一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种健骨注射液HPLC指纹图谱构建及其质量检测方法。该方法以夏佛塔苷、维采宁‑2和维采宁‑3为对照品，在色谱条件为：乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B；洗脱时间0‑70min，对应流动相A变化为：10‑20％A，流动相B为90‑80％；柱温30℃；检测波长340nm的情况下，进行高效液相色谱分析，构建指纹图谱。再通过十批次以上的健骨注射液样品构建共有模式指纹图谱，并与待测样品对比，检测健骨注射液的质量。本发明专利技术方法能对健骨注射成品或半成品的质量进行监控；为健骨注射液的标准化研究提供了科学依据。该方法的重复性、精密性和专属性强。

A method for the construction of HPLC fingerprint of Jian Gu injection

The invention discloses a method for the construction of HPLC fingerprint of Jian Gu injection and its quality detection method. The pagoda in summer 2 and Vizenin glycosides, Weicai Ning 3 as the standard, the chromatographic conditions are as follows: acetonitrile as mobile phase A, 0.3% acetic acid solution as mobile phase B; elution time 0 70min, corresponding to A of the mobile phase change: 10 20%A, the mobile phase B was 90 80%; the column temperature was 30 degrees; the detection wavelength of 340nm cases were analyzed by HPLC fingerprints. The common model fingerprint was constructed by ten batches of Jian Gu injection samples, and the quality of Jian Gu injection was tested and compared with the samples to be measured. The method can monitor the quality of the finished product or semi-finished product, and provide a scientific basis for the standardization of Jian Gu injection. The method has strong repeatability, precision and specificity.

