一种富硒酵母的制备方法技术

本发明专利技术涉及发酵工业技术领域，具体涉及一种富硒酵母的制备方法。本发明专利技术选用广西巴马县土壤样品，巴马土壤、谷物中的硒含量高于全国平均水平10倍以上，通过对土壤样品中酵母菌种筛选和育种，培养得到富硒的酵母菌菌种，对硒离子浓度、培养条件进行优化，提高了酵母菌硒含量的提高；本发明专利技术通过对富硒土壤中分离筛选得到的富硒酵母菌，通过用梯度浓度的亚硒酸钠的驯化，筛选抗硒能力高的酵母菌落，再进行紫外诱变，增强其富硒能力，得到获得生物量高、富硒能力强的酵母。

Preparation of a selenium enriched yeast

The invention relates to the technical field of fermentation industry, in particular to a preparation method of selenium enriched yeast. The invention selects the Guangxi Bama County soil samples, soil selenium content in grain, Obama is higher than the national average of more than 10 times, the soil samples of yeast for screening and breeding, cultivation of selenium enriched yeast strains were obtained, optimal ion concentration of selenium, selenium yeast culture conditions, improve the increase of the content of the invention; the selenium enriched yeast isolated selenium rich soil, through domestication with gradient concentration of sodium selenite, selenium yeast colony screening resistance ability of high, followed by ultraviolet mutagenesis, enhance its se ability, to obtain high biomass and selenium enriched yeast.

