【技术实现步骤摘要】
一种特异性定量PCR反应混合液、miRNA定量检测试剂盒以及检测方法
本专利技术属于核酸的RealTimePCR检测
，尤其涉及一种特异性定量PCR反应混合液、miRNA定量检测试剂盒以及检测方法。
技术介绍
PCR是聚合酶链式(PolymeraseChainReaction)反应的简称，是一种可以将DNA分子数以2的指数倍数(2N)扩增的方法，这是迄今为止最为重要的技术之一。由于PCR强大的灵敏度和精确度，许多需要检测和定量特异的DNA分子的应用领域，包括法医学和临床诊断，都高度依赖于PCR。因为在这些领域，误导或错误的结果可导致严重的后果，因此需要高精确的分析，稳定的，准确的和可重复的结果。但也正是PCR的超强灵敏度，其非特异扩增可导致错误的结果包括假阳性或者假阴性，可谓“差之毫厘，谬以千里”。由于在PCR反应液的配制是在较低温度(室温或者冰上)完成的，PCR所用的聚合酶(通常是TaqDNApolymerase)在这些温度下具有活性，而引物在这些温度下能与之互补同源性较低的DNA分子(有可能是另一条引物)形成部分双链结构。当引物的3’端与其它形成双链结构...
【技术保护点】
1.一种特异性定量PCR反应混合液，其特征在于，以水为溶剂，包括以下浓度的组成成分：Tris‑HCl(70～80)mmol/L，(NH4)2SO4(15～25)mmol/L，Triton‑100(0.08～0.12)％(v/v)，MgCl2(2～3)mmol/L，dNTPs(150～250)μmol/L，海藻糖(190～210)mmol/L和热启动Taq DNA聚合酶(45000～55000)U/L；所述Tris‑HCl的pH值为8.5～9.0。
【技术特征摘要】
1.一种特异性定量PCR反应混合液，其特征在于，以水为溶剂，包括以下浓度的组成成分：Tris-HCl(70～80)mmol/L，(NH4)2SO4(15～25)mmol/L，Triton-100(0.08～0.12)％(v/v)，MgCl2(2～3)mmol/L，dNTPs(150～250)μmol/L，海藻糖(190～210)mmol/L和热启动TaqDNA聚合酶(45000～55000)U/L；所述Tris-HCl的pH值为8.5～9.0。2.根据权利要求1所述的PCR反应混合液，其特征在于，以水为溶剂，包括以下浓度的组成成分：Tris-HCl75mmol/L，(NH4)2SO420mmol/L，Triton-1000.1％，MgCl2(2～3)mmol/L，dNTPs200μmol/L，海藻糖200mmol/L和TaqDNA聚合酶50000U/L；所述Tris-HCl的pH值为8.8。3.一种miRNA定量检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的PCR反应混合液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括LNAFAM水解探针和通用反向扩增引物；所述LNAFAM水解探针具有如SEQIDNO：1所示的核苷酸序列；所述通用反向扩增引物具有如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，将所述试剂盒的组分置于容器后，真空干燥获得无水miRNA定量检测试剂盒。6.一种利用qPCR对样品中miRNA进行定量的检测方法，包括以下步骤：1)将样品总RNA、聚A聚合酶缓冲液、大肠杆菌聚A聚合酶、rATP、MnCl2和无RNase水混合孵育获得多聚腺苷酸化反应产物；2)将步骤1)中获得的多聚腺苷酸化反应产物、RT缓冲液、dNTP、逆转录引物、核酸酶阻断剂和无RNase水混合后，进行逆转录获得逆转录产物；3)将所述逆转录产物与权利要求1或2所述的PCR反应混合液混合后进行qPCR扩增获得样品中miRNA的定量。7.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：王家旺，张彬，
申请(专利权)人：健生生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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