一种编码新的人血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白的基因及其应用和制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新的人血管紧张素Ⅱ－１受体相关蛋白和编码此多肽的ＤＮＡ（ＲＮＡ）以及通过重组技术生产此多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如心血管疾病，冠心病、原发性高血压及非胰岛素依赖型糖尿病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码该血管紧张素Ⅱ－１受体相关蛋白的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种编码新的人蛋白-血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白的基因的序列。血管紧张素Ⅱ受体(Angiotensin Ⅱ receptors，Ang Ⅱ)是一种血管活性肽，可与靶组织(如肾、肾上腺、血管)的特殊膜结合受体相互作用。目前已经获得1型、2型和3型等三种血管紧张素Ⅱ的受体(Angiotensin Ⅱ receptors type 1、type 2、type3；AT1、AT2、AT3)，它们在结构上都呈现七个疏水的横跨膜功能域结构，可同时结合一对Gq蛋白，其主要的生物学功能为信号转导。AT1和AT2的氨基酸具有46％的同源性，其中AT1由AT1a和AT1b组成(两者具有相同的编码区和不同的非编码区，氨基酸同源性高于90％)，主要在成人的心血管系统、肾上腺和肾脏内表达，在胎儿的整个身体里可广泛表达并随着胎儿的出生而急剧下降；AT2则主要在成人的脑、肾上腺髓质和卵巢内表达。AT1在胞内的信号转导主要通过激活磷脂酶C产生两种结果即蛋白激酶C的活化和Ca2+的固定来实现的，近来，还发现酪氨酸激酶也是AT1信号转导的途径之一。临床研究已经表明，AT1的拮抗剂能够引起血浆内AngⅡ水平的上升，并选择性地刺激AT2，而且AT2本身具有抗AT1的作用，这样AT2作为AT1拮抗剂的功能在临床治疗中具有重要的意义。血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白(AT1 receptor associated protein，ATRAP)是最新发现的一种AT1受体的相关蛋白，鼠的ATRAP分子量为18kDa，它只与AT1a受体的羧端胞质功能域相互作用，而不与AT2、舒缓激肽B2、beta2肾上腺素受体等相互作用。ATRAP的mRNA在鼠的肾脏、心脏和睾丸中表达，而在鼠的肺脏、肝脏、脾脏和脑中不表达。ATRAP和AT1a受体的相互作用可以通过亲和层析法、荧光显微法和两种蛋白的特异免疫沉淀法来确定。ATRAP在COS-7细胞中的过量表达抑制了AT1a受体对磷脂酶C的激活作用。由于AT1是肾素-血管紧张素系统(RA系统)的重要组成成分，可介导血管舒缩、水盐代谢及血管平滑肌增生和功能调节等生理学效应，是RA系统作用于效应器的关键步骤，也是高血压遗传学的致病基因之一，因此，ATRAP通过与AT1的相互作用而对多种心血管类疾病的发病进行检测和治疗，例如用于检测和治疗冠心病、原发性高血压及非胰岛素依赖型糖尿病等，特别优选用于对冠心病的治疗。因此，以治疗为目的的研究和开发ATRAP多肽及其抗体、兴奋剂、抑制剂，在生理学、药理学上有着重要意义(Soubrier F et al，J Hypertension，1993，11.Suppl 5s20-27)。本专利技术的一个目的是提供新的分离的膜蛋白血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽。本专利技术的另一个目的是提供编码膜蛋白血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽的DNA序列。本专利技术的另一个目的是提供编码胞内膜血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽的重组表达载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码膜蛋白血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽的重组表达载体的宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产编码膜蛋白血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的膜蛋白血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽的抗体和拮抗剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与膜蛋白血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽功能异常相关的疾病的方法。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。在本专利技术的一个实施方案中，本专利技术提供了一种基本上纯的血管紧张素Ⅱ-1型受体相关蛋白多肽，其基本上由SEQ ID NO2所示的氨基酸序列组成。血管紧张素Ⅱ-1受体的相关蛋白多肽的特征是具有一个横跨膜功能域。本专利技术的多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。它包含的多核苷酸序列全长为1108个碱基，其开放读框为SEQ ID NO1中56-535位，编码159个氨基酸的人血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白。根据氨基酸序列同源比较发现，此多肽与大鼠睾丸组织中的ATRAP有76％的同源性，且该多肽具有ATRAP基因家族的保守碱基，可推断出该新的人ATRAP具有ATRAP基因家族相似的结构和功能。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本专利技术所用，“分离的血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白或多肽”是指血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术还包括该多肽的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术所述多肽相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术还包括人血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的天然人血管紧张素Ⅱ-1受体相关蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术的多肽片段、衍生物或类似物可以是(ⅰ)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ⅱ)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(ⅲ)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(ⅳ)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。在另一个实施方案中，本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。本专利技术的多核苷酸序列包括SEQ IDNO1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO1所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本专利技术所用，“简并的变异体”在本专利技术中是指编码具有SEQ ID NO2的蛋白质或肽但与SEQ ID NO1所示的编码区序列有差别的核酸序列。编码SEQ ID NO2的成熟多肽的多核苷酸包括只有成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。术语“编码多肽的多核苷酸”是指包括编码此多肽的多核苷酸和包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。本专利技术还涉及上述描述多核苷酸的变异体，其编码与本专利技术有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片断、类似物和衍生物。此本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的ＡＴＲＡＰ多肽，它包含：具有ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海生元基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]