一种血清IFN-γ和LncRNAs组合物用于制备胃癌诊断试剂盒的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种血清IFN‑γ和LncRNAs组合物用于制备胃癌诊断试剂盒的用途。单独使用血清IFN‑γ诊断区分胃癌与健康志愿者时，ROC曲线下面积(AUC)为0.636。本发明专利技术发现，使用血清NONHSAT089447或NONHSAT041499与血清IFN‑γ联合诊断区分胃癌与健康志愿者时，AUC可以提高到0.793或0.805；使用血清NONHSAT089447和NONHSAT041499与血清IFN‑γ联合诊断区分胃癌与健康志愿者时，AUC可以提高到0.921。本领域技术人员知道，ROC曲线下面积在1.0和0.5之间，在AUC>0.5的情况下，AUC越接近于1，说明诊断效果越好。AUC在0.5‑0.7时有较低准确性，AUC在0.7‑0.9时有一定准确性，AUC在0.9以上时有较高准确性。因此，血清IFN‑γ可以联合血清NONHSAT089447和/或NONHSAT041499用于制备诊断胃癌的诊断试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
一种血清IFN-γ和LncRNAs组合物用于制备胃癌诊断试剂盒的用途
本专利技术属于基因诊断领域，涉及诊断试剂盒的开发，具体涉及一种血清IFN-γ和LncRNAs组合物用于制备胃癌诊断试剂盒的用途。
技术介绍
胃癌在我国发病率居恶性肿瘤第2位，死亡人数占癌症人数14.33％，居第3位，仅次于肺癌和肝癌。由此可见，胃癌是肿瘤防治的重点。随着肿瘤标志物广泛应用于临床，越来越多学者研究发现，在癌症防治过程中肿瘤标志物发挥重要的作用。IFN-γ是参与免疫调节的重要细胞因子，一般由活化的T淋巴细胞分泌，能够影响肿瘤细胞的生长。IFN-γ在肿瘤患者体内表达水平明显异常。基于此，已有多项研究将IFN-γ作为肿瘤诊断的标志物。已有研究将血清IFN-γ作为诊断标志物用于诊断胃癌(血清IFN-γ和肿瘤标志物联合检测对胃癌的诊断价值，生物医学工程与临床2016年3月第20卷第2期)，但是，单独使用血清IFN-γ诊断胃癌的准确度较低，临床价值低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供血清IFN-γ和LncRNAs组合物用于制备胃癌诊断试剂盒的用途，以提高临床诊断胃癌的准确度。本专利技术通过下面的技术方案得以实现：IFN-γ和LncRNANONHSAT089447或LncRNANONHSAT041499联合用于制备诊断胃癌的诊断组合物的用途。IFN-γ和LncRNANONHSAT089447、LncRNANONHSAT041499联合用于制备诊断胃癌的诊断组合物的用途。优选地，所述IFN-γ、LncRNANONHSAT089447、LncRNANONHSAT041499为血清IFN-γ、NONHSAT089447、NONHSAT041499。IFN-γ和LncRNANONHSAT089447或LncRNANONHSAT041499联合用于制备诊断胃癌的诊断试剂盒的用途。IFN-γ和LncRNANONHSAT089447、LncRNANONHSAT041499联合用于制备诊断胃癌的诊断试剂盒的用途。优选地，所述IFN-γ、LncRNANONHSAT089447、LncRNANONHSAT041499为血清IFN-γ、NONHSAT089447、NONHSAT041499。本专利技术的优点：单独使用血清IFN-γ诊断区分胃癌与健康志愿者时，ROC曲线下面积(AUC)为0.636。本专利技术发现，使用血清NONHSAT089447或NONHSAT041499与血清IFN-γ联合诊断区分胃癌与健康志愿者时，AUC可以提高到0.793或0.805；使用血清NONHSAT089447和NONHSAT041499与血清IFN-γ联合诊断区分胃癌与健康志愿者时，AUC可以提高到0.921。本领域技术人员知道，ROC曲线下面积在1.0和0.5之间，在AUC>0.5的情况下，AUC越接近于1，说明诊断效果越好。AUC在0.5-0.7时有较低准确性，AUC在0.7-0.9时有一定准确性，AUC在0.9以上时有较高准确性。因此，血清IFN-γ可以联合血清NONHSAT089447和/或NONHSAT041499用于制备诊断胃癌的诊断试剂盒。附图说明图1为血清IFN-γ单独诊断区分胃癌患者与健康志愿者的ROC曲线；图2为血清IFN-γ联合NONHSAT089447诊断区分胃癌患者与健康志愿者的ROC曲线；图3为血清IFN-γ联合NONHSAT041499诊断区分胃癌患者与健康志愿者的ROC曲线；图4为血清IFN-γ联合血清NONHSAT089447和血清NONHSAT041499诊断区分胃癌患者与健康志愿者的ROC曲线。