一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法技术

一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：诱导基质准备、不同种源黑果枸杞茎段活性诱导、灭菌处理、不定芽增殖、根系诱导、移栽。本发明专利技术的有益之处在于：本发明专利技术中的一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，所用不定芽诱导基质和根系诱导基质配方合理，采用的震荡处理激活枝条本身所含的内源激素，结合明暗交替以及基质外源植物激素的应用使不同种源黑果枸杞不定芽增殖倍数达20～30；生根率以及移栽后成活率均可达到100％，且瓶苗移栽后对生长的气候、土壤、水分等条件没有特殊要求，采用常规方法管理即可；50d左右即可实现不同种源黑果枸杞优质种苗快速繁殖及一次性成苗。

An induction method suitable for one time seedling formation of different provenances of Chinese wolfberry

A method for inducing seedling germination of Lycium ruthenium, which is suitable for different provenances, is characterized by the following steps: inducing matrix preparation, inducing activity of different provenances, Lycium barbarum stem segments, sterilizing, adventitious bud multiplication, root induction and transplanting. The invention has the advantages that: the invention of a suitable for different provenances of Lycium ruthenicum seedlings into disposable induction method, the induction of adventitious bud and root induction of matrix matrix formula is reasonable, the shock activation of endogenous hormone branches contained, with bright and dark alternation and application of matrix of exogenous hormones the different provenances of Lycium ruthenicum adventitious bud proliferation rate can reach 20~30; 100% rooting rate and survival after transplanting, and the bottle after transplanting on the growth of the climate, soil and water conditions and no special requirements, using the conventional method of management can; about 50D can realize different provenances of Lycium ruthenicum rapid propagation high quality seedling and disposable seedling.

【技术实现步骤摘要】
一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法
本专利技术属于一次性成苗的诱导方法
，具体涉及一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法。
技术介绍
