一种环氧活化的亲和层析介质制造技术

本案涉及环氧活化的亲和层析介质，以纤维素微球为基质，在纤维素微球表面交联由1,2‑环氧基烷烃、聚乳酸‑羟基乙酸共聚物和聚乙二醇组成的复合物，1,2‑环氧基烷烃与配基连接；其中，所述1,2‑环氧基烷烃包括1,2‑环氧十二烷、1,2‑环氧十三烷、1,2‑环氧十四烷、1,2‑环氧十五烷、1,2‑环氧十六烷、1,2‑环氧十七烷、1,2‑环氧十八烷中的一种或者多种。发明专利技术所得亲和层析介质表面环氧基密度大，偶联配体数量多，亲和层析效率高，同时制备工艺简单，利于大规模推广应用。

An epoxide activated affinity chromatography medium

The case involved affinity chromatography epoxy activation, with cellulose microspheres as matrix composites consisting of 1,2 epoxy alkane, polylactic acid glycolic acid and polyethylene glycol on the surface crosslinked cellulose microspheres, 1,2 epoxy alkane connected with ligands; among them, the 1,2 epoxy alkane comprising one or a variety of 1,2 epoxy twelve alkanes, 1,2 thirteen, 1,2 epoxy alkyl epoxy fourteen alkyl, alkyl, 1,2 fifteen 1,2 epoxy epoxy sixteen alkyl, 1,2 seventeen, 1,2 epoxy alkyl epoxy alkyl in eighteen. The obtained affinity chromatography media have many advantages, such as large density of epoxy group, high number of coupling ligands, high affinity chromatography, and simple preparation process, which is conducive to large-scale application.