【技术实现步骤摘要】
一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法
本专利技术涉及健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法。
技术介绍
马鞭草科植物黄毛豆腐柴(Premnafulvacraib)系广西壮族民间药，其商品药材名为“战骨”。健骨注射液收录于1997年版《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》，由战骨制成。中药理论认为，战骨强筋健骨。其制成的注射液具有活血散瘀，强筋健骨，驱风止痛的功效，用于脊椎骨质增生症，证见关节疼痛僵硬，或关节红肿，肢体无力，或局部发麻等。但目前还没有建立标准健骨注射液的指纹图谱质量检测方法。
技术实现思路
本专利技术提供一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法，并进一步公开了健骨注射液标准HPLC指纹图谱的构建方法及其质量检测方法。一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：1、供试品溶液的制备：取本品，加20％乙腈，制成按体积比计浓度为10％的供试品溶液；2、对照品溶液的制备：分别取夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3对照品适量，加20％乙腈制成每1ml含100-200μg夏佛塔苷、150-250μg维采宁-2、50-100μg维采宁-3的混合对照品溶液；3、高效液相色谱法分析，记录指纹图谱，即得：色谱条件为进样量10μl；色谱柱为WelchUltimateXB-C18；以乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B；梯度洗脱，洗脱时间0-70min，对应流动相A变化为：10-20％A，流动相B为90-80％；柱温30℃；检测波长340nm。对照品夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3的浓度依次优选150μg/ml，230μg/ml，70μg/ml。健骨注射液HPLC标准指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：1、共有模式图谱的生成：按权利要求1所述的方法，得十批次以上的健骨注射液样品HPLC指纹图谱，将图谱导入指纹图谱分析软件，生成共有模式指纹图谱；2、共有峰的确认：对共有模式指纹图谱主要峰进行确认，确定共有特征峰7个，依次为1号峰为维采宁-2、3号峰为夏佛塔苷、4号峰为维采宁-3，2号峰、5号峰、6号峰、7号为芹菜素糖苷类化合物；确认共有峰的共有模式指纹图谱及为所述的标准指纹图谱。所述的共有峰的确认方法具体为：UFLC-TRIPLETOF-DAD-MS/MS技术手段对主要峰进行色谱峰归属及峰纯度检测及确认；质谱工作参数为：ionsprayvoltage1500V；ionsourcegas150psi；ionsourcegas260psi；temperature550℃；curtaingas15psi；collisiongaspressure8psi；entrancepotential10V；采用ESI电喷雾离子源，负离子模式进行检测。健骨注射液的质量检测方法，则包括以下步骤：1、按如上健骨注射液HPLC指纹图谱构建方法，建立健骨注射液待测样品指纹图谱；2、对比检测，将所得待测样品指纹图谱与标准指纹图谱对比，待检样品指纹图谱中，呈现7个对应特征峰；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，待检样品指纹图谱与标准指纹图谱的相似度不得低于0.90。本专利技术方法能对健骨注射成品或半成品的质量进行监控；为健骨注射液的标准化研究提供了科学依据。该方法的重复性、精密性和专属性强。附图说明图1是本专利技术实施例健骨注射液标准指纹图谱。图2是对照品与健骨注射液标准指纹图谱对应的色谱图。图3是健骨注射液、战骨药材、阴性对照色谱图。图4是本专利技术实施例不同批次的健骨注射液的检测结果图。图5是健骨注射液、中间体、战骨药材相关性结果图。具体实施方式以下通过具体的实施例进一步说明本专利技术的技术方案。实施例1健骨注射液高效液相指纹图谱的确定1仪器与试药1.1仪器：美国Dionex公司Ultimate3000DGLC高效液相色谱仪(DGP-3600SD双三元泵、SRD-3600脱气机、WPS-3000SL自动进样器、TCC-3000RS柱温箱、DAD-3000检测器、Chromeleon7.2数据处理软件)；日本日立公司HITACHIChromaster5430高效液相色谱仪(CM5110四元泵、CMORG脱气机、CM5310柱温箱、CM5210进样器、CM5430DAD检测器)；色谱柱：WelchUltimateXB-C18(4.6×250mm，5μm)。1.2试药：10批成品，均由广西南宁百会药业集团有限公司提供。实验中液相色谱所用试剂乙腈为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯，水为超纯水。对照品：夏佛塔苷(来源：中国食品药品检定研究院，批号：111912-201302)维采宁-2(来源：Sigma，批号：0398-05-85)；维采宁-3(来源：上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号：4953)；2.方法与结果2.1健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法2.1.1溶液的制备：供试品溶液的制备：取装量差异项下本品1ml，置10ml容量瓶中，加20％乙腈定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品溶液的制备：分别取夏佛塔苷对照品、维采宁-2对照品、维采宁-3对照品适量，加20％乙腈制成每1ml含150μg、230μg、70μg的混合对照品溶液。药材供试品溶液的制备：取战骨饮片粉末(过三号筛)约1g，精密加入80％甲醇或40％乙腈25ml，称重，静置30分钟，再超声处理1小时，放冷，用80％甲醇或40％乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.1.2高效液相色谱分析：精密吸取供试品溶液10μl，进样；色谱条件：色谱柱为WelchUltimateXB-C18(4.6×250mm，5μm)；流动相为以乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B，采用以下梯度洗脱方式，见表1：表1检测波长340nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；得到健骨注射液高效液相色谱标准指纹图谱。2.1.3共有峰确定：将上述得到的10批健骨注射液的高效液相色谱指纹图谱经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)进行比较，确定7个共有特征峰并获得共有模式，即标准指纹图谱如图1所示。所得的色谱图检出均归属于战骨。利用UFLC-TRIPLETOF-DAD-MS/MS技术手段对主要峰进行色谱峰归属及峰纯度检测，通过紫外光谱比较，结合质谱的分子离子峰、裂解碎片信息鉴定：1号峰为维采宁-2、3号峰为夏佛塔苷、4号峰为维采宁-3，2号峰、5号峰、6号峰、7号为芹菜素糖苷类化合物(芹菜素碳苷类)。以上色谱峰构成了健骨注射液的指纹特征，以3号峰夏佛塔苷为参照物峰，共有峰的相对保留值如表2所示。表22.1.4精密度试验：取同一健骨注射液供试品溶液，连续进样6次，检测指纹图谱，经评价，相似度均大于0.99，结果表明仪器的精密度良好。相似度结果如表3：表3精密度1精密度2精密度3精密度4精密度5精密度6对照指纹图谱精密度11.0001.0001.0001.0001.0001.0001.000精密度21.0001.0001.0001.0001.0001.0001.000精密度31.0001.0001.0001.0001.0001.0001.000精密度41.0001.0001.0001.0001.0001.0001.000精密度51.0001.0001.0001.0001.00本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取本品，加20％乙腈，制成按体积比计浓度为10％的供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：分别取夏佛塔苷、维采宁‑2和维采宁‑3对照品适量，加20％乙腈制成每1ml含100～200μg夏佛塔苷、150～250μg维采宁‑2、50～100μg维采宁‑3的混合对照品溶液；(3)高效液相色谱法分析，记录指纹图谱，即得：色谱条件为进样量10μl；色谱柱为WelchUltimate XB‑C18；以乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B；梯度洗脱，洗脱时间0～70min，对应流动相A变化为：10～20％A，流动相B为90～80％；柱温30℃；检测波长340nm。

【技术特征摘要】
1.一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取本品，加20％乙腈，制成按体积比计浓度为10％的供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：分别取夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3对照品适量，加20％乙腈制成每1ml含100～200μg夏佛塔苷、150～250μg维采宁-2、50～100μg维采宁-3的混合对照品溶液；(3)高效液相色谱法分析，记录指纹图谱，即得：色谱条件为进样量10μl；色谱柱为WelchUltimateXB-C18；以乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B；梯度洗脱，洗脱时间0～70min，对应流动相A变化为：10～20％A，流动相B为90～80％；柱温30℃；检测波长340nm。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤(2)对照品夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3的浓度分别是150μg/ml，230μg/ml，70μg/ml。3.一种健骨注射液HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)共有模式图谱的生成：按权利要求1所述的方法，得十批次以上的健骨注射液样品HPLC指纹图谱，将图谱导入指纹图谱分析软件，生成共有模式指纹图谱；(2)共有峰的确认：对共有模式指纹图谱主要峰进行确认，确定共有特征峰7个，依次为...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏薇薇，王静宇，彭文烈，幸林广，梁玉婷，林桥辉，彭维，李华，吴忠，
申请(专利权)人：广西南宁百会药业集团有限公司，中山大学，
类型：发明
国别省市：广西,45