一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法技术

本发明专利技术属于食品检测技术领域，公开了一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法，建立酶联免疫分析仪(Vidas)测试值与沙门氏菌浓度函数关系C1；对沙门氏菌缓冲蛋白胨培养液梯度稀释，对各个梯度稀释液进行计数，同时使用酶联免疫分析仪对各个梯度沙门氏菌稀释液检测获得测试值，建立Vidas测试值与沙门氏菌浓度数学函数关系式；绘制生长曲线，通过生长曲线得出增菌培养一定时间后沙门氏菌浓度x与接种量y的函数关系C2。本发明专利技术通过制定不同接种量细菌的生长曲线，建立经增菌一定时间h后沙门氏菌浓度与接种量(增菌前起始含量)函数关系；通过函数关系得知接种浓度，既是样品中沙门氏菌含量。

A method for quantitative detection of Salmonella in food based on growth curve

The invention belongs to the technical field of food testing, and discloses a method for quantitative detection of Salmonella bacteria in food based on the growth curve, the establishment of ELISA analyzer (Vidas) test value and function of Salmonella bacteria concentration C1; liquid gradient dilution culture of Salmonella buffered peptone, counting for each gradient dilution at the same time, using the ELISA analyzer for each gradient dilution Salmonella detection test value, establish the Vidas value and the Salmonella concentration mathematical function relationship; growth curve, the growth curve of the enrichment culture after a certain time of Salmonella x concentration and inoculation quantity of Y function C2. By establishing the growth curve of different inoculation quantity, the invention establishes a functional relationship between Salmonella concentration and inoculum volume (the initial content before inoculation) after increasing h for a certain time, and it is found that the concentration of Salmonella is the content of Salmonella in samples.

