微型高效沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱制备及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种微型高效沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱制备及应用，本发明专利技术所提供的免疫亲和纯化富集柱包括偶联有沙丁胺醇特异性抗体的活化琼脂糖填料和装载该亲和填料的塑料柱。所述的亲和填料偶联的沙丁胺醇特异性抗体是用免疫亲和法提取得到的，所述的免疫亲和纯化富集柱是将免疫亲和填料装载入特制的塑料柱得到的。该免疫亲和纯化富集柱装载填料体积小、富集沙丁胺醇能力强，与色谱法、胶体金试纸条联合使用，可高效、准确检测沙丁胺醇的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物分离、纯化富集装置，尤其是一种微型高效沙丁胺醇免疫亲和层析柱的制备方法及其应用。
技术介绍
沙丁胺醇(Sal)属于兴奋剂，可以提高瘦肉率、促进动物生长。因其经济效益明显，利益驱使养殖户或养殖企业大量使用，导致畜产品中沙丁胺醇大量残留，人食用这类畜产品后，可引发肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心等中毒症状，特别是对血压、心脏病患者危害更大，长期使用可能导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤。沙丁胺醇在许多国家，特别是欧盟和中国，被禁止用做家畜促生长剂。所以，对动物来源的食品中沙丁胺醇残留进行严格地检测是非常重要。由于生物样本成分复杂，待测物浓度低，大多数取样量少，而我国明确规定禁止沙丁胺醇及其衍生物在动物的饲养过程中使用。这就对分析方法的灵敏度、准确度有更高的要求。采用免疫亲和色谱柱提取样品中沙丁胺醇，再与高效液相色谱法(HPLC-UV)、气-质联机法(GC-UV)、胶体金快速试纸条检测法确证是必然的趋势。但是，现有的提取沙丁胺醇免疫亲和色谱柱的技术与工艺存在活化后填料不稳定、非亲和法提纯的抗体特异性差、抗体和填料偶联不稳定，造成偶联在填料上的抗体脱落、装柱体积偏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微型高效沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于：????1）将经免疫亲和纯化的沙丁胺醇特异性多克隆抗体和过碘酸活化的琼脂糖混匀，在摇床上室温反应30?分钟，然后在4℃冰箱静置30分钟后加入硼氢化钠还原，用蒸馏水清洗未结合的抗体，用磷酸缓冲液清洗填料，10倍填料体积/次，洗4次，滴干磷酸缓冲液后加入等体积甘油，混匀，得到沙丁胺醇免疫亲和填料；2）在特制的塑料柱内下端装上过滤膜，将沙丁胺醇免疫亲和填料装入柱中，25μL/柱，填料上层盖上过滤膜，即得所述的沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱。

【技术特征摘要】
1.一种微型高效沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于: 1)将经免疫亲和纯化的沙丁胺醇特异性多克隆抗体和过碘酸活化的琼脂糖混匀，在摇床上室温反应30分钟，然后在4°C冰箱静置30分钟后加入硼氢化钠还原，用蒸馏水清洗未结合的抗体，用磷酸缓冲液清洗填料，10倍填料体积/次，洗4次，滴干磷酸缓冲液后加入等体积甘油，混匀，得到沙丁胺醇免疫亲和填料； 2)在特制的塑料柱内下端装上过滤膜，将沙丁胺醇免疫亲和填料装入柱中，25μ L/柱，填料上层盖上过滤膜，即得所述的沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱。2.根据权利要求1所述的方法制备的沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱，包括偶联有免疫亲和纯化的沙丁胺醇特异性多克隆抗体的琼脂糖填料及装载该填料的特制塑料柱。3.根据权利要求1或2所述的沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于:所述的免疫亲和纯化的沙丁胺醇特异性多克隆抗体是用沙丁胺醇与溴乙酰氯反应得到衍生物沙丁胺醇溴乙酰酯溶液，用反向高效液相色谱HPLC纯化该溶液得到纯化后的沙丁胺醇溴乙酰酯，将纯化后的沙丁胺醇溴乙酰酯与载体蛋白偶联，得到的偶联物作为免疫原免疫动物，得到抗血清，同时用该纯化后的沙丁胺醇溴乙酰酯与经活化的琼脂糖反应制备纯化抗体用的免疫亲和柱，用该亲和柱一步提取抗血清得到沙丁胺醇特异性多克隆抗体。4.根据权利要求3所述的沙丁胺醇免疫亲和纯化富集柱的制备，其特征在于:所述的沙丁胺醇溴乙酰酯是将沙丁胺醇标准品在三乙胺催化下与溴乙酰氯反应得到衍生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘丽金，宁欢欢，刘晓松，谢体三，吕春秋，张兰，叶开福，萧浩，
申请(专利权)人：南宁市蓝光生物技术有限公司，广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广西壮族自治区分析测试研究中心，
类型：发明
国别省市：