一种地特胰岛素的分离方法技术

本发明专利技术公开了一种地特胰岛素的分离方法，属于多肽合成分离领域，具体涉及将六水氯化铁和四水氯化亚铁在酸性溶液中混合，然后加入改性剂，制备得到改性磁性纳米粒子，然后以改性磁性纳米粒子作为核，使苯乙烯等含烯类试剂通过共价结合于改性磁性纳米粒子上，形成磁性聚苯乙烯微球，然后将磁性聚苯乙烯微球与聚丙烯酸基阳离子交换树脂混合，用于地特胰岛素的纯化分离中，改性剂包括苯乙烯磺酸钠或N

【技术实现步骤摘要】
一种地特胰岛素的分离方法


[0001]本专利技术属于多肽合成分离领域，具体涉及一种地特胰岛素的分离方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合症，其基本病理特征为绝对或相对性胰岛素分泌不足所引起的代谢紊乱。糖尿病已成为继心脑血管疾病、恶性肿瘤后的第三大威胁人类健康的慢性非传染性疾病，尤其是它所带来的视网膜病变、周围神经病变、糖尿病肾病等并发症严重影响了人们的生活质量。
[0003]地特胰岛素(Insulin detemir)是一种中性、可溶的长效胰岛素。它是原型胰岛素去除了B链第30位苏氨酸，通过酰化作用在B29位赖氨酸侧链ε
‑
氨基结合一个14碳的直链脂肪酸而成，是一种胰岛素类似物。酰化的脂肪酸可稳定胰岛素分子的自身聚集，且与白蛋白可逆性结合，使地特胰岛素从皮下注射部位吸收缓慢，作用持续时间延长，在控制血糖的同时能减少低血糖的风险。
[0004]现有由胰岛素前体通过酰化反应制备地特胰岛素或其类似物的方法中不同程度的存在酰化效率低、副产物多、成本高等缺点。因此，开发一种新的可产业化的酰化效率高、副产物少，生产成本低的地特胰岛素或其类似物的高效制备方法，将为工业化应用奠定重要的基础。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种收率高、纯度高的地特胰岛素的合成方法。
[0006]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：一种地特胰岛素的分离方法，包括：将缺苏胰岛素前体desB30与活化酯进行酰化反应，然后分离纯化，得到地特胰岛素；活化酯为肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯；分离纯化中至少采用磁性聚苯乙烯微球或磺化磁性聚苯乙烯微球；磁性聚苯乙烯微球由改性磁性纳米粒子于含有苯乙烯的烯类试剂溶液中聚合形成，改性磁性纳米粒子由改性剂对磁性纳米粒子改性形成；改性剂包括苯乙烯磺酸钠或N
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[2
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(3,4
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二羟基苯基)乙基]‑2‑
丙烯酰胺。本专利技术通过将苯乙烯磺酸钠或N
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[2
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(3,4
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二羟基苯基)乙基]‑2‑
丙烯酰胺作为改性剂用于制备改性磁性纳米粒子，然后以改性磁性纳米粒子作为核，使苯乙烯等含烯类试剂通过共价结合于改性磁性纳米粒子上，形成磁性聚苯乙烯微球；通过本专利技术方法制备的磁性聚苯乙烯微球与聚丙烯酸基阳离子交换树脂混合，可以用于地特胰岛素的纯化分离，本专利技术中制备的磁性聚苯乙烯微球上具有孔隙结构，使用磁性聚苯乙烯微球内部改性剂的基团与外部聚合物的基团可以相互作用，在核壳结构下，可以更好分离纯化地特胰岛素，提高地特胰岛素的收率及纯度。
[0007]优选地，磁性纳米粒子由三价铁试剂与二价铁试剂于酸性溶液制成；和/或，改性磁性纳米粒子由三价铁试剂与二价铁试剂于含有改性剂的酸性溶液制成。
[0008]优选地，改性磁性纳米粒子由六水氯化铁和四水氯化亚铁、改性剂制备得到；和/
或，改性剂的使用量为六水氯化铁的3
‑
12wt%；和/或，四水氯化亚铁的使用量为六水氯化铁的30
‑
50wt%。
[0009]优选地，烯类试剂溶液中含有交联剂；和/或，烯类试剂溶液中含有异戊酸烯丙酯；和/或，烯类试剂溶液中含有引发剂；和/或，烯类试剂溶液中含有聚乙烯醇。
[0010]更优选地，交联剂为二乙烯苯，交联剂的使用量为苯乙烯的10
‑
20wt%；和/或，引发剂为偶氮二异丁腈，引发剂的使用量为苯乙烯的1
‑
3wt%；和/或，改性磁性纳米粒子的使用量为苯乙烯的5
‑
15wt%；和/或，聚乙烯醇的使用量为苯乙烯的1
‑
3wt%；和/或，异戊酸烯丙酯的使用量为苯乙烯的30
‑
50wt%。
[0011]优选地，磺化磁性聚苯乙烯微球由磁性聚苯乙烯微球与浓硫酸在催化剂作用下制备形成。
[0012]更优选地，催化剂为硫酸银，硫酸银的使用量为磁性聚苯乙烯微球的1
‑
5wt%；和/或，浓硫酸的使用量为磁性聚苯乙烯微球的400
‑
600wt%。
[0013]更优选地，磺化磁性聚苯乙烯微球的制备中，使用的溶剂为二氯乙烷，磁性聚苯乙烯微球的使用量为二氯乙烷的60
‑
80wt%。
[0014]优选地，分离纯化中还使用了聚丙烯酸型阳离子交换树脂。
