The present invention provides a method for marking preparation immunosensor for the detection of tumor, which comprises the following steps: a glassy carbon electrode with Al2O3 polishing powder grinding, clean; take nitrogen doped carbon quantum dots N CQDs solution to the electrode surface; the electrode nearly dry, add 1 ethyl (3 3 two methyl aminopropyl) carbide two imine EDC and N hydroxysuccinimide NHS solution to the electrode surface, dry; adding bovine serum albumin BSA solution on the electrode surface, the electrode surface to block nonspecific active sites; adding a series of different concentrations of tumor marker antigen Ag solution, rinse the electrode surface and drying; coating of silver nanoparticles on thiophenol functionalized sulfonated carbon nanotubes Ab2 antibody incubation solution, drop onto the electrode surface. The immunosensor for detecting tumor markers based on the above steps has fast detection speed, high sensitivity and accuracy, and strong specificity.
【技术实现步骤摘要】
一种用于检测肿瘤标志物免疫传感器的制备方法
本专利技术属于新型功能纳米材料、免疫分析和生物传感
，提供了一种用于检测肿瘤标志物免疫传感器的制备方法。
技术介绍
肿瘤是人类健康的杀手。恶性肿瘤也称为癌症，是当前严重威胁人类健康和生命的一类疾病，它是机体受各种内在或外在致癌因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失掉了对其自身生长的正常调控，导致不正常增生而形成的新生物。据WHO研究，2012年全球癌症患者和死亡病例都在令人不安地增加，新增癌症病例有近一半出现在亚洲，其中大部分在中国，中国新增癌症病例高居世界第一位。WHO也指出，及早诊断和治疗是对抗肿瘤疾病的有效手段之一，肿瘤的早期诊断是决定其预后的一个重要因素。肿瘤标志物是指在肿瘤的发生和增殖过程中产生的、反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶、基因等，是肿瘤早期诊断的重要指标。一般而言，肿瘤细胞越多，恶性程度越高，越晚期，肿瘤标志物的浓度越高。随着肿瘤早期诊断进入蛋白质时代，越来越多的高特异性、低丰度肿瘤标志物被发现，这就对建立快速、高灵敏度、高特异性肿瘤标志物检测技术提出了更高的要求。免疫分析法...
【技术保护点】
一种用于检测肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将直径为5mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；(2)取6μL、15～20μg/mL的氮掺杂碳量子点N‑CQDs溶液滴到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；(3)待电极近干时，滴加3μL、浓度为0.4～0.6mol/L的1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺EDC和0.2～0.25mol/LN‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶液至电极表面，4℃冰箱中孵化30min，室温下晾干；(4)滴加6μL、质量分数为0.5～2.0％的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点...
【技术特征摘要】
1.一种用于检测肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将直径为5mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；(2)取6μL、15～20μg/mL的氮掺杂碳量子点N-CQDs溶液滴到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；(3)待电极近干时，滴加3μL、浓度为0.4～0.6mol/L的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺EDC和0.2～0.25mol/LN-羟基琥珀酰亚胺NHS溶液至电极表面，4℃冰箱中孵化30min，室温下晾干；(4)滴加6μL、质量分数为0.5～2.0％的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；滴加6μL、1～50ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中干燥；(5)滴涂6μL、1～3mg/mL的银纳米粒子对苯硫酚功能化磺化碳纳米管检测抗体Ab2孵化物溶液，滴涂于电极表面，置于4℃冰箱中晾干，制得一种用于检测肿瘤标志物免疫传感器。2.如权利要求1所述的一种用于检测肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述氮掺杂碳量子点N-CQDs的制备步骤如下：将0.2～0.3g的二乙基三胺五乙酸DTPA溶解于25～35mL的超纯水中，超声分散，继续加热至250℃下溶解，继续加热溶剂蒸发，出现白色固体，当白色固体变为棕黄色时表明氮掺杂碳量子点N-CQDs的生成；将所得的粗产品溶解在20mL超纯水中，9000rpmin离心，所得上层清液冷冻干燥得纯净的氮掺杂碳量子点N-CQDs固体，将其研磨成粉末，制得氮掺杂碳量子点N-CQDs。3.如权利要求1所述的一种用于检测肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述银纳米粒子对苯硫酚功能化磺化碳纳米管检测抗体Ab2孵化物溶液的制备步骤如下：①磺化碳纳米管的制备称取1.0～1.5g的多壁碳纳米管置于350mL三口烧瓶中，依次加入77mL浓硫酸和33mL浓硝酸，150℃油浴下反应50～55min，冷却至室温后，将所得悬浊液移入1000mL烧杯，加300mL超纯水稀释，抽滤，用超纯水洗涤至滤液成中...
【专利技术属性】
技术研发人员：凌庆枝，马少华，卢金，秦志伟，
申请(专利权)人：宁波卫生职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。