新型穿梭载体制造技术

本发明专利技术提供：在双歧杆菌属微生物（ＢＭ）中的宿主范围广且拷贝数多、在作为表达载体使用时可以高表达所希望的蛋白质的ＢＭ和大肠杆菌的穿梭载体；利用该穿梭载体的ＢＭ中能够表达所希望的基因的表达载体；经该表达载体转化的ＢＭ；和以该ＢＭ作为有效成分的抗肿瘤剂。本发明专利技术构建了平均拷贝数为６－３０的ＢＭ和大肠杆菌的穿梭载体，该载体具有下述两部分：含有ｐＴＢ６的复制原点（ｏｒｉＶ）－ｒｅｐＢ区域，不含ＭｅｍｂＢ、ＭｏｂＡ、ＯｒｆＩ和ｏｒｉＴ区域的源于ｐＴＢ６的区域部分，和含有大肠杆菌的复制原点（ｏｒｉＣ）区域，缺失了编码氨苄青霉素抗性基因（ａｍｐＲ）的表达产物－β－内酰胺酶的Ｎ末端区域的ＤＮＡ的源于大肠杆菌的质粒部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及双歧杆菌属微生物与大肠杆菌的穿梭载体、在利用了该穿梭载体的双歧杆菌属微生物中能够表达所希望的基因的表达载体、经该穿梭载体转化了的双歧杆菌属微生物和以该双歧杆菌属微生物作为有效成分的抗肿瘤剂。
技术介绍
长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)是一种革兰氏阳性厌氧性细菌，其基因组的GC含量高(例如，参照非专利文献1)。这种长双歧杆菌为非病原性的，在人和其它动物的大肠中，构成正常的微生物群的大部分(例如，参照非专利文献2)。一般认为其具有提高免疫反应(例如，参照非专利文献3)，对癌症的发生具有抑制效果(例如，参照非专利文献4)，保护宿主不受病毒感染(例如，参照非专利文献5、6)，可能产生抗菌物质(例如，参照非专利文献7)等促进宿主的健康的特性。在双歧杆菌属中，有可以广泛应用于世界范围内的发酵乳制品的制备的菌株。进而，希望双歧杆菌的质粒应用于益生菌载体、感染性患者的经口疫苗的载体。根据最近的报告已明确在全身给药后，长双歧杆菌积累于低氧的实体瘤中(例如，参照非专利文献8、9)，带有与长双歧杆菌hup启动子相融合的大肠杆菌codA的重组质粒pBLES100-本文档来自技高网...

【技术保护点】
双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体，其特征在于，其具有：含有ｐＴＢ６的复制原点ｏｒｉＶ－ｒｅｐＢ区域，不含ＭｅｍｂＢ、ＭｏｂＡ、ＯｒｆＩ和ｏｒｉＴ区域的源于ｐＴＢ６的区域部分，和含有大肠杆菌的复制原点ｏｒｉＣ区域的源于大肠杆菌的质粒部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：加纳康正，滨地芳典，藤森实，佐佐木贵之，河野享子，天野纯，谷口俊一郎，
申请(专利权)人：阿内罗药物科学株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]