黑果枸杞(Lyciumruthencium)属于典型的荒漠植物，对环境条件适应能力极强，具有抗旱、耐寒、耐贫瘠、耐盐碱的特点。近年来，因其果实可入药具有增强免疫力、延缓衰老、预防癌症、改善睡眠等功效而被广泛推广种植，但普遍存在成活率低、繁殖速度慢等问题。目前对国内外对黑果枸杞的研究主要集中在色素提取、药理研究、耐盐生理机制及育苗技术等方面，而关于综合研究各个种源黑果枸杞一次性成苗的研究未见报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种基质配方合理、操作简单、管理成本低、繁殖速度快并且能同时适合不同种源黑果枸杞一次性成苗、快速诱导再生植株、建立无性系的方法，主要解决不同种源黑果枸杞引种驯化过程中成活率低的问题，为不同种源黑果枸杞系统地进行工厂化生产、规模化快速繁殖提供技术保障，同时也为不同种源黑果枸杞抗逆突变体筛选、种质资源保护以及遗传多样性研究奠定良好的基础。一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导基质准备大量元素溶液配置，按硝酸钾3000.00mg/L、氯化钙150.00mg/L、硫酸镁500.00mg/L、磷酸二氢钾150.00mg/L、硫酸铵134.00mg/L、硫酸锰10.00mg/L的配比配置1000mL大量元素溶液；微量元素溶液配置，按硼酸3.0mg/L、硫酸锌2.0mg/L、碘化钾0.75mg/L、硫酸铜0.025mg/L、钼酸钠0.25mg/L的配比配置500mL微量元素溶液；铁盐溶液配置，按Fe2·EDTA10.00mg/L的配比配置500mL铁盐溶液；有机成分溶液配置，按肌醇100.0mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L的比例配置500mL有机成分溶液；不定芽诱导基质制作，加入所述大量元素溶液50mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各5mL，加入6-苄基氨基嘌呤(6-BA)0.5mg、萘乙酸(NAA)0.2mg，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖15g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶约60～70mL，高温高压灭菌后待用；根系诱导基质制作，加入所述大量元素溶液25mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各2.5mL，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖7.5g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶约60～70mL，高温高压灭菌后待用；(2)不同种源黑果枸杞茎段活性诱导于当年春季，植物内源激素活性最强时，分别剪取不同种源黑果枸杞健康母株上当年生、没有病虫害及牲畜啃食现象的健康枝条，迅速将下切口剪成马蹄形，之后蘸取少量家用洗涤剂原液，以保证所述枝条的新鲜，然后带回实验室，用稀释浓度为50％的吐温80浸泡所述枝条1h，以彻底清洗附着在所述枝条表面的粘性物质，之后用流动的自来水浸泡冲洗4h，冲洗之后沥干所述枝条上的水分并将其放入震荡培养箱中进行震荡培养；(3)灭菌处理将经过震荡培养后的不同种源黑果枸杞枝条置于超净工作台，采用75％的乙醇浸泡，浸泡期间用已灭菌的玻璃棒不断搅动，然后用无菌水冲洗7～8次，之后将冲洗干净的枝条放在经过高温灭菌并铺有滤纸的铝盒中，用镊子夹取滤纸充分吸干枝条表面残留的水渍后待用；(4)不定芽增殖剪除经过灭菌处理枝条两端约2～3cm，并将枝条上着生的叶片从叶柄基部剪除，之后将枝条剪成长1.5～2cm并至少带有一个侧芽的茎段，放入培养皿，全部剪完后用镊子轻轻夹住茎段上端垂直插入前述不定芽诱导基质中，每瓶不定芽诱导基质中只扦插1个茎段，之后封口，在25℃条件下采用黑暗和光照交替培养的方式进行不定芽增殖；培养15d左右扦插的茎段基部有大量突起长出，之后在生长激素的作用下，这些不定芽快速生长，约30d不定芽可长至4～5cm，增殖倍数可达20～30；(5)根系诱导将步骤(4)中诱导30d生长的不定芽从基部剪切，剪成带有1～2个腋芽、长约2cm的茎段，转接茎段插入装有前述根系诱导基质的三角瓶中，置于25±2℃条件下，黑暗培养4d，之后光照培养，茎段色泽开始转绿；生长10d左右，主根周围开始生长出大量根毛，且在这一根系诱导基质中，各个种源黑果枸杞根系诱导率均为100％；继续生长约10d左右，产生8～10条粗根，毛根长满整个三角瓶瓶底，得到符合移栽标准的瓶苗；前述光照培养的条件为光照强度2000lx/d，光照时间12h/d；(6)移栽移栽前对玻璃温室或搭建的小拱棚进行土壤翻耕、平整、消毒、晾晒；之后将符合移栽标准的瓶苗连同三角瓶移至玻璃温室或搭建的小拱棚中，将瓶口开放1/3放置1d，第2d即可完全开瓶移栽；移栽前用镊子轻轻夹住瓶苗基部，夹出后放置在清水中，用清水冲洗干净瓶苗基部的根系诱导基质，以免由于根系诱导基质中所含的丰富的营养物质导致移栽后瓶苗滋生细菌而腐烂；冲洗干净后即可移栽至已消毒的土壤中，株行距20～30cm即可；移栽后采用常规管理，玻璃温室或搭建的小拱棚内温度调整为25℃左右，湿度为70％左右，不同种源黑果枸杞瓶苗移栽后成活率为100％；移栽后生长20d左右长出5～6片新叶，生长健壮，适应性强，即可进行露地定植。