含有死的益生菌共生发酵培养物的营养组合物制造技术

本发明专利技术总地涉及用于恢复和维持胃肠道健康及相关生理功能的，含有灭活的或死亡的益生菌及其代谢产物的营养组合物、其生产方法及其在改善肠道菌群平衡和刺激特异性或非特异性免疫功能中的应用。本发明专利技术特别涉及在同一培养基中和同样发酵条件下，以分级接种、共生发酵方法培养和增殖多种益生菌的方法，以及所说的益生菌混合培养物在制备用于恢复和维持胃肠道正常菌群平衡、改善机体特异性或非特异性免疫功能及抗肿瘤活性的营养组合物中应用。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术总地涉及用于恢复和维持胃肠道健康及相关生理功能的，含有灭活的或死亡的益生菌及其代谢产物的营养组合物、其生产方法及其在改善肠道菌群平衡和刺激特异性或非特异性免疫功能中的应用。本专利技术特别涉及在同一培养基中和同样发酵条件下，以分级接种、共生发酵方法培养和增殖多种益生菌的方法，以及所说的益生菌混合培养物在制备用于恢复和维持胃肠道正常菌群平衡、改善机体特异性或非特异性免疫功能及抗肿瘤活性的营养组合物中应用。一切干扰宿主的因素，不论是物理的、化学的，还是生物的都会引起微生态的平衡失调。对于健康的人体，常常可能因为手术(特别是腹部手术)、外伤、精神压力、肿瘤、胆盐刺激及滥用抗生素等机体内环境或外环境的变化导致肠道内微生物菌群紊乱，即有益和有害肠道微生态间的平衡失调。其中，导致肠道正常微生物菌群失调的最重要的因素是长期滥用抗生素。一旦正常菌群的发酵过程受到破坏，即可导致许多有益细菌的减少，进而使结肠粘膜衰竭。同时，因潜在的恶性细菌的迅速生长而严重损害结肠粘膜功能。有害细菌穿透功能失常的结肠壁并感染器官，引起器官的脓肿或使多数器官功能减弱甚至丧失。以前，人们常常使用各种抗生素预防或治疗肠道菌群失调，特别是腹部手术后肠道正常群菌群失调所致的继发感染。然而，长时间大量使用抗生素不仅花费很高，而且难于纠正正常肠道菌群失调，特别是往往因致病菌的过度生长而导致病情进一步恶化。为了调整正常肠道微生态平衡，一种普遍接受的方法是筛选并利用人们已知的、在正常胃肠道内占优势并可在小肠粘膜上定植的非致病无毒性细菌，添加或不添加膳食纤维、寡聚糖或免疫球菌蛋白、含硫氨基酸等辅助成份，制成药物组合物或营养补充剂，投用于需要进行正常肠道微生态失调治疗的病人。大量的实验室研究和临床观察证明，微生态平衡疗法可对于改善和维持胃肠道菌群平衡、改善机体特异性或非特异性免疫及降低血胆固醇发挥不可替代的作用。已有许多现有技术文献描述了益生菌的治疗作用及其应用。例如，Fernandes详细评述了以食品或发酵乳制品方式引入体内的乳杆菌，特别是嗜酸性乳杆菌的益生作用(Fernandeset al.，“Therapeutic role of dietary lactobacilli and lactobacillic fermented diary products”，FEMSMicrobiology Reviews 46343-356，1987)。Nobuo Saegara的研究证明，口服粪链球菌可显著地改善人和动物的脂质代谢(Microecology and therapy，vol.15，271-280，1985)。欧洲专利EP0199535描述了从粪便中分离的，体外试验证明能够在肠粘膜上粘附的酸性乳杆菌的纯培养物。国际专利WO89/05849描述了从猪胃肠道中分离的，可在猪胃肠道上皮细胞上粘附，并对强酸和胆汁有耐受性的乳酸菌。可使用所说的细菌制造发酵乳品，并用以预防或治疗小猪的大肠杆菌性腹泻。另一方面，美国专利4,805,368公开了一种以膳食纤维为基础的含有嗜酸性乳杆菌和/或两歧双歧杆菌、乳脂明串珠菌(Leuconostoc citrovorum)及谢氏丙酸杆菌(Propionibacterium shermanii)的益生菌组合物及其制备方法。美国专利4,913,913描述了混合或分别培养奶酪乳杆菌(L.casei)和长双歧杆菌(B.longum)，以制备含双歧杆菌的乳酸菌发酵乳品的方法。美国专利5,716,615公开了包括嗜热链球菌、乳杆菌和双歧杆菌的，用于治疗胃肠道疾病和高胆固醇血症的药物组合物。