利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学领域，涉及一种利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。首先，在无菌情况下剥离神经段的神经外膜，切碎、清洗，离心弃上清；然后用酵素酶、胶原酶ＮＢ４或者两者的混合液消化神经碎块３０～６０分钟，反复吹打，然后离心、弃上清，得到细胞团块；最后用许旺细胞培养液重悬，即可。本发明专利技术使用复合胶原酶和酵素酶分离纯化许旺细胞，经过第一次纯化后，许旺细胞的纯度就可达到９８％。再次纯化扩增后，许旺细胞的纯度就可以接近１００％。利用本发明专利技术能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法，其特征在于，其包括下述步骤：（１）无菌情况下剥离神经段的神经外膜，切碎神经段并置于ＤＭＥＭ培养基中清洗，离心弃上清；（２）用３～５倍组织量的质量体积比为０．０５～０．３％的消化酶溶液消化神经碎块３０～６０分钟；所述的消化酶是酵素酶、胶原酶ＮＢ４或者两者的混合液；（３）将步骤（２）得到的混悬液用吸管反复吹打３～５分钟；（４）以６００ｇ离心５～１０分钟，弃上清，得到细胞团块；（５）用许旺细胞培养液重悬步骤（４）得到的细胞，即可。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：祝加学，沈尊理，秦金保，沈华，张兆峰，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]