反转录扩增RNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种核糖核酸的体外反转录和扩增的方法，更具体地涉及在同一体系中进行ＲＮＡ体外反转录和扩增的方法。本发明专利技术的缓冲液可以使反转录和扩增都能正常进行，因而在反转录和扩增之间不需添加任何试剂，避免了污染和节省了时间。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核酸体外合成方法，具体地涉及到核糖核酸的体外反转录和扩增的方法，更具体地涉及在同一体系中进行RNA体外反转录和扩增的方法。
技术介绍
丙型肝炎病毒是一种世界范围内的非肠道传染的病毒。据估计超过1％的世界人口感染有HCV。在卫生保健体系较落后的国家和地区，其比例更高，已成为严重危害人类健康的一种传染病。来自全世界的对HCV编码序列的分析结果已经揭示出在各个病毒分离物中的相当可观的序列变化形式。此外，对来自各个患者的HCV序列分析结果已经证实这些病毒已所谓的“亚种”的形式传播，他们含有相关但不相同的序列。HCV遗传变异性的程度对预防、诊断和治疗具有重要意义。目前我国普遍使用的免疫学方法受制于其间接检测原理的局限，不能解决HBV预防诊断治疗中的许多问题，HCV RNA检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法的间接检测的局限性，通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况从而对于HCV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义。HCV核酸检测一般应用AMV酶或MMLV酶合成cDNA第一链。第二链合成和后面的PCR扩增用Taq DNA聚合酶，反应在不同体系本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于反转录和扩增的缓冲液，其特征在于，它含有以下组分：　　　　（ａ）０．００５－０．０５Ｕ／微升的反转录酶；　　　　（ｂ）０．００１－０．１Ｕ／微升的高温ＤＮＡ聚合酶；　　　　（ｃ）１－１０ｍＭ的镁离子；　　　　（ｄ）ｄＮＴＰｓ，各０．２±０．１ｍｍｏｌ／Ｌ；　　　　且所述缓冲液不含锰离子。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏懿，周煜，徐晓青，
申请(专利权)人：上海复星医学科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]