一种层析活化偶联介质及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种层析活化偶联介质及其制备方法，所述的层析活化偶联介质，质，以聚丙烯酸酯微球为基球，且具有如式(Ⅰ)所示的结构。本发明专利技术所述的层析活化偶联介质，以聚丙烯酸酯微球为基球，由于聚丙烯酸酯微球具有较高的机械强度，因此，在装填层析柱时能承受更高的压力，可以耐受1MPa的压力，经高压后仍能保持良好的分离效果，具有更长的使用寿命。具有更长的使用寿命。具有更长的使用寿命。

【技术实现步骤摘要】
一种层析活化偶联介质及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别是指一种层析活化偶联介质及其制备方法。

技术介绍

[0002]目前生物医药的应用扩大了疑难病症的研究领域，使原先威胁人类生命健康的重大疾病得以有效控制。在生物制药过程中，如何提高药物的纯度和生物安全性，是重组蛋白、抗体等生物药研发和生产过程中的关键性步骤。
[0003]目前市面上使用的亲和层析活化偶联介质主要是琼脂糖产品，这类层析介质的机械强度较低，在工业生产中装填层析柱时因为耐受压力的低下而限制了其分离效果的提升，同时也限制了该类层析介质的使用寿命。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是提供一种层析活化偶联介质及其制备方法，以解决现有技术中的层析活化偶联介质机械强度低的问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种层析活化偶联介质，以聚丙烯酸酯微球为基球，且具有如式(Ⅰ)所示的结构：
[0007][0008]优选地，所述聚丙烯酸酯微球的粒径为50
‑
90微米。
[0009]本专利技术还提供一种层析活化偶联介质的制备方法，包括如下步骤：
[0010](1)取聚丙烯酸酯微球，加入烯丙基缩水甘油醚，反应得到烯丙基化微球；
[0011](2)向步骤(1)中得到的所述烯丙基化微球中，加入溴，反应得到溴化微球；
[0012](3)向步骤(2)中得到的所述溴化微球中，加入6
‑
氨基己酸，反应得到羧基化微球；
[0013](4)向步骤(3)中得到的所述羧基化微球中，加入N
‑
羟基琥珀酰亚胺，反应得到层析活化偶联介质。
[0014]优选地，步骤(1)具体包括：取聚丙烯酸酯微球、硫酸钠、氢氧化钠、硼氢化钠，在温度40
‑
50℃、搅拌速度110
‑
150rpm下，反应1
‑
2h，得到第一反应物；再向其中加入烯丙基缩水甘油醚，在温度40
‑
50℃、搅拌速度110
‑
150rpm下，反应16
‑
20h，得到烯丙基化微球。
[0015]优选地，步骤(1)中，所述聚丙烯酸酯微球、硫酸钠、氢氧化钠、硼氢化钠、烯丙基缩水甘油醚的重量比为1000:165:50:7:(100
‑
300)；
[0016]任选地，步骤(1)中的反应以水作为反应溶剂。
[0017]优选地，步骤(2)具体包括：向步骤(1)中得到的所述烯丙基化微球中，加入乙酸钠，混合均匀；再向其中加入溴，在温度20
‑
35℃、搅拌速度110
‑
150rpm下，反应1
‑
2h；然后，向其中加入甲酸钠，反应得到溴化微球。
[0018]优选地，步骤(2)中，所述烯丙基化微球、乙酸钠的重量比为1000:(2
‑
8)；
[0019]任选地，所述烯丙基化微球与所述溴的重量比为1000：(5
‑
10)；所述烯丙基化微球与所述甲酸钠的重量比为1000：(10
‑
20)；
[0020]任选地，步骤(2)中的反应以水作为反应溶剂。
[0021]优选地，步骤(3)具体包括：向步骤(2)中得到的所述溴化微球中，加入6
‑
氨基己酸的水溶液，在温度40
‑
50℃、搅拌速度110
‑
150rpm下，反应16
‑
20h，得到羧基化微球；
[0022]任选地，所述6
‑
氨基己酸的水溶液采用NaOH调节pH值至12；
[0023]任选地，所述溴化微球与6
‑
氨基己酸的重量比为1000:(80
‑
110)。
[0024]优选地，步骤(4)具体包括：向步骤(3)中得到的所述羧基化微球中，加入N
‑
羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺，在温度20
‑
35℃、搅拌速度110
‑
150rpm下，反应16
‑
20h，得到层析活化偶联介质。
[0025]优选地，步骤(4)中，所述羧基化微球、N
‑
羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺的重量比为1000:(20
‑
35):(45
‑
60)；
[0026]任选地，步骤(4)中的反应以二氯甲烷作为反应溶剂。
[0027]本专利技术的上述方案至少包括以下有益效果：
