一种阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法技术

本发明专利技术提供一种阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，其包括如下步骤：取含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液，调节其

【技术实现步骤摘要】
一种阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法


[0001]本专利技术涉及层析分离技术，特别是指一种阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法
。

技术介绍

[0002]胰岛素主要作用在肝脏
、
肌肉及脂肪组织，控制着蛋白质
、
糖
、
脂肪三大营养物质的代谢和贮存
。
目前，临床所需的胰岛素主要通过重组
DNA
技术获取，利用微生物如大肠杆菌
、
毕赤酵母
、
酿酒酵母等发酵平台，获得大量的表达胰岛素前体
。
其中，毕赤酵母因其发酵成本低廉，应用较为广泛
。
在毕赤酵母发酵液中分离提纯重组胰岛素前体时，可采用层析法
。
采用疏水层析可去除发酵液中的大部分杂质，但存在着交换容量较小
、
活性回收率较低等不足，使其应用受到限制
。
采用阳离子交换层析的方法，对毕赤酵母发酵液中的杂质去除效果差，导致纯化后的重组胰岛素前体纯度较低
。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，以解决现有技术中的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法难以除去毕赤酵母发酵液中的杂质
、
得到的重组胰岛素前体纯度低的问题
。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
[0005]一种阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，包括如下步骤：
[0006](1)
取含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液，调节其
pH
值至2‑5，离心后，得到上清液；
[0007](2)
取步骤
(1)
中得到的所述上清液，作为上柱液，采用阳离子交换层析柱进行层析吸附，再采用缓冲液洗脱所述阳离子交换层析柱，得到洗脱液；
[0008](3)
取步骤
(2)
中得到的所述洗脱液，经脱盐
、
干燥，得到重组胰岛素前体
。
[0009]优选地，步骤
(1)
中，采用乙酸溶液调节所述含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液的
pH
值
。
[0010]优选地，步骤
(2)
中，所述阳离子交换层析柱的基质为聚丙烯酸酯，功能配基为
‑
(CH2)2N(CH3)2。
[0011]优选地，步骤
(2)
中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液
。
[0012]优选地，步骤
(2)
中，所述吸附的流速为
100
‑
120ml/min。
[0013]优选地，步骤
(2)
中，所述洗脱的流速为
150
‑
180ml/min。
[0014]优选地，步骤
(3)
中，所述脱盐采用超滤膜
。
[0015]优选地，步骤
(3)
中，所述干燥采用冷冻干燥
。
[0016]优选地，步骤
(1)
中，还包括对上清液进行活性炭吸附的步骤
。
[0017]本专利技术的上述方案至少包括以下有益效果：
[0018]本专利技术的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，包括如下步骤：
取含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液，调节其
pH
值至2‑5，离心后，得到上清液；取得到的所述上清液，作为上柱液，采用阳离子交换层析柱进行层析吸附，再采用缓冲液洗脱所述阳离子交换层析柱，得到洗脱液；取得到的所述洗脱液，经脱盐
、
干燥，得到重组胰岛素前体
。
本专利技术所述的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，对毕赤酵母发酵液中的杂质去除效果好，纯化后的重组胰岛素前体纯度较高
。
具体实施方式
[0019]本专利技术各实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行
。
所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，不同厂家
、
型号的原料并不影响本专利技术技术方案的实施及技术效果的实现
。
[0020]实施例1[0021]本实施例中的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，包括如下步骤：
[0022](1)
取含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液，采用乙酸溶液调节其
pH
值至2，离心后，对得到的上清液采用活性炭吸附进行除杂，得到除杂后的上清液；
[0023](2)
取步骤
(1)
中得到的所述上清液，作为上柱液，采用阳离子交换层析柱进行层析吸附，再采用缓冲液洗脱所述阳离子交换层析柱，得到洗脱液；
[0024]其中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液
。
所述阳离子交换层析柱的基质为聚丙烯酸酯，功能配基为
‑
(CH2)2N(CH3)2。
所述吸附的流速为
110ml/min。
所述洗脱的流速为
150ml/min。
[0025](3)
取步骤
(2)
中得到的所述洗脱液，经超滤膜脱盐
、
冷冻干燥，得到重组胰岛素前体
。
[0026]实施例2[0027]本实施例中的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，包括如下步骤：
[0028](1)
取含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液，采用乙酸溶液调节其
pH
值至5，离心后，对得到的上清液采用活性炭吸附进行除杂，得到除杂后的上清液；
[0029](2)
取步骤
(1)
中得到的所述上清液，作为上柱液，采用阳离子交换层析柱进行层析吸附，再采用缓冲液洗脱所述阳离子交换层析柱，得到洗脱液；
[0030]其中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液
。
所述阳离子交换层析柱的基质为聚丙烯酸酯，功能配基为
‑
(CH2)2N(CH3)2。
所述吸附的流速为
120ml/min。
所述洗脱的流速为
180ml/min。
[0031](3)
取步骤
(2)
中得到的所述洗脱液，经超滤膜脱盐
、
冷冻干燥，得到重组胰岛素前体
。
[0032]实施例3[0033]本实施例中的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，包括如下步骤：
[0034](1)
取含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液，采用乙酸溶液调节其
pH
值至3，离心后，对得到的上清液采用活性炭吸附进行除杂，得到除杂后的上清液；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
取含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液，调节其
pH
值至2‑5，离心后，得到上清液；
(2)
取步骤
(1)
中得到的所述上清液，作为上柱液，采用阳离子交换层析柱进行层析吸附，再采用缓冲液洗脱所述阳离子交换层析柱，得到洗脱液；
(3)
取步骤
(2)
中得到的所述洗脱液，经脱盐
、
干燥，得到重组胰岛素前体
。2.
根据权利要求1所述的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，其特征在于，步骤
(1)
中，采用乙酸溶液调节所述含有重组胰岛素前体的毕赤酵母发酵液的
pH
值
。3.
根据权利要求1所述的阳离子交换层析树脂分离提纯重组胰岛素前体的方法，其特征在于，步骤
(2)
中，所述阳离子交换层析柱的基质为聚丙烯酸酯，功能配基为
‑
(CH2)2N(CH3)2。4.
根据权利要求1所述的阳离子交...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，秦佳，朱至放，
申请(专利权)人：苏州博进生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：