B细胞增殖剂用于产生抗体的用途制造技术

一种有效地产生抗体的方法是用靶标抗原和Ｂ细胞增殖剂如抗ＣＤ４０激动剂来免疫动物。这个方法产生的抗体可在多种疾病和病症中用作治疗药物、诊断药物或研究试剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】B细胞增殖剂用于产生抗体的用途 专利
本专利技术涉及抗体的产生。更具体的说，本专利技术涉及产生和增强抗 体应答的方法，和从这种方法产生的对至少一种蛋白质或其片段具有 特异性的抗体，包括抗体的指定部分或变体，以及抗独特型抗体，还 涉及编码抗体的核酸、互补核酸、载体、宿主细胞和它们的制备和使 用方法，包括治疗制剂、给药和装置。
技术介绍
单克隆抗体(mAbs)作为治疗试剂的使用已成为治疗各种疾病的 有效方法。另外，mAbs可代表着增进对各种疾病的免疫发病机制的 更好了解的强大工具。标准的产生mAbs的方法包括将骨髓瘤细胞与从-波免疫BALB/c 小鼠收获的淋巴结细胞或脾细胞进行融合(K6hler and Milstein， A^ww ■256, 495-497 (1975); K6hler and Milstein, / /画,/. 6， 511-519 (1976))。 BALB/c小鼠代表着用以产生mAbs的特选宿主，因为它们 容易获得，且当用外来的T依赖性抗原进行敏化时，这些小鼠中的免 疫应答以所产生的T细胞衍生细胞因子偏向于Th2样表型为特征 (Reiner and Locksley，i ev. /mmw"o/. 73, 151-177 (1995)纟宗述)。这一 Th2样应答伴随着高水平抗原特异性IgGl抗体的产生(Finkelman" a/.，i ev. /mmw"o/, & 303-333 (1990)),这与抗原特异性B细胞克隆的 频率的增加和b细胞融合后杂合体的数量的增加相关联。用Kohler和Milstein的方法产生mAb，要依赖于复杂生物过程的 成功加上收获目的抗原特异性B细胞并使之无限增殖化的体外技术的 成功。尽管如此， 一些抗原在BALB/c小鼠中只产生低的或不可检测的抗体滴度，这使得难以或不可能在B细胞融合后产生杂合体。因此，为了对使用从偏向Th2的小鼠收获的B细胞进行的抗原特异性mAbs 产生做出改进，需要增加抗原特异性B细胞克隆的频率。此外，环境因素如应激会影响适当的体液应答的产生。在与抗原 接触时经受应激的动物，因为皮质类固醇结合淋巴细胞表面造成的直 接下调作用或者因为抑制因子的激活，其产生的抗原应答减低(Borysenko and Borysenko, Gen Hosp Psychiatry 4:59-67, 1982; Gross and Siegel， J Anim Sci， 66:2091-2094， 1988)。CD40这种细胞表面受体在所有成熟B细胞的表面上、在大多数 成熟B细胞恶性肿瘤和一些早期B细胞急性淋巴细胞性白血病中表 达，但不在浆细胞上表达(Clark， nwwe力""gms 35: 33-36 (1990》。它 还在单核细胞、树突细胞、内皮细胞和上皮细胞上表达(van Kooten and Banchereau， 《/ lewAo.说'o/. 67: 2-17 (2000》。已发现CD40能介导很多种免疫和炎症应答(Schonbeck and Libby， Ce〃 M /ec. h/e Sd. 58: 4-43 (2001))。 CD40配体(也称CD154)主要见 于T细胞上(Gauchat et al., i^^SLe". 315: 259-266 (1993))。 CD40配体 对B细胞上的CD40的激活会造成B细胞增殖、分化、免疫球蛋白同 种型转换、生发中心形成和体液记忆应答的刺激(Kawabe et al.， //W7w"z7y 1: 167—178 (1994); Castigli et al"户rac. Ato.5W. 91: 12135-12139(1994》。