一种多肽－人磷脂酶14和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽—人磷脂酶１４，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人磷脂酶１４的多核苷酸的用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种多肽——人磷脂酶14，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。磷脂酶C(PLC)在跨膜信号传导过程中起重要作用。例如，实验证明PLC的活化是人单核白细胞干扰素4受体信号传递的必要条件。活化的PLC将细胞膜中4，5-双磷酸磷脂酰基醇(PIP2)水解为甘油二酰(DAG)和1，4，5三磷酸肌醇(IP3)。而IP3和DAG均可以作为第二信使分别传导激活蛋白激酶C、促进钙的释放和等一系列细胞内生化反应，并最终对分泌、神经活性、代谢及细胞繁殖等细胞活动进行调节。研究发现大多数原发性乳房癌患者也同时表现出EGF受体及PLC-gamma-1的水平增加。同样的，对原发性高血压老鼠的研究表明高血压病发的一个主要原因就是由于PLC的X和Y区域的氨基酸顺序点突变而造成PLC-delta-1的异常活化。很多磷脂酶A2(PLA2)是从蛇、蜥蜴、蜜蜂和哺乳动物中获得的。作为一种突触前的神经毒素，毒蛇的PLA2能够阻断已酰胆碱从神经末端的释放从而抑制神经肌肉的传导。人类PLA2在磷脂的消化及代谢以及炎症反应前体合成等重要细胞过程中起作用。临床研究证明血浆与关节润滑液中PLA2的水平增高与关节炎发病强度表现出正相关，而一些细胞内毒素与免疫调节因子对PLA2的作用有关键性影响。研究还表明PLA2的拮抗性蛋白对与包括关节炎、过敏性炎症、皮肤炎、眼炎以及胶原炎等疾病的治疗有效，并能同时避免由化合物治疗炎症引起的种种副作用。磷脂作为乳化剂被广泛地应用于食品、香料及药物生产中，但近期研究证明PLA1的水解催化反应产物溶血磷脂在酸性条件以及不同的温度条件下更稳定，因而可能更适合这类工厂化生产。另外PLA1还被发现与保护细胞膜的结构和功能的完整性重要相关。例如，实验证明PLA1的主要产物之一的磷脂酰丝氨酸能够抑制细胞分裂素引起的T细胞活化，二氧化氮引起的细胞过氧化伤害与PLA1的活性增高直接相关，PLA1对于紫癜等血小板减少等疾病有一定影响以及细胞内毒素的刺激能够引起PLA1在心脏、肝脏和血清中活性的增高等。磷脂酶A1，A2和C虽然有其催化底物的特异性，但在体内更可能是协同作用的，甚至在功能上可能在一定条件下存在互补的作用。在体外实验中PLA1与PLA2可以在一定条件下交换彼此的底物。在体内，PLA1、PLA2和PLC也经常被发现形成一条磷脂水解反应系统链而存在。根据氨基酸同源比较的结果，本专利技术的多肽被推断鉴定为一种新的人磷脂酶14。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人磷脂酶14的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人磷脂酶14的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人磷脂酶14的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人磷脂酶14的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人磷脂酶14的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人磷脂酶14异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的人磷脂酶14，该多肽是人源的，它包含具有<210>2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有<210>2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少86％相同性(a)编码上述人磷脂酶14的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有<210>2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有<210>1中271-666位的序列；和(b)具有<210>1中1-1485位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的人磷脂酶14”是指人磷脂酶14基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化人磷脂酶14。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。人磷脂酶14多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种多肽——人磷脂酶14，其基本上是由<210>2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括人磷脂酶14的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的人磷脂酶14相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(I)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(II)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(III)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(IV)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)通过本文的阐述，这样的片段、衍生物和类似物被认为在本领域技术人员的知识范围之内。本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有<210>2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。本专利技术的多核苷酸序列包括<210>1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。它包含的多核苷酸序列全长为1485个碱基，其开放读框(271-666)编码了131个氨基酸。根据氨基酸序列同源比较发现，此多肽与人磷脂酶蛋白有86％的同源性，可推断出该人磷脂酶14具有人磷脂酶蛋白相似的结构和功能。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与<210>1所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本专利技术所用，“简并的变异体”本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人磷脂酶１４，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]