【技术实现步骤摘要】
一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法
本专利技术属于食品检测
，尤其涉及一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法。
技术介绍
沙门氏菌属(Salmonella)是一大群寄生于人类和动物肠道内，生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌，有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病，这些统称为沙门氏菌。沙门氏菌目前已经发现1800种以上，按抗原成分可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌型。其中与人类疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的伤寒和肠炎杆菌。此菌可引起禽伤寒、鸡白痢、猪霍乱、鼠伤寒沙门氏菌病、猪副伤寒、马流产沙门氏菌病等疾病。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)。感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。在食品安全日益受到重视的今天，致病性微生物引起食物中毒依然是关注的焦点。如何提高检测的准确性，检测效率，是我们检验检疫行业及其他相关部门一直不懈努力的方向。检测技术不断改进，各种先进设备和检测技术不断涌现。国内外对食品中沙门氏菌的检测技术或检测方法研究并不鲜见。这些方法大多是对沙门氏菌的定性检测，但是对沙门氏菌定量研究很少。目前涉及沙门氏菌检验的标准主要有食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.4-2010，出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法SN0170-1992，SN/T1509.7-2010进出口食品中沙门氏菌检验方法实时荧光PCR法。GB/T28642-2012饲料中沙门氏菌的快速检测方法聚合酶链式反应(PCR)法，SN/T1059.1-2002进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法，SN/T0040-1992出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)计数检验方法。其中SN/T0040-1992是沙门氏菌定量方法原理基于MPN法，其他国标或行标都是定性检测。SN/T0040-1992虽然可以定量检测但是缺点操作繁琐，需要稀释三个梯度或更多，每个梯度三管共九管，每个管都要进行阴阳性判断才能确定，耗时费力。由于从225mL10倍样品稀释液中取1mL用来增菌培养存在漏检风险。综上所述，现有技术存在的问题是：现有的对沙门氏菌定量检测，需要稀释三个梯度或更多，每个梯度三管共九管，每个管都要进行阴阳性判断才能确定，耗时费力；并且由于从225mL10倍样品稀释液中取1mL用来增菌培养存在漏检风险。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法。本专利技术是这样实现的，一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法，所述基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法包括：建立酶联免疫分析仪测试值与沙门氏菌浓度函数关系C1(y＝0.102x3-0.648x2+1.563x+5.826相关系数R2＝0.994，x测试值，y沙门氏菌浓度为对数形式，0.2<x<3.8。)；对沙门氏菌缓冲蛋白胨培养液，进多个梯度稀释；对各个梯度稀释液进行计数，同时使用酶联免疫分析仪对不同梯度的沙门氏菌检测并获得测试值，建立Vidas测试值与沙门氏菌浓度函数关系式；使用不同浓度沙门氏菌分别接种增菌液；绘制不同接种浓度的沙门氏菌在培养液中的生长曲线；通过生长曲线一定时间后得出增菌培养沙门氏菌浓度与接种量的函数关系C2(TTB增菌液增菌8h或9h后所达到的浓度形成曲线，得出公式y＝1.030*x-5.254，x代表增菌后浓度，y代表增菌液起始浓度，x,y均是对数形式)；沙门氏增菌培养后经酶联免疫分析仪检测读取荧光值通过函数C1得到培养的增菌液中沙门氏菌浓度，通过函数C2得知接种量，得到样品中沙门氏菌含量。进一步，所述基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法，具体包括以下步骤：步骤一、建立酶联免疫分析仪测试值与沙门氏菌浓度函数关系，肠炎沙门氏菌株纯化后，挑去单菌落接种于缓冲蛋白胨水中10-20mL，36℃培养12-18h；分别进行10倍稀释，5倍稀释，4倍稀释3倍稀释和2倍稀释；步骤二、选取2、3、4、5、10、20、30、40、50、100、200、300、400、500、1000倍稀释液使用Vidas检测，同时使用3M细菌菌落计数测试片对培养液进行计数。步骤三、建立Vidas测试值与沙门氏菌浓度数学函数关系式；步骤四、使用不同浓度沙门氏菌分别接种TTB、SC增菌液100mL于42℃和36℃培养间隔1个小时或2个小时取样，使用测试片对沙门氏菌计数，培养至16-20h；步骤五、绘制不同接种浓度沙门氏菌在两种培养液中的生长曲线；步骤六、建立增菌培养一定时间h后沙门氏菌浓度与沙门氏接种量函数关系。进一步，步骤一中，36℃培养16h。进一步，步骤六中，增菌培养时间h为8h或9h。本专利技术的另一目的在于提供一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测系统。本专利技术的优点及积极效果为：建立数学模型，表示抗原(沙门氏菌浓度)和荧光值间的数学关系。通过制定不同接种量细菌的生长曲线，建立经增菌时间h后沙门氏菌浓度与接种量(增菌前起始含量)函数关系。把两个联系起来通过Vidas荧光值得到培养一定时间的增菌液中沙门氏菌浓度，通过后者函数关系得知接种浓度，既是样品中沙门氏菌含量。附图说明图1是本专利技术实施例提供的Vidas测试值横坐标与菌浓度纵坐标(取对数值)函数关系示意图；图2是本专利技术实施例提供的肠炎沙门氏菌若干稀释梯度在SC增菌液36度培养生长曲线示意图；图3是本专利技术实施例提供的肠炎沙门氏菌若干稀释梯度在TTB增菌液42度培养生长曲线示意图；图4是本专利技术实施例提供的基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法的流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图及具体实施例对本专利技术的应用原理作进一步描述。材料，仪器设备和试剂的选择：试管20mm×150mm：三角瓶或广口瓶200mL和500mL；平皿，直接90mm；吸管1mL和10mL移液器1mL；试管振荡器。MiniVidas酶联免疫分析仪，恒温培养箱36℃和42℃。缓冲蛋白胨水(BP)，亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)，四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)，3M菌落总数测试片。肠炎沙门氏菌株，大肠杆菌，奇异变形菌(购置中国工业菌种保藏中心)。图1中，Vidas测试值与沙门氏菌浓度(对数值)函数关系，用一元三次方程表示，相关系数R2＝0.994，x值适应范围0.2至3.8，对应沙门氏菌浓度范围约106至108，因为vidas对沙门氏菌检测底限约在106cfu/mL，而菌浓度超过108会出现x值钝化状态，既是当菌浓度大于108cfu/mLvidas荧光值变化不明显处于基本稳定状态3.8左右，应该是与抗原抗体结合饱和有关。这样通过vidas测试值和上公式计算本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法，其特征在于，所述基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法包括：建立酶联免疫分析仪测试值与沙门氏菌浓度函数关系C1；对沙门氏菌缓冲蛋白胨培养液，进行多个梯度稀释；对各个梯度稀释液进行计数，同时使用酶联免疫分析仪对不同梯度的沙门氏菌稀释液检测并获得测试值，建立Vidas测试值与沙门氏菌浓度函数关系式；使用不同浓度沙门氏菌分别接种增菌液；绘制不同接种浓度的沙门氏菌在培养液中的生长曲线；通过生长曲线得出增菌培养一定时间后沙门氏菌浓度与接种量的函数关系C2；沙门氏增菌培养后经酶联免疫分析仪检测读取荧光值通过函数C1得到增菌液中沙门氏菌浓度，通过函数C2得知接种量，得到样品中沙门氏菌含量。

【技术特征摘要】
1.一种基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法，其特征在于，所述基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法包括：建立酶联免疫分析仪测试值与沙门氏菌浓度函数关系C1；对沙门氏菌缓冲蛋白胨培养液，进行多个梯度稀释；对各个梯度稀释液进行计数，同时使用酶联免疫分析仪对不同梯度的沙门氏菌稀释液检测并获得测试值，建立Vidas测试值与沙门氏菌浓度函数关系式；使用不同浓度沙门氏菌分别接种增菌液；绘制不同接种浓度的沙门氏菌在培养液中的生长曲线；通过生长曲线得出增菌培养一定时间后沙门氏菌浓度与接种量的函数关系C2；沙门氏增菌培养后经酶联免疫分析仪检测读取荧光值通过函数C1得到增菌液中沙门氏菌浓度，通过函数C2得知接种量，得到样品中沙门氏菌含量。2.如权利要求1所述的基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的方法，其特征在于，所述酶联免疫分析仪测试值与沙门氏菌浓度函数关系C1为：y＝0.102x3-0.648x2+1.563x+5.826；相关系数R2＝0.994，x测试值，y沙门氏菌浓度为对数形式，0.2<x<3.8；所述增菌培养沙门氏菌浓度与接种量的函数关系C2为：y＝1.030*x-5.254，x代表增菌后浓度，y代表增菌液起始浓度，x,y均是对数形式。3.如权利要求1所述的基于生长曲线对食品中沙门氏菌定量检测的...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏远科，王辉，王猛，刘同辉，
申请(专利权)人：中华人民共和国龙口出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：山东,37