血脑屏障穿梭体制造技术

本发明专利技术涉及结合血脑屏障上的受体(R/BBB)的血脑屏障穿梭体及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及结合血脑屏障上的受体(R/BBB)的血脑屏障穿梭体及其使用方法。【专利说明】血脑屏障穿梭体
本专利技术涉及结合血脑屏障上的受体（R/BBB)的血脑屏障穿梭体及其使用方法。
技术介绍
神经疾病药物（例如具有低脑穿透的大生物治疗药物或小分子药物）的脑穿透， 受广泛的且不可渗透的血脑屏障（BBB)以及神经血管单元（NVU)中的其它细胞组分严格限 制。已经试验了许多克服该阻碍的策略，并且一种策略是利用在脑毛细血管内皮上表达的 内源性受体所介导的胞吞转运途径。已经针对这些受体设计了重组蛋白诸如单克隆抗体或 肽，以实现受体介导的生物治疗剂向脑的递送。但是，使脑摄取最大化、同时使脑内皮细胞 (BEC)内的错误分选（miss-sorting)以及在BEC中的某些细胞器（特别是导致生物治疗剂 的降解的细胞器）内的积累程度最小化的策略仍未得到探究。 单克隆抗体和其它生物治疗剂在治疗中枢神经系统（CNS)的病理学中具有巨大 治疗潜力。但是，它们进入脑中的途径被BBB阻止。以前的研究已经阐明，非常小百分比（大 约0? 1% )的在血流中注射的IgG能够穿透进CNS隔室中（Felgenhauer，Klin. Wschr. 52 : 1158-1164(1974))。由于抗体在CNS内的低浓度，这必然会限制任何药理学作用。 因此，需要使神经疾病药物穿过BBB的递送系统，以将药物有效地穿梭进脑中。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术提供了一种血脑屏障穿梭体，其包含脑效应物实体、接头和一 个结合血脑屏障受体的单价结合实体，其中所述接头将所述效应物实体与所述结合血脑屏 障受体的单价结合实体偶联。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体选自蛋白、多肽和肽。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体包含选自以下的分子：血脑屏障受体配体、scFv、Fv、sFab、VHH，优选sFab。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述血脑受体选自转铁蛋白受 体、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、低密度脂蛋白受体相关的蛋白8、低密度脂蛋白受 体相关的蛋白1和结合肝素的表皮生长因子样生长因子，优选转铁蛋白受体。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体包含一个针对转铁蛋白受体的scFab，更具体地是识别被包含在Seq. Id. No. 14、15 或16的氨基酸序列中的转铁蛋白受体内的表位的scFab。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体选自神经疾病 药物、神经营养因子、生长因子、酶、细胞毒性剂、针对脑靶标的抗体、针对脑靶标的单克隆 抗体、针对脑祀标的肽。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑靶标选自0 -分泌酶1、 A3、表皮生长因子、表皮生长因子受体2、Tau、磷酸化的Tau、载脂蛋白E4、a突触核蛋白、 a突触核蛋白的寡聚片段、CD20、亨廷顿蛋白、朊病毒蛋白、富含亮氨酸的重复序列激酶2、 帕金蛋白、早老蛋白2、Y分泌酶、死亡受体6、淀粉样蛋白前体蛋白、p75神经营养因子受体 和胱天蛋白酶6。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体选自蛋白、多 肽和肽。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑受体的单价结合 实体选自蛋白、多肽和肽，且所述单价结合实体通过所述接头偶联至所述脑效应物实体的 c-末端。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述脑效应物实体包含针对脑靶 标的全长抗体，优选全长IgG。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述血脑屏障穿梭体包含作为脑 效应物实体的全长IgG抗体、接头和一个作为结合血脑受体的单价结合实体的scFab，其中 所述scFab通过所述接头偶联至所述IgG抗体的重链之一的Fc部分的C-末端。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对AP的全 长抗体。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述针对A0的抗体包含：(a) H-CDR1，其包含Seq. Id. No. 5的氨基酸序列，（b)H_CDR2,其包含Seq. Id. No. 6的氨基酸序 列，（c)H_CDR3,其包含 Seq.Id.No.7 的氨基酸序列，（d)L-CDRl，其包含 Seq.Id.No.8 的 氨基酸序列，（6)1^-〇?2，其包含5叫.1(0〇.9的氨基酸序列，和江)1-〇)1?3，其包含5叫. Id. No. 10的氨基酸序列。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述针对AP的抗体包含：包含 Seq. Id. No. 11的氨基酸序列的VH结构域和包含Seq. Id. No. 12的氨基酸序列的结构域。 在血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对AP的全长 抗体，且所述单价结合实体是针对转铁蛋白受体的scFab，更具体地是识别被包含在Seq. Id. No. 14、15或16的氨基酸序列中的转铁蛋白受体内的表位的scFab。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述针对脑靶标的血脑屏障穿梭 体的抗体的第一重链包含第一二聚化模块，且所述针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的 第二重链包含第二二聚化模块，从而允许所述两个重链的异源二聚化。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，根据突出物进入孔洞（knobs into holes)策略，所述针对脑祀标的血脑屏障穿梭体的抗体的第一重链的第一二聚化模 块包含突出物，且所述针对脑靶标的血脑屏障穿梭体的抗体的第二重链的二聚化模块包含 孔洞。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对磷酸化的 Tau的全长抗体，且所述单价结合实体是一个针对转铁蛋白受体的scFab。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述效应物实体是针对a突触 核蛋白的全长抗体，且所述单价结合实体是一个针对转铁蛋白受体的scFab。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述接头是肽接头，优选地是具 有至少25个氨基酸长度的氨基酸序列的肽，更优选地具有30-50个氨基酸的长度，特别地 所述接头是（G 4S)6G2或（G4S)4。 本专利技术的下述3个实施方案涉及血脑屏障穿梭体，其中所述脑效应物实体是蛋 白、多肽或肽，前提条件是，所述脑效应物实体不是全长抗体，尤其全长IgG。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述结合血脑屏障受体的单价结 合实体包含CH2-CH3 Ig实体和一个结合血脑屏障受体的sFab，其中所述sFab通过第二接 头偶联至CH2-CH3 Ig实体的C-末端。 在所述血脑屏障穿梭体的一个特定实施方案中，所述血脑屏障穿梭体包含脑效应 物实体、接头、CH2-CH3 Ig结构域、第二接头和一个结合血脑屏障受体的sFab,其中所述脑 效应物实体通过第一接头偶联至CH2-CH3Ig结构域的N-末端，且所述sFab通过第二接头 偶联至CH2-CH3 Ig结构域的C-末端。 在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血脑屏障穿梭体，其包含脑效应物实体、接头和一个结合血脑屏障受体的单价结合实体，其中所述接头将所述效应物实体与所述结合血脑屏障受体的单价结合实体偶联。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：贝恩德·博尔曼，佩尔奥拉·弗雷斯克加德，彼得·迈尔，延斯·尼韦纳，阿兰·蒂索达盖特，爱德华·乌里希，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH