便，进而使所述植物乳杆菌LP4冻干粉的货架期更长。附图说明图1为实施例1～4制备的植物乳杆菌LP4冻干粉6个月活菌存活率(％)结果图；图2为实施例5～9制备的植物乳杆菌LP4冻干粉6个月活菌存活率(％)结果图；图3为实施例10～13制备的植物乳杆菌LP4冻干粉6个月活菌存活率(％)结果图；图4为实施例14～18制备的植物乳杆菌LP4冻干粉6个月活菌存活率(％)结果图；图5为对比例1～2和实施例19制备的植物乳杆菌LP4冻干粉6个月活菌存活率(％)结果图。具体实施方式下面通过对本专利技术进行详细说明，本专利技术的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。以下详述本专利技术。本申请提供一株植物乳杆菌LP4(LactobacillusplantarumLP4)，所述植物乳杆菌LP4(LactobacillusplantarumLP4)是从传统泡菜中分离得到的潜在益生特性的的益生菌；该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号：CGMCCNo.14533；分类命名为：植物乳杆菌(LactobacillusplantarumLP4)；保藏时间：2017年8月18日；保藏地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。所述植物乳杆菌LP4(LactobacillusplantarumLP4)可以用于发酵食品，如发酵牛乳、豆乳、泡菜等，还可以用于制备健康食品，如制备固体饮料、胶囊等，还可以用于制备动物微生态制剂，如制备饲料添加剂、饲料发酵剂等，以及制备农业微生态制剂，如制备微生物肥料、有机肥发酵剂等。本申请还提供一种制备植物乳杆菌LP4冻干粉的方法，所述方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum LP4)，其特征在于，其微生物保藏编号为CGMCC No.14533。

【技术特征摘要】
1.一株植物乳杆菌(LactobacillusplantarumLP4)，其特征在于，其微生物保藏编号为CGMCCNo.14533。2.一种制备植物乳杆菌LP4冻干粉的方法，其特征在于，所述方法包括：步骤1-1，将湿菌体与抗氧化剂混合，搅拌，其中，所述湿菌体为植物乳杆菌LP4的菌体，其微生物保藏编号为CGMCCNo.14533；步骤1-2，将步骤1-1制得的体系与多元醇混合，搅拌；步骤1-3，将步骤1-2制得的体系与碱性多糖或其水分散体系混合，搅拌；步骤1-4，将步骤1-3制得的体系与非碱性多糖或其水分散体系混合，搅拌；步骤1-5，将步骤1-4制得的体系与蛋白质及小分子糖混合，搅拌；步骤1-6，将步骤1-5制得的体系与碱性多糖或其水分散体系混合，搅拌；步骤1-7，将步骤1-6制得的体系冷冻干燥。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1-1至步骤1-7均在温度为2℃-8℃，厌氧的条件下进行。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤1-1中，所述氧化剂选自谷胱甘肽、茶多酚和维生素E中的一种或多种；和/或所述湿菌体与抗氧化剂的重量比为湿菌体的重量:抗氧化剂的重量＝1kg:(10～100)g，其中，湿菌体的重量以湿菌体的总重量计。5.根据权利要求2至4任一项所述的方法，其特征在于，在步骤1-2中，所述多元醇选自甘油、甘露醇、山梨醇中的一种或者多种；和/或所述步骤1-1制得的体系与所述多元醇的重量比为步骤1-1制得的体系的重量:多元醇的重量＝1kg:(100～800)g，其中，步骤1-1制得的体系的重量以步骤1-1中湿菌体的重量计。6.根据权利要求2至5任一项所述的方法，其特征在于，在步骤1-3中，所述碱性多糖为水分散体系显碱性的多糖，优选为壳聚糖；所述碱性多糖的水分散体系的浓度为3wt％～8wt％；所述步骤1-2制得的体系与碱性多糖或其水分散体系的重量比为步骤1-2制得的体系的重量:碱性多糖或其水分散体系的重量＝1kg:(12.5～50)g，优选为1kg:25g，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚国强，张建军，
申请(专利权)人：金华银河生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33