胶原酶制备工艺制造技术

本发明专利技术属于酶工程或生物工程的技术领域．胶原酶是一种在生理ｐＨ及温度条件下水解天然胶原酶的水解蛋白酶，我们将组织梭菌Ｃｌ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ６４００８经改进的培养基、发酵液静止发酵得到毒性低的胶原酶，将发酵液经过无菌过滤，硫酸铵沉淀、脱盐、冻干获得胶原酶粗品，再经ＤＥＡＥ柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５脱盐，冻干后可得精品，该胶原酶是细胞分离的重要工具酶，其油膏制剂用于治疗清疮脱痂，其注射用于治疗椎脊盘突出症．（*该技术在2005年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属酶工程或生物工程
胶原酶(Collagenase)是一种在生理PH及温度条件下水解天然胶原蛋白酶，胶原酶不仅是细胞分离的重要工具酶，而且是外用清疮脱痂，局部注射治疗椎脊盘突出症的良好药物。1927年Ssadilow首先使用了“Collagenase”的名称，1938年Grassmenn第一次证明胶原酶的存在，它能作用于天然胶原分子的特异性螺旋体结构部份，通过对各种菌产生胶原酶的研究，认为只有溶组织梭状芽孢杆菌(Clostridum histolyticum)与介毒无色杆菌(Achro-mobacter iophagus)较有价值，在胶原酶的制备方面，美国哥伦比亚大学I.mandl博士提出的发酵配方提取方法及检定方法至今仍为各国研究工作者采用。五十年代提纯胶原酶的方法有四类(1)硫酸铵沉淀法(2)有机溶剂沉淀分离法，(3)电泳法(4)吸附洗脱法。1959年，Grant.N.H.Alburn，H.z报导使用DEAE离子交换层析精制胶原酶的方法，七十年代至今采用的方法主要有两类(一)利用各种交换材料及分子筛进一步分离提纯胶原酶(二)用亲和层析提纯胶原酶。原工艺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用组织梭菌Ｃｌ，ｈｉｓｔｏｌｇｔｉｃｕｍ６４００８经培养发酵后再经ＤＥＡＥ纤维素及分子筛分离提纯胶原酶的工艺，本专利技术的特征在于将菌种经组份为酵母膏０．２－１％，酵母粉０．２－１％，明胶１－３％，肉胨２－６％的培养基在温度为３７－４２℃，周期４０－４５小时静止发酵后，无菌过滤，在１０℃以下加硫酸铵沉淀胶原酶，使浓度达到４５－５５％（重量／体积），所获沉淀溶于ＰＨ７－８Ｔｒｉｓ－－Ｃａ↑〔艹〕缓冲液在低温与氮气加压下经招滤膜脱盐，冷冻干燥获胶原酶粗品，然后经以ＰＨ５－６，ＨＡＣ－ＮａＡｃ缓冲液平衡之ＤＥＡＥ纤维素柱层析，下柱液再经ＰＨ６．０－７．５电导水平衡的ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５粒，...

【技术特征摘要】
1.一种利用组织梭菌Cl，histolgticum64008经培养发酵后再经DEAE纤维素及分子筛分离提纯胶原酶的工艺，本发明的特征在于将菌种经组份为酵母膏0.2-1%，酵母粉0.2-1%，明胶1-3%，肉胨2-6%的培养基在温度为37-42℃，周期40-45小时静止发酵后，无菌过滤，在10℃以下加硫酸铵沉淀胶原...

【专利技术属性】
技术研发人员：卞祖宁，于保贞，王若驹，张蓓蕾，许海宝，孙忆华，
申请(专利权)人：国家医药管理局上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]