具体实施方式下面结合具体实施例进一步介绍本专利技术的技术方案。一、实验材料胃癌患者血清标本取自东南大学附属中大医院胃癌手术后患者。所有患者术前均未接受放射治疗、化学治疗及抗肿瘤药物等治疗，均有完整的临床及病理资料。胃癌患者138例(胃癌组)，其中女性63例，男性75例；年龄35-75岁，平均年龄63.3岁。健康志愿者血清标本55例(正常对照组)，其中女性26例，男性29例；年龄35-70岁，平均年龄61.5岁。胃癌组和正常对照组间年龄和性别构成差异无统计学意义。IFN-γ检测酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒购于Raybiotech公司。二、实验方法1、血清IFN-γ测定方法IFN-γ检测采用ELISA方法，按照试剂盒说明严格执行。2、血清LncRNAs测定方法取血清200μL，使用Tiangen公司的RNAprepPure试剂盒提取总RNA。实验过程中应尽可能减少RNA降解，以获得纯度和质量均较高、无蛋白和其它杂质污染的RNA。用1.5％琼脂糖凝胶电泳分析RNA的完整性，紫外分光光度法检测RNA浓度。使用Tiangen公司的TIANScriptcDNA第一链合成试剂盒和oligo(dT)15通用逆转录引物进行逆转录反应。反转录总体系为20μL：1-5μg总RNA，2μLoligo(dT)15，2μLSuperPuredNTPs，补RNase-FreeddH2O至14.5μL。反应管置70℃加热5min后迅速在冰上冷却2min，加入4μL5XFIRSTSTRANDBUFFER(含有DTT)，0.5μLRNasin，1μLTIANScriptM-MLV，轻轻用移液器混匀，42℃温浴50min。95℃加热5min终止反应，反应产物于-20℃保存备用。根据Genbank目的基因序列，用引物设计软件primerpremier5.0设计NONHSAT089447、NONHSAT041499特异性引物，由上海生工公司合成。内参引物HS-ACTB(β-actin)购自上海生工公司。反应体系(20μL)：SYBRSelectMasterMix10μL，cDNA2μL，上游引物1μL，下游引物1μL，ddH2O6μL。使用ABI公司的7500FAST荧光定量检测仪进行检测。反应参数：50℃2min；95℃2min，95℃15s，60℃15s，72℃1min，共45个循环。溶解曲线参数：95℃15s，60℃1min，95℃15s，60℃15s。每份样品重复测定3次，获得Ct值。以ACTB的拷贝数作为校正基数，计算各样本中各LncRNAs的相对内参表达量，即为该样品中目标LncRNAs的相对表达量。NONHSAT089447、NONHSAT041499特异性引物如下：NONHSAT089447上游：5’-GTAGGGCTTGGATGGACTTT-3’；NONHSAT089447下游：5’-CCGTCAACACATCAGGCCT-3’；NONHSAT041499上游：5’-CGATTTTGGGAACCTCTATC-3’；NONHSAT041499下游：5’-CAACTGCTGGGTGGAGTCTA-3’。3、统计学处理采用SPSS20.0软件进行分析，以均值±偏差表示，组间比较采用t检验。评价各项指标应用价值，绘制受试者工作特征(ROC)曲线，并计算曲线下面积(AUC)；以P＜0.05为差异有统计学意义。采用ROC曲线评价各单项指标及联合指标对胃癌的诊断价值。三、实验结果1、两组间肿瘤标志物水平的比较胃癌组血清中IFN-γ水平明显低于正常对照组，胃癌组血清本文档来自技高网...

【技术保护点】
IFN‑γ和LncRNANONHSAT089447或LncRNANONHSAT041499联合用于制备诊断胃癌的诊断组合物的用途。

【技术特征摘要】
1.IFN-γ和LncRNANONHSAT089447或LncRNANONHSAT041499联合用于制备诊断胃癌的诊断组合物的用途。2.IFN-γ和LncRNANONHSAT089447、LncRNANONHSAT041499联合用于制备诊断胃癌的诊断组合物的用途。3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述IFN-γ、LncRNANONHSAT089447、LncRNANONHSAT041499为血清IFN-γ、NONHSAT089447、NONHSAT041499。...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨豪伟，何志敏，冯子欣，王斌，
申请(专利权)人：南京普氟生物检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32