识别影响表型的遗传元件的分析制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】识别影响表型的遗传元件的分析
基于诱变的遗传学已用于研究多种不同的表型。该强大的方法已识别细胞分裂需要的基因(通过搜索温度敏感突变酵母菌株)、早期胚胎发育(通过筛选蝇类中的异常胚胎发生)和程序性细胞死亡(通过研究秀丽隐杆线虫(C.elegans)中的发育中的细胞死亡)。通常，将选择的有机体诱变处理，并且检查所得后代(有时在杂交后)的感兴趣的表型。
技术介绍
在这些情况下，重要的是可以使用活的突变有机体从而将感兴趣的突变与所观察的表型联系。在一些情况下，表型是致死的或降低适应性(fitness)(例如果蝇中的早期发育缺陷或酵母中的细胞分裂表型)。对于这类表型，可将主效突变(causativemutation)可映射在受影响的后代的亲代中，或可利用温度敏感的等位基因。通常，遗传筛选中的一种主要问题是存在高水平的“噪声(noise)”，显著地妨碍与所研究的表型相关的相关候选物(candidate)/基因的识别。这类噪声的实例包括存在结果是不相关、或不可重复等的大量潜在命中(hit)。因此遗传筛选不仅需要繁复的实验和后续研究来在识别的很多潜在命中中发现相关的，而且还意味着...
【技术保护点】
一种用于识别影响细胞的表型的遗传元件的方法，优选其中所述表型在细胞内表现，所述方法包括以下步骤：(a)将细胞库进行诱变处理；(b)固定所述细胞库，优选用固定试剂和任选地用交联剂进行；和透化所述细胞库，优选用透化试剂进行；(c)用一种或多种可检测探针、优选抗体或RNA探针处理所述细胞库，从而检测受影响的表型；(d)基于所述一种或多种可检测探针的至少一种的检测来分选所述细胞，从而获得一种或多种细胞群体；(e)任选地，去交联所得细胞群体各自中的细胞；和(f)测序至少部分所得细胞群体的至少部分细胞，从而识别影响所述细胞的所述表型的遗传元件。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.28 NL 20148771.一种用于识别影响细胞的表型的遗传元件的方法，优选其中所述表型在细胞内表现，所述方法包括以下步骤：(a)将细胞库进行诱变处理；(b)固定所述细胞库，优选用固定试剂和任选地用交联剂进行；和透化所述细胞库，优选用透化试剂进行；(c)用一种或多种可检测探针、优选抗体或RNA探针处理所述细胞库，从而检测受影响的表型；(d)基于所述一种或多种可检测探针的至少一种的检测来分选所述细胞，从而获得一种或多种细胞群体；(e)任选地，去交联所得细胞群体各自中的细胞；和(f)测序至少部分所得细胞群体的至少部分细胞，从而识别影响所述细胞的所述表型的遗传元件。2.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中在步骤(d)中，基于所述一种或多种可数据探针的至少一种的检测来分选所述细胞，获得至少两种细胞群体，其中在步骤(f)中，将至少两种细胞群体测序和比较，从而识别影响所述细胞的所述表型的遗传元件。3.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述遗传元件选自由以下组成的组：基因、内含子、外显子、启动子和非编码RNA。4.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述细胞选自由以下组成的组：真核细胞、动物细胞、植物细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、人类细胞、或干细胞。5.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述细胞为近单倍体细胞或完全单倍体细胞，优选近单倍体细胞或完全单倍体哺乳动物细胞，更优选近单倍体细胞或完全单倍体细胞人类细胞。6.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述诱变为随机诱变。7.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述诱变涉及以下的使用：辐射，诱变化学品，优选甲磺酸乙酯、亚硝酸、或乙基亚硝基脲，插入诱变，优选基于转座子的插入诱变或基于逆转录病毒的(随机)插入诱变，引导RNA序列的CRISPR文库。8.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中将所述细胞暴露于应激条件或生长条件，和/或其中用化合物、优选药物处理所述细胞，优选在步骤(b)中固定和透化所述细胞之前，优选在进行步骤(a)和步骤(b)之间。9.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中固定所述细胞的所述固定试剂选自由以下组成的组：交联试剂，优选甲醛、多聚甲醛、福尔马林和戊二醛，或非交联试剂，优选基于氯化汞的固定剂、乙醇、甲醇或丙酮，和/或其中所述透化试剂选自由以下组成的组：溶剂，优选甲醇和丙酮，或洗涤剂，优选皂苷、毛地黄皂苷、TritonX-100、NP-...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·R·布鲁梅尔坎普，J·D·M·尼乌文赫伊斯，L·T·杰，M·布罗克曼，V·A·布洛梅恩，M·拉本，
申请(专利权)人：施特丁奈德兰卡克研究所安东尼范列文虎克医院，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL
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