[0015]本专利技术公开了磺化磁性聚苯乙烯微球和聚丙烯酸型阳离子交换树脂在制备地特胰岛素中的用途，磺化磁性聚苯乙烯微球由磁性聚苯乙烯微球与浓硫酸在催化剂作用下制备形成；磁性聚苯乙烯微球由改性磁性纳米粒子于含有苯乙烯的烯类试剂溶液中聚合形成，改性磁性纳米粒子由改性剂对磁性纳米粒子改性形成；改性剂包括苯乙烯磺酸钠或N
‑
[2
‑
(3,4
‑
二羟基苯基)乙基]‑2‑
丙烯酰胺。
[0016]优选地，地特胰岛素的制备中，将制备的缺苏胰岛素前体desB30冻干粉末溶于磷酸氢二钠溶液中，搅拌溶解，得到缺苏胰岛素前体desB30溶液，调节pH至9
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10，加入乙腈，搅拌混合，然后加入活化酯溶液，在20
‑
30℃下搅拌反应30
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120min，反应完成后调节pH至7.0，终止酰化反应，分离纯化，制备得到地特胰岛素。
[0017]更优选地，地特胰岛素的制备中，磷酸氢二钠溶液由磷酸氢二钠与去离子水混合而成，磷酸氢二钠溶液中磷酸氢二钠的含量为1
‑
3wt%。
[0018]更优选地，地特胰岛素的制备中，缺苏胰岛素前体desB30的使用量为磷酸氢二钠溶液的0.3
‑
0.9wt%。
[0019]更优选地，地特胰岛素的制备中，乙腈的使用量为磷酸氢二钠溶液的80
‑
120wt%。
[0020]更优选地，地特胰岛素的制备中，活化酯溶液由肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯与乙腈混合而成，活化酯溶液中肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯的含量为0.5
‑
2wt%，活化酯溶液的使用量以其中肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯为计量基准，肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯的使用摩尔量为缺苏胰岛素前体desB30的使用摩尔量的40
‑
60%。
[0021]更优选地，地特胰岛素的制备中，磷酸氢二钠溶液由磷酸氢二钠与去离子水混合而成，磷酸氢二钠溶液的使用量为100g，其中，磷酸氢二钠的含量为2g；缺苏胰岛素前体desB30的使用量为0.5g；乙腈的使用量为100g；活化酯溶液由肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯与乙腈混合而成，活化酯溶液中肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯的含量为1wt%，活化酯溶液的使用量以其中肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯为计量基准，肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯的使用摩尔量为缺苏胰岛素前体desB30的使用摩尔量的50%。
[0022]优选地，改性磁性纳米粒子的制备中，将六水氯化铁和四水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种地特胰岛素的分离方法，包括：将缺苏胰岛素前体desB30与活化酯进行酰化反应，然后分离纯化，得到地特胰岛素；所述活化酯为肉豆蔻酸丁二酰亚胺酯；所述分离纯化中至少采用磁性聚苯乙烯微球或磺化磁性聚苯乙烯微球；所述磁性聚苯乙烯微球由改性磁性纳米粒子于含有苯乙烯的烯类试剂溶液中聚合形成，改性磁性纳米粒子由改性剂对磁性纳米粒子改性形成；所述改性剂包括苯乙烯磺酸钠或N
‑
[2
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(3,4
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二羟基苯基)乙基]
‑2‑
丙烯酰胺。2.根据权利要求1所述的一种地特胰岛素的分离方法，其特征是：所述磁性纳米粒子由三价铁试剂与二价铁试剂于酸性溶液制成；和/或，所述改性磁性纳米粒子由三价铁试剂与二价铁试剂于含有改性剂的酸性溶液制成。3.根据权利要求1所述的一种地特胰岛素的分离方法，其特征是：所述改性磁性纳米粒子由六水氯化铁和四水氯化亚铁、改性剂制备得到；和/或，改性剂的使用量为六水氯化铁的3
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12wt%；和/或，四水氯化亚铁的使用量为六水氯化铁的30
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50wt%。4.根据权利要求1所述的一种地特胰岛素的分离方法，其特征是：所述烯类试剂溶液中含有交联剂；和/或，所述烯类试剂溶液中含有异戊酸烯丙酯；和/或，所述烯类试剂溶液中含有引发剂；和/或，所述烯类试剂溶液中含有聚乙烯醇。5.根据权利要求4所述的一种地特胰岛素的分离方法，其特征是：所述交联剂为二乙烯苯，交联剂的使用量为苯乙烯的10
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20wt%；和/或，引发剂为偶氮二异丁腈，引发剂的使用量为苯乙烯的1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王辉平，王佳炜，邢海英，
申请(专利权)人：杭州湃肽生化科技有限公司，
类型：发明
国别省市：