抗CD40单克隆抗体对CD40的交联会介导B细胞增殖、黏着和 分化(DiSanto et al" A^w 361: 541-543 (1993); Hollenbaugh et al" ￡MSC^. 11: 4313-4321 (1992))。已用抗CD40激动剂抗体来激活和扩 增人静息B淋巴细胞。这已导致可供产生人杂交瘤或B细胞克隆的细 胞数的增加(Niedbala and Stott,场Mom"， 17: 299-304 (1998); Lagerkvist et al" Biotechniques, 18: 862-869 (1995》。另外，抗CD40抗 体与IL-4组合能诱导扁桃体B淋巴细胞的同型黏着、增殖和向Ig生 成细胞的分化(Bjorck et al., 1998)。因此，存在着对改进的抗体产生方法的需求，该法是能增加抗原特异性B细胞克隆在啮齿动物如BALB/c小鼠中的频率。专利技术概述本专利技术提供产生抗体的方法，所述方法包括用B细胞增殖剂随同 耙标抗原一起免疫能够产生抗体的动物。革巴标抗原可以是T细胞依赖 性抗原或T细胞非依赖性抗原。在本专利技术的一个方面，B细胞增殖剂是CD40激动剂，CD40激动 剂如抗CD40抗体激动剂或抗CD40抗体的一部分的使用能增加例如 被免疫啮齿动物中的抗原特异性B细胞的数量。用于本专利技术的B细胞 增殖剂还可以是BAFF (BLyS)、 IL-6、 APRIL、 CD40L (CD154)和抗 IgM/IL4共刺激。本专利技术的B细胞增殖剂可以随同用于靶向和/或用于B细胞分化 的第二剂一起使用。示例性的靶向剂是CD21。示例性的B细胞分化 剂是未折叠蛋白应答(UPR)途径组分和各种B细胞特异性转录因子。在本专利技术的方法中，B细胞增殖剂可以以蛋白质形式、以编码B 细胞增殖剂的DNA的形式或者以这两种形式的组合进行给药。另夕卜， 可将B细胞增殖剂(蛋白质或DNA形式)偶联到小分子或者与随同小 分子一起给药。例如，B细胞增殖剂能靶向B细胞表面，而小分子能 增强抗体应答。在本专利技术的另一个方面，在用抗原和B细胞增殖剂免疫啮齿动物 后，将抗原特异性抗体分离。抗体生成细胞可从已用目的抗原和B细 胞增殖剂免疫的人或其它合适动物(例如啮齿动物)的外周血或者优选 脾脏或淋巴结获得。任何其它合适的宿主细胞也可用来表达编码本发 明的抗体及其指定片段或变体的异源或内源核酸。融合细胞(杂交瘤) 或重组细胞可用选择性培养条件或其它合适的公知方法进行分离，并 通过有限稀释或细胞分选或者其它公知的方法进行克隆。能生产具有 所需特异性的抗体的细胞可通过合适的测定法(例如ELISA)来选出。本专利技术还包括已用B细胞增殖剂产生的分离哺乳动物(包括但不 限于人)抗体、免疫球蛋白、其片段、切割产物和其它指定部分和变体， 以及抗体組合物、抗独特型抗体、编码核酸或互补核酸、载体、宿主、组合物(composition)、组合(combination)、制剂、装置、转基因动物、 转基因植物及制备和使用它们的方法。本专利技术还提供至少一种包含(a)编码用B细胞增殖剂产生的分离 抗体和/或本文所述抗体的核酸和(b)合适的和/或药物可接受的载体或 稀释剂的组合物。本专利技术还提供至少一种用B细胞增殖剂组合物产生的抗体，或给 予治疗有效量的该组合物来调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患 者中的至少一种疾病或病症的方法，和/或在相关病症之前、之后或过 程中，这是本领域公知的和/或在本文中有描述。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在宿主动物中产生抗体的方法，所述方法包括以下步骤：　用靶标抗原免疫宿主动物；　将Ｂ细胞增殖剂给予宿主动物；　分离靶标抗原特异性抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C杜查拉，JM吉勒斯科马，MA赖滋恩，
申请(专利权)人：森托科尔公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]