作为一种优选的优选的方案，步骤(2)中所述震荡培养的震荡方式为左右循环、频率20r/min，温度为28℃，震荡时间为8h。更为优选的是，步骤(4)中所述黑暗和光照交替培养的方式分为四个阶段：第一阶段，黑暗2天；第二阶段，光照强度为2000lx的条件下培养2d，每天光照12h；第三阶段，黑暗2天；第四阶段，光照强度为2000lx的条件下培养30天，每天光照14h。更为优选的是，步骤(3)中所述采用75％的乙醇浸泡的时间为15～35s，具体时间根据枝条的老嫩程度确定。更为优选的是，步骤(6)中所述的土壤翻耕、平整、消毒、晾晒条件为：移栽前3d喷洒5％的高锰酸钾溶液进行土壤消毒，喷洒后翻耕、晾晒3d即可进行移栽。本专利技术的有益之处在于：本专利技术中的一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，所用不定芽诱导基质和根系诱导基质配方合理，培养中先采用震荡处理激活枝条本身所含的内源激素；结合明暗交替以及基质外源植物激素的应用，15d左右茎段基部产生大量突起，之后在生长激素的作用下，不定芽快速生长，约30d不定芽可长至4～5cm，由于不定芽诱导基质和根系诱导基质中含有植物生长所需的大量、微量元素以及各种营养成分，不定芽增殖后期枝叶嫩绿，茎秆粗壮，不同种源黑果枸杞不定芽增殖倍数可达20～30；根系诱导过程中所有试剂均减半，且不采用任何外源生长激素，可大大节约原材料，降低生产成本，且瓶苗生根率以及移栽后成活率均可达到100％，另瓶苗移栽后对生长的气候、土壤、水分等条件没有特殊要求，采用常规方法管理即可，50d左右即可实现不同种源黑果枸杞优质种苗快速繁殖及一次性成苗；总的来说，本专利技术的方法操作方便，易于管理，而且生产成本低，有利于进行工厂化生产，为荒漠区生态环境综合治理提供大量优质种苗的同时，可为生产者本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导基质准备大量元素溶液配置，按硝酸钾3000.00mg/L、氯化钙150.00mg/L、硫酸镁500.00mg/L、磷酸二氢钾150.00mg/L、硫酸铵134.00mg/L、硫酸锰10.00mg/L的配比配置1000mL大量元素溶液；微量元素溶液配置，按硼酸3.0mg/L、硫酸锌2.0mg/L、碘化钾0.75mg/L、硫酸铜0.025mg/L、钼酸钠0.25mg/L的配比配置500mL微量元素溶液；铁盐溶液配置，按Fe2·EDTA10.00mg/L的配比配置500mL铁盐溶液；有机成分溶液配置，按肌醇100.0mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L的比例配置500mL有机成分溶液；不定芽诱导基质制作，加入所述大量元素溶液50mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各5mL，加入6‑苄基氨基嘌呤(6‑BA)0.5mg、萘乙酸(NAA)0.2mg，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖15g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶约60～70mL，高温高压灭菌后待用；根系诱导基质制作，加入所述大量元素溶液25mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各2.5mL，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖7.5g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶约60～70mL，高温高压灭菌后待用；(2)不同种源黑果枸杞茎段活性诱导于当年春季，植物内源激素活性最强时，分别剪取不同种源黑果枸杞健康母株上当年生、没有病虫害及牲畜啃食的健康枝条，迅速将下切口剪成马蹄形，之后蘸取少量家用洗涤剂原液，以保证枝条的新鲜，然后带回实验室，用稀释浓度为50％的吐温80浸泡枝条1h以彻底清洗附着在枝条表