【技术实现步骤摘要】
一种环氧活化的亲和层析介质
本专利技术涉及一种层析介质，具体涉及一种环氧活化的亲和层析介质。
技术介绍
亲和层析技术是基于生物分子与其他配基分子之间(如抗原与抗体、酶与底物、激素与受体、核酸中的互补链、多糖与蛋白复合体等)的亲和吸附原理建立和发展起来的。亲和层析是通过介质上的配基与目标分子之间的特异性吸附和解离来实现纯化目标蛋白质等生物大分子的目的，由于这种特异性的作用力，亲和层析具有高选择性、高活性回收等特点，对分离含量极少又不稳定的生物活性物质极为有效，成为生物制药领域中分离纯化生物活性物质的一种重要方法。亲和层析技术作为蛋白质等生物大分子分离纯化的重要手段之一，近些年来越来越受到人们的重视，对亲和层析介质的基质、配体以及连接臂等的研究都有所进展。其中，将配体连接到基质上是构建亲和层析介质的关键步骤，环氧活化基质是常用方法之一，经环氧活化的基质可用于各种含有氨基、巯基或羟基的亲和配基(蛋白质、多肽、氨基酸或糖等)的偶联，应用十分广泛。通常以琼脂糖凝胶为基质，采用环氧氯丙烷或者烯丙基缩水甘油醚活化琼脂糖凝胶，随后可直接用于各种配基的偶联，但是高碱性的活化条件容易导致基质的破坏，同时环氧基在强碱环境下会与基质上的羟基交联，使配基的偶联数量减少，降低亲和层析效率。
技术实现思路
针对现有技术的不足之处，本专利技术的目的在于提供一种新的环氧活化的亲和层析介质。本专利技术的技术方案概述如下：以纤维素微球为基质，所述纤维素微球表面交联由1,2-环氧基烷烃、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇组成的复合物；所述1,2-环氧基烷烃与配基连接；优选的是，所述1,2-环氧基烷烃包括1,2-环氧十二烷、1,2-环氧十三烷、1,2-环氧十四烷、1,2-环氧十五烷、1,2-环氧十六烷、1,2-环氧十七烷、1,2-环氧十八烷中的一种或者多种。优选的是，所述复合物中1,2-环氧基烷烃、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇三组分的质量百分数如下：1,2-环氧基烷烃45～50wt％；聚乳酸-羟基乙酸共聚物15～20wt％；聚乙二醇35～40wt％。优选的是，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸与羟基乙酸的物质的量比为4∶1。优选的是，所述聚乙二醇的平均分子量在400～600。优选的是，所述复合物与纤维素微球的质量比为1∶0.5～0.6。优选的是，所述纤维素微球的粒径为30～100μm。优选的是，所述配基含有氨基、巯基或者羟基中的一种或者多种基团。本专利技术的有益效果是：本案选用纤维素微球作为基质，一方面纤维素由长糖链构成，能够与复合物中的1,2-环氧烷烃等所含长链结构实现交联，使复合物能够负载于基质表面，另一方面纤维素不溶于水以及有机溶剂，化学性质稳定，并且相较于凝胶类基质耐压性强，在高流速下不易变形；相比于现有技术中在基质表面通过连接臂键合1,2-环氧氯丙烷或者烯丙基缩水甘油醚实现环氧基活化，本专利技术采用具有长碳链的1,2-环氧基烷烃进行基质表面的环氧基团活化，避免在碱性环境下发生多次键合反应，工艺简单，并且环氧基活化效率高，基质表面环氧基密度大；复合物中聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇中的长链结构能够与1,2-环氧基烷烃的长链条交缠，使1,2-环氧基烷烃能够粘结于基质表面，尤其聚乙二醇易于与非极性长碳链相互结合，聚乳酸-羟基乙酸共聚物具备良好的生物相容性、成膜性等，有利于复合物在基质表面的粘结附着；本专利技术所得亲和层析介质表面环氧基密度大，偶联配体数量多，亲和层析效率高，同时制备工艺简单，利于大规模推广应用。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。本专利技术提供了一种环氧活化的亲和层析介质，通过下述实施例以及对比例具体阐述。实施例1制备过程如下：(1)将20g粒径在30～100μm的纤维素微球浸泡在100mL浓度为50wt％的硫酸溶液中，在55～60℃下磁力搅拌30分钟，过滤得到活化的纤维素微球；(2)将25g1,2-环氧十二烷、10g聚乳酸-羟基乙酸共聚物、20g聚乙二醇、0.2g二亚乙基三胺混合，并加入50mL无水乙醇，在55～60℃搅拌30分钟并超声15分钟，形成均匀的液态复合物；(3)将步骤(1)所得的活化纤维素微球置于步骤(2)的液态复合物中，在55～60℃下搅拌3～4小时，降低温度在45～50℃下搅拌2～3小时，然后降温至20～25℃搅拌1～2小时，最后在5～10℃搅拌1～2小时，结束反应，过滤微球，用去离子水冲洗并干燥，得到环氧活化的亲和层析介质。实施例2制备过程如下：将实施例1的步骤(2)中1,2-环氧十二烷用35g1,2-环氧十八烷代替，两者的物质的量相同，其余制备过程与实施例1相同。实施例3制备过程如下：将实施例1的步骤(2)中1,2-环氧十二烷用12g1,2-环氧十六烷和23g1,2-环氧十五烷代替，其余制备过程与实施例1相同。对比例1制备过程如下：将实施例1步骤(1)中纤维素微球用相同理解的琼脂糖凝胶微球代替，其余制备过程与实施例1相同。对比例2制备过程如下：将实施例1步骤(2)中1,2-环氧十二烷用相同物质的量的烯丙基缩水甘油醚代替，其余制备过程与实施例1相同。对比例3制备过程如下：将实施例1步骤(2)中10g聚乳酸-羟基乙酸共聚物、20g聚乙二醇用30g聚乳酸-羟基乙酸共聚物代替，其余制备过程与实施例1相同。对比例4制备过程如下：将实施例1步骤(2)中10g聚乳酸-羟基乙酸共聚物、20g聚乙二醇用30g聚乙二醇代替，其余制备过程与实施例1相同。对比例5制备过程如下：市售的环氧活化亲和层析介质。为了考察本专利技术所制备的亲和层析介质的环氧活化程度，测试实施例1～3和对比例1～5的表面环氧基密度。首先，称取0.5g干燥的环氧活化亲和层析介质，向其中加入3mL1.3mol/L硫代硫酸钠和2滴酚酞指示液，密闭条件下在40℃恒温振荡器中，以200r/min转速震荡30分钟；随后用0.01mol/L盐酸标准溶液滴定，直至溶液由红色变为无色，并在半分钟内保持不变为止，记录所用盐酸标准溶液体积VHCl，根据公式可得出环氧基密度，其中S为环氧基修饰密度(mol/L)、CHCl为盐酸标准溶液的浓度(mol)、m为纤维素微球的质量(g)、ρ为纤维素微球的密度约1.45g/mL。每个样品进行三次平行测试取平均值。表1记录了实施例1～3和对比例1～5的表面环氧基修饰密度。实施例1～3的表面环氧基密度相差不多，说明采用本专利技术所列举的长链1,2-环氧基烷烃均能够得到较大的表面环氧基密度，有利于键合较多的配体，提高亲和分离效率；对比例1中琼脂糖凝胶微球无法与复合物中长链实现有效的交联，长链1,2-环氧基烷烃在基质表面固载量较少，因此环氧基密度低；对比例2用常用的环氧基修饰用化合物烯丙基缩水甘油醚代替长链1,2-环氧基烷烃，前者与聚乙二醇的结合力弱，形成复合物中融合量少，并且在纤维素微球表面交联效果差，易被冲淋洗去，导致亲和层析介质的环氧基密度非常低；对比例3～4的实验数据说明复合物中聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇在环氧活化中具有重要作用，任何物质的缺少均会影响亲和层析介质的环氧活化密度；通过实施例1与对比例5的比较，可以看出本专利技术所制备亲和层析介质的环氧活化密度都很大提高。表1尽管本专利技术的实施方案已本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环氧活化的亲和层析介质，其特征在于，以纤维素微球为基质，所述纤维素微球表面交联由1,2‑环氧基烷烃、聚乳酸‑羟基乙酸共聚物和聚乙二醇组成的复合物；所述1,2‑环氧基烷烃与配基连接；其中，所述1,2‑环氧基烷烃包括1,2‑环氧十二烷、1,2‑环氧十三烷、1,2‑环氧十四烷、1,2‑环氧十五烷、1,2‑环氧十六烷、1,2‑环氧十七烷、1,2‑环氧十八烷中的一种或者多种。

【技术特征摘要】
1.一种环氧活化的亲和层析介质，其特征在于，以纤维素微球为基质，所述纤维素微球表面交联由1,2-环氧基烷烃、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇组成的复合物；所述1,2-环氧基烷烃与配基连接；其中，所述1,2-环氧基烷烃包括1,2-环氧十二烷、1,2-环氧十三烷、1,2-环氧十四烷、1,2-环氧十五烷、1,2-环氧十六烷、1,2-环氧十七烷、1,2-环氧十八烷中的一种或者多种。2.根据权利要求1所述的亲和层析介质，其特征在于，所述复合物中1,2-环氧基烷烃、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇三组分的质量百分数如下：1,2-环氧基烷烃45～50wt％；聚乳酸-...

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿欢欢，朱至放，
申请(专利权)人：苏州博进生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32