【技术实现步骤摘要】
一种富硒酵母的制备方法
本专利技术涉及发酵工业
，具体涉及一种富硒酵母的制备方法。
技术介绍
众所周知，硒是人和动物体内的一种必需微量元素，是生物体内谷胱甘肽过氧化合物的重要成分，有着多方面的生物学功能，其中最主要的生物学功能是清除生物体内产生的过多活性氧自由基，因而具有提高生物体免疫力、抗衰老、抗癌的作用。此外，环境砷中毒是一个世界性问题，其危害不仅表现为近期砷对人和动物的健康有害，更为严重的是引起人体远期恶性化改变—癌变、突变及畸变。依据砷—硒可以互为解毒剂的医学原理，加之硒具有抑制和抗癌变、抗突变及抗畸变的生物学功能，富含硒的酵母在预防和治疗地方性中毒方面将发挥显著的作用。此外，酵母细胞还含有丰富的蛋白质、核酸、维生素及机体必需的14种微量元素，对机体的健康有益。硒是人体必需的微量元素。硒的营养主要是通过蛋白质特别是与酶蛋白结合发挥抗氧化作用。富硒酵母是指在培养酵母的过程中加入硒元素，酵母生长时吸收利用了硒，使硒与酵母体内的蛋白质和多糖有机结合转化为生物硒，从而消除了化学硒（如亚硒酸钠）对人体的毒副反应和肠胃刺激，使硒能够更高效、更安全地被人体吸收利用。富硒酵母被人体吸收后，通过与其他酶蛋白及维生素的协同作用能有效清除人体细胞内自由基及过氧化物，从而延缓细胞的衰老，预防和抑制肿瘤、抗衰老、维系心血管系统正常的结构与功能，预防动脉和硬化和冠心病的出现。酵母具有高度的富硒能力，能将无机硒转化为有机硒，因此富硒酵母广泛用于食品、保健品和饲料行业中作为补充微量元素硒的来源。当前，市面上已经有很多品种的富硒酵母，其生产工艺各不相同，现有技术中的富硒酵母主要以糖蜜为原料进行扩大培养，但是以糖蜜为原料其污染比较严重，使得环保费用高，并且得到的富硒酵母中的硒含量只有1000～2000ppm，硒的含量均偏低，不足以满足人类的需求，并无法发挥其最大的经济效益。总结来说，富硒酵母的硒含量较低主要有以下两点原因：其一是没有对酵母菌种进行任何筛选和育种，随机用一种酵母菌种，由于不同酵母菌种对硒的抗性有较大差异，从而对硒离子的吸收转化能力差异也很大。其二是没有对生产发酵培养富硒酵母的培养基的硒离子浓度、培养条件进行优化，因此培养的酵母虽然称做“富硒酵母”，但是这种称做“富硒酵母”细胞的硒含量较低，酵母细胞的生物量也较低。现有技术中生产称做“富硒酵母”细胞地方法大体有三种，第一种是采用混合处理方法，将一定量的硒酸盐或亚硒酸盐与酵母细胞混合而成。其主要缺陷在于：其未将无机硒转化成为有机硒，这种硒酸盐或亚硒酸盐与酵母细胞混合在一起的所谓“富硒酵母”能使人和动物对其的吸收率很低，产生的生物学作用较差，不是真正的富硒酵母。第二种是采用简单的吸附方法，将市场上的面包酵母或啤酒酵母细胞悬浮于含有硒酸盐或亚硒酸盐的水溶液中处理一定时间，使硒离子吸附于酵母细胞表面，其主要缺陷在于：这种处理仍然不能将无机硒转化成为有机硒，这种吸附硒酸盐或亚硒酸盐的酵母细胞与上述第一种方法没有本质的区别，能使人或动物对其的吸收率很低，产生的生物学作用较差，同样不是真正的富硒酵母。第三种是在含有硒离子的培养基中培养酵母细胞，但是对酵母菌种没有进行任何筛选和育种，随机用一种酵母菌种，其主要缺陷在于：由于不同酵母菌种对硒的抗性有较大差异，从而对硒离子的吸收转化能力差异很大。此外，这种技术对培养基的硒离子浓度、培养条件未进行优化，因此采用这种技术培养的酵母中，有机硒含量较低，每克干酵母细胞含有机硒500微克以下、细胞生物量也低、从而经济效益也很低。因此，提供一种高效且简便的富硒酵母的制备方法，以此来适应于社会的需求，是一件十分有必要的事情。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：针对目前没有对酵母菌种进行任何筛选和育种，随机用一种酵母菌种，没有对生产发酵培养的富硒酵母的富硒能力进行优化的问题，提供了一种富硒酵母的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下所述的技术方案是：一种富硒酵母的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）将土样加入酵母菌液体培养基中，培养，得酵母培养液，取酵母培养液用质量分数为0.9%的生理盐水进行梯度稀释至10-6稀释级，得稀释后酵母菌培养液，将酵母菌培养液涂布于酵母菌平板培养基上，培养，挑取菌径最大的酵母菌单菌落平板划线2~3次，得纯化后酵母菌单菌落；（2）挑取上述纯化后酵母菌单菌落接种至酵母菌液体培养基，活化培养，得酵母菌活化培养物，将亚硒酸钠按质量比1:1000加入驯化和筛选培养基混合，得一级驯化和筛选培养基，将酵母菌活化培养物接种至一级驯化和筛选培养基，培养，得一级驯化后酵母菌菌落，将亚硒酸钠按质量比1:500加入驯化和筛选培养基混合，得二级驯化和筛选培养基，挑取驯化酵母菌菌落接种至二级驯化和筛选培养基，培养，得二级酵母菌发酵液，将二级酵母菌发酵液用无菌水将其稀释至10-3的稀释级，将亚硒酸钠按质量比1:300加入驯化和筛选培养基混合，得三级驯化和筛选培养基，将稀释后发酵液涂布于三级驯化和筛选培养基培养，得三级驯化后酵母菌菌落，将三级酵母菌培养物重复涂布培养3~4次，得硒抗性驯化后酵母菌菌落；（3）挑取硒抗性驯化后酵母菌菌落接种至酵母菌平板培养基中，活化培养，得活化酵母菌落，取无菌水洗涤活化酵母菌落，倒入盛有玻璃珠的容器中，振荡，并于摇床上震荡，得到单细胞菌悬液，用血球计数板计数，用无菌水将单细胞菌悬液调整至细胞浓度为10-6~10-7个/mL，紫外灯预热，取制备好的单细胞菌悬液置于无菌平皿内，置磁力搅拌器上搅拌，紫外灯照射，得处理的菌悬液，取处理的菌悬液0.1mL涂布于酵母菌平板培养基，培养，挑选出菌径最大的单菌落接种至种于发酵培养基中，培养，得紫外诱变后酵母菌培养液，干燥，得紫外诱变后酵母菌菌株；（4）将亚硒酸钠按质量比1:250加入发酵培养基混合，得富硒发酵培养基，驯化诱变后酵母菌菌株接种至富硒发酵培养基，培养，得驯化诱变酵母菌培养物，离心，取沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，再加入蒸馏水，离心，除上清液，此步骤反复2~3次，得到去培养液湿酵母，将湿酵母干燥，冷却，得富硒酵母粉。所述步骤（1）中土壤样品为广西巴马县土壤样品，土样与酵母菌液体培养基的质量比为4:9，培养条件为30~35℃200r/min摇床培养18~24h。所述步骤（1）中酵母菌平板培养基的配方为按质量份数计，取葡萄糖12~15份，酵母膏8~10份，蛋白胨5~7份，硫酸镁0.02~0.05份，琼脂15~20份，pH值自然，121℃灭菌20min；酵母菌液体培养基：去掉酵母菌平板培养基的配方中的琼脂，其他组分不变。所述步骤（2）中纯化后酵母菌单菌落与酵母菌液体培养基的质量比为1:9，一级驯化和筛选培养基中亚硒酸钠与驯化和筛选培养基的质量比为1:1000，酵母菌活化培养物与一级驯化和筛选培养基的质量比为1:8，二级驯化和筛选培养基中亚硒酸钠与驯化和筛选培养基的质量比为1:500，三级驯化和筛选培养基中亚硒酸钠与驯化和筛选培养基的质量比为1:300；驯化和筛选培养基的配方为按质量份数计，取葡萄糖8~10份，酵母膏15~18份，蛋白胨5~7份，硫酸镁0.02~0.05份，琼脂15~20份，亚硒酸钠10~12份，pH值自然，121℃灭菌20min。所述步骤（3）中紫外诱变本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：（1）将土样加入酵母菌液体培养基中，培养，得酵母培养液，取酵母培养液用质量分数为0.9%的生理盐水进行梯度稀释至10

