一种绒山羊毛囊干细胞体外高效培养的技术方法技术

本发明专利技术涉及一种绒山羊毛囊干细胞体外高效培养的技术方法，首先分离绒山羊毛囊：剪下绒山羊背颈部皮肤，利用胶原酶IV消化，将毛囊结构分离并去除杂质；第二步，毛囊经培养液洗涤后，在消化液中消化为单细胞后过400目细胞筛转入毛囊干细胞培养液培养，以培养当天为零代，每3-4天传代一次；第三步，收集原代培养3-4天的毛囊干细胞克隆球，将原克隆球吹打至原大小1/2或1/4，将细胞悬液移至新培养液中，根据细胞密度按照1:2或1:3传代。本方法从有限的材料来源获得大量的毛囊干细胞，操作简便，可重复性好，培养的毛囊干细胞表达β-intigren，oct-4等，碱性磷酸酶阳性，显示毛囊干细胞具有多向分化潜能。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种绒山羊毛囊干细胞体外高效培养的技术方法，其特征在于按照如下步骤操作：第一步，绒山羊毛囊的分离：剪取绒山羊背颈部皮肤，剪掉外侧毛发至根部，剪成小块后，置于生理盐水洗三遍，75%的酒精浸泡5分钟，转移至pH7.0磷酸盐缓冲液+10%胎牛血清的操作液中，在操作液中清洗，利用胶原酶IV在37℃下消化10?15分钟，然后用手术镊子将毛囊结构分离出来，转移到前述操作液中，去除与毛囊连接在一起的皮脂腺、立毛肌、脂肪杂质，在新鲜细胞培养液DMEM/F12中将毛囊洗3次；第二步，绒山羊毛囊干细胞体外原代培养：毛囊经DMEM/F12洗完后，置于0.25%Trypsin?0.04%EDTA消化液，37℃消化20...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙源超，陈春雷，李兰，沈伟，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：