[0028]本专利技术的层析活化偶联介质，以聚丙烯酸酯微球为基球，且在所述基球上键合有如式(Ⅰ)所示的化合物。所述的层析活化偶联介质，以聚丙烯酸酯微球为基球，由于聚丙烯酸酯微球具有较高的机械强度，因此，在装填层析柱时能承受更高的压力，可以耐受1MPa的压力，经高压后仍能保持良好的分离效果，具有更长的使用寿命。
[0029]更为重要的是，由于所述基球上键合的化合物具有N
‑
羟基琥珀酰亚胺，因此可以共价结合含伯胺基团的生物配基，进而可应用于免疫亲和层析介质。
[0030]另外，由于特定短肽等小分子配基上也带有伯胺基团，因此，所述层析活化偶联介质还可以偶联特定短肽等小分子配基。同时，由于末端具有N
‑
羟基琥珀酰亚胺基团的活化介质与亲和配基上的氨基亲和性很高，因此反应速度快、效率高，使得亲和配基上的氨基与活化介质之间形成稳定的酰胺键，得到的亲和层析介质在储存和层析过程中很少发生亲和配基泄露的问题。由于6
‑
氨基己酸一端是氨基，可以与溴化微球反应，另一端是羧基，可以与N
‑
羟基琥珀酰亚胺发生偶联反应。通过采用6
‑
氨基己酸进行N
‑
羟基琥珀酰亚胺的偶联反应，可以使反应后得到的层析活化偶联介质，与亲和配基的结合性能大大提高。
附图说明
[0031]图1是本专利技术效果实验例2中的NHS浓度测定的标准曲线；
[0032]图2是本专利技术效果实验例3中测定的蛋白浓度浓度的标准曲线。
具体实施方式
[0033]本专利技术各实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，不同厂家、型号的原料并不影响本专利技术技术方案的实施及技术效果的实现。
[0034]实施例1
[0035]本实施例中的层析活化偶联介质，以聚丙烯酸酯微球为基球，且具有如式(Ⅰ)所示的结构：
[0036][0037]所述聚丙烯酸酯微球的粒径为70微米。
[0038]本实施例所述的层析活化偶联介质的制备方法，包括如下步骤：
[0039](1)取聚丙烯酸酯微球，加入烯丙基缩水甘油醚，反应得到烯丙基化微球；
[0040]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种层析活化偶联介质，其特征在于，以聚丙烯酸酯微球为基球，且具有如式(Ⅰ)所示的结构：2.根据权利要求1所述的层析活化偶联介质，其特征在于，所述聚丙烯酸酯微球的粒径为50
‑
90微米。3.一种层析活化偶联介质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取聚丙烯酸酯微球，加入烯丙基缩水甘油醚，反应得到烯丙基化微球；(2)向步骤(1)中得到的所述烯丙基化微球中，加入溴，反应得到溴化微球；(3)向步骤(2)中得到的所述溴化微球中，加入6
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氨基己酸，反应得到羧基化微球；(4)向步骤(3)中得到的所述羧基化微球中，加入N
‑
羟基琥珀酰亚胺，反应得到层析活化偶联介质。4.根据权利要求3所述的层析活化偶联介质的制备方法，其特征在于，步骤(1)具体包括：取聚丙烯酸酯微球、硫酸钠、氢氧化钠、硼氢化钠，在温度40
‑
50℃、搅拌速度110
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150rpm下，反应1
‑
2h，得到第一反应物；再向其中加入烯丙基缩水甘油醚，在温度40
‑
50℃、搅拌速度110
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150rpm下，反应16
‑
20h，得到烯丙基化微球。5.根据权利要求4所述的层析活化偶联介质的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述聚丙烯酸酯微球、硫酸钠、氢氧化钠、硼氢化钠、烯丙基缩水甘油醚的重量比为1000:165:50:7:(100
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300)；任选地，步骤(1)中的反应以水作为反应溶剂。6.根据权利要求3所述的层析活化偶联介质的制备方法，其特征在于，步骤(2)具体包括：向步骤(1)中得到的所述烯丙基化微球中，加入乙酸钠，混合均匀；再向其中加入溴，在温度20
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35℃、搅拌速度110
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150rpm下，反应1
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴学星，秦佳，高飞，朱至放，瞿欢欢，郭智，王祉羲，
申请(专利权)人：苏州博进生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：