【技术特征摘要】
1.一种富硒酵母的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：（1）将土样加入酵母菌液体培养基中，培养，得酵母培养液，取酵母培养液用质量分数为0.9%的生理盐水进行梯度稀释至10-6稀释级，得稀释后酵母菌培养液，将酵母菌培养液涂布于酵母菌平板培养基上，培养，挑取菌径最大的酵母菌单菌落平板划线2~3次，得纯化后酵母菌单菌落；（2）挑取上述纯化后酵母菌单菌落接种至酵母菌液体培养基，活化培养，得酵母菌活化培养物，将亚硒酸钠按质量比1:1000加入驯化和筛选培养基混合，得一级驯化和筛选培养基，将酵母菌活化培养物接种至一级驯化和筛选培养基，培养，得一级驯化后酵母菌菌落，将亚硒酸钠按质量比1:500加入驯化和筛选培养基混合，得二级驯化和筛选培养基，挑取驯化酵母菌菌落接种至二级驯化和筛选培养基，培养，得二级酵母菌发酵液，将二级酵母菌发酵液用无菌水将其稀释至10-3的稀释级，将亚硒酸钠按质量比1:300加入驯化和筛选培养基混合，得三级驯化和筛选培养基，将稀释后发酵液涂布于三级驯化和筛选培养基培养，得三级驯化后酵母菌菌落，将三级酵母菌培养物重复涂布培养3~4次，得硒抗性驯化后酵母菌菌落；（3）挑取硒抗性驯化后酵母菌菌落接种至酵母菌平板培养基中，活化培养，得活化酵母菌落，取无菌水洗涤活化酵母菌落，倒入盛有玻璃珠的容器中，振荡，并于摇床上震荡，得到单细胞菌悬液，用血球计数板计数，用无菌水将单细胞菌悬液调整至细胞浓度为10-6~10-7个/mL，紫外灯预热，取制备好的单细胞菌悬液置于无菌平皿内，置磁力搅拌器上搅拌，紫外灯照射，得处理的菌悬液，取处理的菌悬液0.1mL涂布于酵母菌平板培养基，培养，挑选出菌径最大的单菌落接种至种于发酵培养基中，培养，得紫外诱变后酵母菌培养液，干燥，得紫外诱变后酵母菌菌株；（4）将亚硒酸钠按质量比1:250加入发酵培养基混合，得富硒发酵培养基，驯化诱变后酵母菌菌株接种至富硒发酵培养基，培养，得驯化诱变酵母菌培养物，离心，取沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，再加入蒸馏水，离心，除上清液，此步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张德钊，李璐，尹凯欣，
申请(专利权)人：常州禾吉纺织品有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32