一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法，属于生物检测技术领域。该方法首先采集志愿者的唾液，并针对胶基型产品的使用特点，采用全仿真模拟咀嚼机来模拟胶基型烟草制品的咀嚼过程，不仅考虑了制品溶出物与唾液中细菌的相互作用，还充分模拟了咀嚼过程胶基型制品对细菌的粘附作用，从而使整个变化过程更接近于人的咀嚼，之后对咀嚼过程中唾液中总细菌含量进行荧光定量PCR分析，从而考察在使用胶基型烟草制品前后唾液中的总细菌含量的变化，为胶基型烟草制品的口腔健康提供参考。

【技术实现步骤摘要】
一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法。
技术介绍
Nasidze等通过对全球12个国家和地区的120例健康人群唾液样本进行分析，发现204个细菌基因属，其中39个是以前从没有被描述过的口腔菌属，64个为未知种属。该研究同时发现，口腔细菌组具有个体特异性，但多样性几乎不受地理结构的影响。另有研究采集了特定牙位的龈上菌斑和龈下菌斑以及唾液等26种样本并将其混合，鉴定出9个门的247种细菌，这些细菌在种和株水平上存在明显的个体差异，与肠道细菌在属的水平上存在显著的差异。有研究者将核心微生物按丰度高低依次排列为：链球菌属(25％)、普雷沃菌属(16％)、嗜血杆菌属(12％)、罗思菌属(7％)、韦荣球菌属(6％)、奈瑟菌属(6％)、梭杆菌属(6％)和卟啉菌属(4％)。研究者认为当口腔内环境发生变化时，原有的口腔微生态平衡受到破坏形成新的生态环境或滞留区，对口腔内定居微生物会产生影响，口腔微生物的种类、数量、微生物与微生物之间、微生物与宿主之间的相互关系均发生变化，这些变化都可能会导致基牙产生龋病和牙周本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），采集健康志愿者唾液，编号为1#液体；步骤（2），将胶基型烟草制品放入模拟咀嚼机中，并分多次注入步骤（1）采集到的唾液，进行人工咀嚼，咀嚼过程中，收集不同咀嚼时间点的唾液；步骤（3），将步骤（2）收集到的不同咀嚼时间点的唾液与采集到的唾液一起放入厌氧培养箱于37℃下进行共培养；之后分别提取各时间点的培养液中唾液总细菌DNA，同时提取多种口腔细菌标准菌株混合物的原始DNA；步骤（4），以浓度梯度稀释10倍的多种口腔细菌标准菌株混合物的原始DNA作为模板进行荧光定量PCR分析，之后绘制荧光定量PCR标准曲线；同时，分...

【技术特征摘要】
1.一种胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），采集健康志愿者唾液，编号为1#液体；步骤（2），将胶基型烟草制品放入模拟咀嚼机中，并分多次注入步骤（1）采集到的唾液，进行人工咀嚼，咀嚼过程中，收集不同咀嚼时间点的唾液；步骤（3），将步骤（2）收集到的不同咀嚼时间点的唾液与采集到的唾液一起放入厌氧培养箱于37℃下进行共培养；之后分别提取各时间点的培养液中唾液总细菌DNA，同时提取多种口腔细菌标准菌株混合物的原始DNA；步骤（4），以浓度梯度稀释10倍的多种口腔细菌标准菌株混合物的原始DNA作为模板进行荧光定量PCR分析，之后绘制荧光定量PCR标准曲线；同时，分别以各时间点的培养液中唾液总细菌DNA作为模版进行荧光定量PCR分析，空白对照模板采用灭菌双蒸水，根据标准曲线计算各时间点培养液中唾液总细菌含量；其中，荧光定量PCR反应所使用的上游引物为5’-cgctagtaatcgtggatcagaatg-3’；下游引物为5’-tgtgacgggcggtgtgta-3’；探针为FAM-cacggtgaatacgttcccgggc-TAMRA。2.根据权利要求1所述的胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法，其特征在于，步骤（2）的具体方法为：将0.8-1.2g胶基型烟草制品放入全仿真模拟咀嚼机的溶液皿中，注入步骤（1）采集到的唾液5mL，进行人工咀嚼；设置咀嚼机械齿以5秒一次的频率进行上下咬合且左右磨错动作，共20次，咬合宽度为15mm；同时，启动左右开合旋转组件，每隔4次上下咬合且左右磨错动作做一次聚拢翻滚动作，每次聚拢翻滚夹板的旋转角度为45°；完成后收集溶液皿中的液体，编号为2#液体；第二次再注入步骤（1）采集到的唾液5mL，进行人工咀嚼；设置咀嚼机械齿以10秒一次的频率进行上下咬合且左右磨错动作，共10次，咬合宽度为10mm；同时，启动左右开合旋转组件，每隔5次上下咬合且左右磨错动作做一次聚拢翻滚动作，每次聚拢翻滚夹板的旋转角度为30°；完成后收集溶液皿中的液体，编号为3#液体；第三次再注入步骤（1）采集到的唾液5mL，进行人工咀嚼；设置咀嚼机械齿以5秒一次的频率进行上下咬合且左右磨错动作，共30次，咬合宽度为8mm；同时，启动左右开合旋转组件，每隔5次上下咬合且左右磨错动作做一次聚拢翻滚动作，每次聚拢翻滚夹板的旋转角度为90°；完成后收集溶液皿中的液体，编号为4#液体。3.根据权利要求2所述的胶基型烟草制品对唾液总细菌影响的检测方法，其特征在于，步骤（3）的具体方法为：（3.1）共培养：取步骤（2）中的2#液体、3#液体和4#液体及步骤（1）中的1#液体，每种液体均分为3等份，分别放入厌氧培养箱于37℃下进行共培养，每种液体3等份的培养时间分别为0h、2h、6h三个时间段；（3.2）培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：高茜，李雪梅，陆舍铭，米其利，朱洲海，管莹，徐玉琼，夭建华，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53