面的粘性物质，之后用流动的自来水浸泡冲洗4h，冲洗之后沥干枝条上的水分并将其放入震荡培养箱中进行震荡培养；(3)灭菌处理将经过震荡培养后的不同种源黑果枸杞枝条置于超净工作台，采用75％的乙醇浸泡，浸泡期间用已灭菌的玻璃棒不断搅动，然后用无菌水冲洗7～8次，之后将冲洗干净的枝条放在经过高温灭菌并铺有滤纸的铝盒中，用镊子夹取滤纸充分吸干枝条表面残留的水渍后待用；(4)不定芽增殖剪除经过灭菌处理的枝条两端约2～3cm，并将枝条上着生的叶片从叶柄基部剪除，之后将枝条剪成长1.5～2cm、并至少带有一个侧芽的茎段，放入培养皿，全部剪完后用镊子轻轻夹住茎段上端垂直插入所述不定芽诱导基质中，每瓶不定芽诱导基质中只扦插1个茎段，之后封口，在25℃条件下采用黑暗和光照交替培养的方式进行不定芽增殖；(5)根系诱导将步骤(4)中诱导30d的不定芽从基部剪切，剪成带有1～2个腋芽、长约2cm的茎段，并将其转接插入装有所述根系诱导基质的三角瓶中，置于25±2℃条件下，黑暗培养4d，之后光照培养20d左右，使得根系长满整个三角瓶瓶底，得到符合移栽标准的瓶苗；所述光照培养的条件为光照强度2000lx/d，光照时间12h/d；(6)移栽移栽前对玻璃温室或搭建的小拱棚进行土壤翻耕、平整、消毒、晾晒；之后将符合移栽标准的所述瓶苗连同三角瓶移至玻璃温室或搭建的小拱棚中，将瓶口开放1/3放置1d，第2d即可完全开瓶移栽；移栽前用镊子轻轻夹住瓶苗基部，夹出后放置在清水中，用清水冲洗干净瓶苗基部的根系诱导基质，冲洗干净后即可移栽至土壤中，株行距20～30cm，培养温度为25℃左右，湿度为70％左右；生长20d左右长出5～6片新叶，生长健壮，适应性强，即可进行露地定植。...

【技术特征摘要】
1.一种适用于不同种源黑果枸杞一次性成苗的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导基质准备大量元素溶液配置，按硝酸钾3000.00mg/L、氯化钙150.00mg/L、硫酸镁500.00mg/L、磷酸二氢钾150.00mg/L、硫酸铵134.00mg/L、硫酸锰10.00mg/L的配比配置1000mL大量元素溶液；微量元素溶液配置，按硼酸3.0mg/L、硫酸锌2.0mg/L、碘化钾0.75mg/L、硫酸铜0.025mg/L、钼酸钠0.25mg/L的配比配置500mL微量元素溶液；铁盐溶液配置，按Fe2·EDTA10.00mg/L的配比配置500mL铁盐溶液；有机成分溶液配置，按肌醇100.0mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L的比例配置500mL有机成分溶液；不定芽诱导基质制作，加入所述大量元素溶液50mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各5mL，加入6-苄基氨基嘌呤(6-BA)0.5mg、萘乙酸(NAA)0.2mg，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖15g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶约60～70mL，高温高压灭菌后待用；根系诱导基质制作，加入所述大量元素溶液25mL，所述微量元素溶液、铁盐溶液、有机成分溶液各2.5mL，之后加入蒸馏水定容到1000mL，混合均匀后进行蒸煮，之后加入蔗糖7.5g、琼脂5g，将pH调整为5.8；制作完成后分装三角瓶、每瓶约60～70mL，高温高压灭菌后待用；(2)不同种源黑果枸杞茎段活性诱导于当年春季，植物内源激素活性最强时，分别剪取不同种源黑果枸杞健康母株上当年生、没有病虫害及牲畜啃食的健康枝条，迅速将下切口剪成马蹄形，之后蘸取少量家用洗涤剂原液，以保证枝条的新鲜，然后带回实验室，用稀释浓度为50％的吐温80浸泡枝条1h以彻底清洗附着在枝条表面的粘性物质，之后用流动的自来水浸泡冲洗4h，冲洗之后沥干枝条上的水分并将其放入震荡培养箱中进行震荡培养；(3)灭菌处理将经过震荡培养后的不同种源黑果枸杞枝条置于超净工作台，采用75％的乙醇浸泡，浸泡期间用已灭菌的玻璃棒不断搅动，然后用无菌水冲洗7～8次，之后将冲洗干净的枝条放在经过高温灭菌并铺有滤纸的铝盒中，用镊子夹取滤纸充分吸干枝条表面残留的...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴成武，王方琳，李爱德，尉秋实，王祺，王昱淇，张元凯，刘克彪，
申请(专利权)人：甘肃省治沙研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62