一种融合标签蛋白制造技术
A fusion tag protein
The invention relates to a method for preparing protein fusion tags, including GDNF gene plasmid pGEX 2T+gdnf GDNF synthesis, construction and expression of GDNF+GST fusion protein and GDNF+GST fusion tag tag protein purification four steps. The method of the invention won the GST recombinant protein GDNF freeze-dried powder, high purity, and retain good antigenicity, and can be applied to the GDNF in the research field of glioma.
【技术实现步骤摘要】
一种融合标签蛋白
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种新型的融合标签蛋白，以及基于该融合标签的新型融合蛋白表达系统。
技术介绍
胶质源性神经营养因子(GDNF)是TGF-beta超家族的一员，在体内外都显示出潜在的神经营养作用：Lin,LF等人在1993年利用寡聚核苷酸探针从大鼠神经胶质瘤细胞系B49细胞中发现及对人的基因文库的筛选中，分离克隆出一种神经营养因子，命名为胶质源性神经营养因子(GDNF)。胚胎期，GDNF促进神经系统的发育，成年时，GDNF可以修复神经炎症、损伤、退行性变。近年来GDNF在肿瘤—尤其是胶质瘤的发生发展的进程中开始受到关注，发现在胶质瘤中GDNF高表达，且这种高表达又能够促进胶质瘤的增殖，但其中的机制仍需进一步研究。市面上虽有人GDNF重组蛋白成熟产品，但价格昂贵，且目前多用于效应研究，蛋白-蛋白、蛋白-DNA相互作用研究则需要制备一种蛋白标签融合蛋白。由此可见，能否制备出这种GDNF重组蛋白，并保证得到的重组蛋白有较好的抗原性，以使它可用于探索GDNF与胶质瘤发生发展的关系，成为本领域研究人员亟待解决的技术问题。
技术实现思路
...
【技术保护点】
一种融合标签蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)GDNF的基因gdnf合成：根据GDNF的氨基酸序列合成基因gdnf，在基因gdnf前面增加BamHI酶切位点，在基因gdnf后面增加SmaI酶切位点，然后直接克隆在质粒PUC19上，得到带有gdnf基因的质粒pUC19+gdnf；(2)质粒pGEX‑2T+gdnf构建：将带有gdnf基因的质粒pUC19+gdnf以及质粒pGEX‑2T进行相同酶切操作，再将酶切产物进行2％琼脂糖凝胶电泳，切割收集含有目的条带的胶，使用琼脂糖胶回收试剂盒回收目的基因gdnf和质粒pGEX‑2T，回收得到的gdnf基因和质粒pGEX‑2...
【技术特征摘要】
1.一种融合标签蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)GDNF的基因gdnf合成：根据GDNF的氨基酸序列合成基因gdnf，在基因gdnf前面增加BamHI酶切位点，在基因gdnf后面增加SmaI酶切位点，然后直接克隆在质粒PUC19上，得到带有gdnf基因的质粒pUC19+gdnf；(2)质粒pGEX-2T+gdnf构建：将带有gdnf基因的质粒pUC19+gdnf以及质粒pGEX-2T进行相同酶切操作，再将酶切产物进行2％琼脂糖凝胶电泳，切割收集含有目的条带的胶，使用琼脂糖胶回收试剂盒回收目的基因gdnf和质粒pGEX-2T，回收得到的gdnf基因和质粒pGEX-2T使用T4连接酶4℃连接过夜，转化E.coliDH5α，挑选转化子，使用质粒提取试剂盒提取质粒，然后使用限制性内切酶BamHI和EcoRI双酶切，2％琼脂糖凝胶电泳验证，验证正确的质粒即为pGEX-2T+gdnf；(3)GDNF+GST融合标签蛋白表达：将质粒pGEX-2T+gdnf转化E.coliTransetta，挑取转化子诱导，收集的菌体进行超声破碎，然后进行SDS-PAGE验证；(4)GDNF+GST融合标签蛋白纯化：...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙申，高殿帅，雷宇，李奇，王月，吴越，高玥，姬广全，高锦，李俐，唐传喜，张琳，刘鑫峰，高成，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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