美国专利5,744,134还描述了含有免疫球蛋白和可溶性膳食纤维、多价铁螯合分子和葡糖酸，以及一种或多种肠道益生菌的，用于促进胃肠道健康的组合物。最后，本专利技术人于1993年提交并已授权的中国专利93101172.0公开了一种含有热杀死的嗜酸性乳酸菌(Lactobacillus acidoilus)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)的营养补充剂(即所谓“三株口服液”)。与其他现有技术不同，虽然该悬液态营养补充剂不含活的益生菌，但据信所说的悬液中含有多种有益的细菌酶及其他细菌代谢产物，并且由于其生产过程中使用了富含可溶性纤维和大豆异黄酮的培养基成分，所以不仅有利用细菌的存活和生长，而且也为所说的营养混合物提供了这些及其他有益成分。然而，无论是生产含活的还是死的多种益生菌的组合物，并且无论只含一种或多种细菌还是另外含有其他辅助成分的组合物，上述现有技术均没有描述在同一培养基中和同一发酵条件下，以分级培养和共生发酵技术培养并增殖两种以上肠道益生菌的方法。因此，本专利技术的一个目的是提供一种含有灭活的或热杀死的一种或多种益生菌，并含有可溶性膳食纤维及大豆异黄酮的悬液态营养组合物。根据本专利技术这一目的的一个优选实施方案，其中所说的益生菌选自双歧杆菌属、乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、丙酸菌属、明串珠菌属及芽孢杆菌属的一种或多种人肠道非致病菌。根据本专利技术这一目的的一个优选实施方案，其中所说的益生菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸性乳杆菌、保加利亚乳杆菌、奶酪乳杆菌、德氏乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌、屎肠球球菌、嗜柠檬酸明串珠菌、枯草孢杆菌和地衣形孢杆菌。根据本专利技术这一目的的一个优选实施方案，其中所说的可溶性纤维含量约为每毫升含20-40μg，并且其中所说的大豆异黄酮含量为每毫升30-100μg。本专利技术的另一个目的是提供生产上文限定的悬液态营养组合物的方法，该方法包括(1)提供基本上由大豆或大豆芽蒸煮液、蛋白酶解牛肉肉汤、酵母浸膏、糖和矿物质组成的液体培养基；(2)按照湿菌体生物量约占培养基总重量0.5-1.0％的比例，依次向培养基内接种一种或多种细菌，并在每接入一种细菌后，于38-41℃的温度和pH6.6条件下，厌氧培养4-10小时；(3)当发酵培养物中菌体总浓度约达到7×108/ml以上时，使温度降至约32℃并维持2-4小时，以完成生物代谢转化；(4)当发酵培养物的pH降至大约3.5--3.9时，使温度升高至48-50℃并保持4-6小时，以完成菌体热灭活和发酵体系稳定化。根据本专利技术这一目的的一个优选实施方案，其中所说的液体培养基是由约25％大豆芽煎煮液、约2.5％胰蛋白酶水解牛肉肉汤、约1.3％酵母浸膏、约1.3％葡萄糖、约1.3％蔗糖和适当量包括Mg++、Ca++、K+、Na+的矿物质组成的。根据本专利技术这一目的的一个优选实施方案，其中所说的大豆或大豆芽蒸煮液是发芽大豆在水中按30％(W/V)比例混合并于105-121℃下蒸煮30分钟，然后经常规过滤得到的滤液。本专利技术的再一个目的是提供上述营养组合物在纠正和维持肠道正常微生态平衡中的应用。本专利技术的再一个目的是提供上述营养组合物在调整机体非特异性免疫反应中的应用。本专利技术的再一个目的是提供上述营养组合物在生物转化或修饰一种或多种天然药物的有效成分并使之发挥或改善其生物学活性中的应用。附附图说明图1显示单独发酵培养短双歧杆菌、屎肠球菌和嗜酸性乳杆菌时，三种细菌各自的生物量随时间变化的增殖曲线。附本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有灭活的或热杀死的一种以上肠道益生菌，并含有可溶性膳食纤维及大豆异黄酮的悬液态营养组合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴炳新，董立山，孙筱林，王红，
申请(专利权)人：济南三株药业有限公司，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]