旗肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱制备及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种高效、特异富集旗肽标签蛋白D-tag标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱及其制备方法和用途，本发明专利技术所提供的免疫亲和纯化富集柱包含偶联有免疫亲和纯化的D-tag特异性多克隆抗体的活化琼脂糖填料和装载该免疫亲和填料的塑料柱。所述的免疫亲和填料偶联的D-tag特异性多克隆抗体是用免疫亲和法提取得到的，所述的免疫亲和纯化富集柱是将免疫亲和填料装载入特制的塑料柱得到的，该免疫亲和纯化富集柱富集D-tag标签重组蛋白效率高、特异性强，洗脱条件温和，可重复利用，是目前分离提纯、富集D-tag标签重组蛋白理想的材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物分离、纯化富集装置，尤其是一种高效分离纯化、富集旗肽D-tag标签重组蛋白的免疫亲和纯化富集柱的制备方法及其应用。
技术介绍
分子生物学及蛋白质组学是生命科学研究领域的热门学科，重组蛋白质的使用在近年来大大增加。为方便基因重组蛋白的标记、追踪、鉴定和纯化，在目标蛋白表达中会人为引进一段标签多肽形成重组蛋白。因此分离纯化、富集重组蛋白的技术越来越显示其重要性。从成份复杂的表达体系中分离纯化、富集目标蛋白是一项艰巨而繁重的任务，而亲和层析法是目前最广泛的分离纯化、富集重组蛋白的方法。由于目前用于分离纯化、富集D-tag重组蛋白的亲和层析柱主要有金属螯合亲和柱以及利用酶的底物、反应性燃料为配基的亲和柱，这些亲和柱存在非特异性吸附、洗脱条件剧烈、提纯效果不佳等显著缺点，而且金属螯合亲和柱还存在金属离子脱落到洗脱液中的缺陷，这些都将限制分离提纯出来的目标蛋白后续的应用、检测。D-tag作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。因此现D-tag标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种旗肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于：1）将免疫亲和纯化的旗肽D?tag特异性多克隆抗体采用流式过柱的化学偶联反应偶联到过碘酸钠氧化的琼脂糖Agarose上，用硼氢化钠还原，用蒸馏水清洗未结合的抗体，用磷酸缓冲液PBS清洗填料，10倍填料体积/次，洗4次，滴干PBS后加入等体积甘油，混匀，得到D?tag标签重组蛋白免疫亲和填料；2）将D?tag标签重组蛋白免疫亲和填料装入塑料柱中，按需要的体积装柱，即得所述的D?tag标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱。

【技术特征摘要】
1.一种旗肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于: 1)将免疫亲和纯化的旗肽D-tag特异性多克隆抗体采用流式过柱的化学偶联反应偶联到过碘酸钠氧化的琼脂糖Agarose上，用硼氢化钠还原，用蒸馏水清洗未结合的抗体，用磷酸缓冲液PBS清洗填料，10倍填料体积/次，洗4次，滴干PBS后加入等体积甘油，混匀，得到D-tag标签重组蛋白免疫亲和填料； 2)将D-tag标签重组蛋白免疫亲和填料装入塑料柱中，按需要的体积装柱，即得所述的D-tag标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱。2.根据权利要求1所述的旗肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于:所述方法制备的D-tag标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱，包含偶联有免疫亲和纯化的D-tag特异性多克隆抗体的琼脂糖填料及装载该免疫亲和填料的塑料柱。3.根据权利要求1所述的旗肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于:所述的免疫亲和纯化的D-tag特异性多克隆抗体，是用D-tag短肽偶联活化的载体蛋白制得免疫原免疫动物，得到含抗体血清,将含抗体血清上到偶联有D-tag短肽的免疫亲和层析柱，清洗未结合的杂质，用弱酸洗脱下D-tag特异性多克隆抗体，脱盐、冻干备用。4.根据权利要求3所述的旗肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于:所述的D-tag肽是由8个氨基酸即天冬氨酰-酪氨酰-赖氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁欢欢，张芬，潘丽金，谢体三，萧浩，
申请(专利权)人：南宁市蓝光生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：