一种基于RT-qPCR法检测胃癌的试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种基于RT‑qPCR法检测胃癌的试剂盒及其制备方法，属于分子生物学技术领域。所述试剂盒采用两个通用逆转录通用引物、一个通用qPCR反向通用引物和两个通用探针进行所有检测人类胃癌特异表达的miRNA的反应。实验证明，所述试剂盒具有检测特异性非常高：不仅能区别miRNAs和Pre‑miRNA、能区别miRNAs和genomic DNA，还能区别同一miRNA家族的不同成员，此外还能能区别miRNAs和其它RNAs。与传统qPCR相比，本发明专利技术使用通用逆转录通用引物，通用探针和通用qPCR反向通用引物实现所有人类胃癌特异表达的miRNA的检测，所述试剂盒具有检测范围广，检测灵敏度高的特点。

A RT qPCR method for detection of gastric cancer kit and preparation method and application based on

The invention provides a kit and a preparing method thereof for detecting gastric cancer RT based on qPCR method, which belongs to the technical field of molecular biology. The kit uses two universal reverse transcriptase primers, a universal qPCR reverse universal primer and two universal probes to detect all the miRNA expressed in human gastric cancer. \u5b9e\u9a8c\u8bc1\u660e\uff0c\u6240\u8ff0\u8bd5\u5242\u76d2\u5177\u6709\u68c0\u6d4b\u7279\u5f02\u6027\u975e\u5e38\u9ad8\uff1a\u4e0d\u4ec5\u80fd\u533a\u522bmiRNAs\u548cPre\u2011miRNA\u3001\u80fd\u533a\u522bmiRNAs\u548cgenomic\u00a0DNA\uff0c\u8fd8\u80fd\u533a\u522b\u540c\u4e00miRNA\u5bb6\u65cf\u7684\u4e0d\u540c\u6210\u5458\uff0c\u6b64\u5916\u8fd8\u80fd\u80fd\u533a\u522bmiRNAs\u548c\u5176\u5b83RNAs\u3002 Compared with traditional qPCR, the present invention uses universal reverse transcription universal primers, universal probes and universal qPCR reverse universal primers to detect all human gastric cancer specific miRNA. The kit has wide detection range and high detection sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种基于RT-qPCR法检测胃癌的试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种基于RT-qPCR法检测胃癌的试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
胃癌是一种发病率很高的恶性肿瘤，会对患者造成十分严重的影响。诊断和治疗市场巨大，而诊断技术缺乏，即使单克隆抗体治疗肿瘤也是刚刚开始，远远没有饱和。为了防止胃癌严重危害人民的身体健康，除了发展有效的治疗方法外，癌症的诊断，尤其早期诊断，对癌症的预防和治疗具有重大的意义。人是遗传信息和环境因素相互作用的产物，故胃癌与遗传因素密不可分，又与环境因素息息相关。事实上，可遗传的胃癌只占少部分。大部分的胃癌是环境危险因素作用于遗传因素的结果。这就是只基于遗传信息的诊断方法受到很大限制的原因。微小RNA是新近发现的RNA的另一个大家族。它们既是遗传信息的携带者，又深受环境的影响，为遗传和环境因素间的最重要的桥梁。越来越多的研究表明微小RNA在肿瘤的发生发展过程中起着重要的调控作用，极有可能是窥视胃癌状况的最佳窗口，可作为肿瘤预测，病因，诊断，进展，复发和治疗结果的生物标志物。江苏命码生物科技有限公司(以下简称“命码生物”)创新本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于RT‑qPCR法检测胃癌的试剂盒，包括PCR板、qPCR正向引物、qPCR反向通用引物、探针、逆转录通用引物和内参miRNA，其特征在于，所述qPCR正向引物、qPCR反向通用引物和探针同时包被在PCR板中，所述逆转录通用引物盛装在引物试剂管中；所述内参miRNA包括ArtRNA3；所述ArtRNA3具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述逆转录通用引物包括两种；一种逆转录通用引物是摩尔浓度为10μmol/L的检测胃癌样品的逆转录通用引物，另一种逆转录通用引物是摩尔浓度为10μmol/L检测健康组织样品用逆转录通用引物；所述检测胃癌样品用逆转录通用引物具有如序列表中S...

【技术特征摘要】
1.一种基于RT-qPCR法检测胃癌的试剂盒，包括PCR板、qPCR正向引物、qPCR反向通用引物、探针、逆转录通用引物和内参miRNA，其特征在于，所述qPCR正向引物、qPCR反向通用引物和探针同时包被在PCR板中，所述逆转录通用引物盛装在引物试剂管中；所述内参miRNA包括ArtRNA3；所述ArtRNA3具有如序列表中SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；所述逆转录通用引物包括两种；一种逆转录通用引物是摩尔浓度为10μmol/L的检测胃癌样品的逆转录通用引物，另一种逆转录通用引物是摩尔浓度为10μmol/L检测健康组织样品用逆转录通用引物；所述检测胃癌样品用逆转录通用引物具有如序列表中SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；所述检测健康组织样品用逆转录通用引物具有如序列表中SEQIDNo.3所示的核苷酸序列；所述探针包括两种探针，分别为摩尔浓度为10μmol/L的检测胃癌样品用通用探针和摩尔浓度为10μmol/L的检测健康组织样品用通用探针；所述检测胃癌样品用通用探针具有如序列表中SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；所述检测健康组织样品用通用探针具有如序列表中SEQIDNo.5所示的核苷酸序列；所述qPCR反向通用引物具有如序列表中SEQIDNo.6所示的核苷酸序列；所述qPCR正向引物的核苷酸序列同差异表达miRNA的核苷酸序列；所述差异表达miRNA包括URS000054A671_9606Homosapienshsa-miR-5004-5p、TJU_CMC_MD2.ID01366.5p-miR、URS000038B599_9606Homosapienshsa-miR-363-3p、TJU_CMC_MD2.ID00936.5p-miR、novel-miR-1373-3p和TJU_CMC_MD2.ID00928.5p-miR中的一个或多个。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述两种探针采用两种不同的染料标记，分别为FAM荧光探针和VIC荧光探针。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组分还包括5×聚腺苷酸聚合酶、10mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：王家旺，张彬，
申请(专利权)人：健生生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11