本发明专利技术公开了一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于增强CIK细胞活性的用途。本发明专利技术提供了盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于制备增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物的用途，盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ可以用于增强CIK细胞的增殖能力和对肿瘤细胞的杀伤能力，这突破了现有技术对盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的认知水平；本发明专利技术还提供了一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的药物制剂，该制剂中至少含有PVP K‑90，PVP K‑90可以用于提高盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的热稳定性，抑制其在高温条件下的降解水平。
A kind of sarpogrelate hydrochloride impurity III use to enhance the activity of CIK cells
The invention discloses a sarpogrelate hydrochloride impurity III use to enhance the activity of CIK cells. The present invention provides sarpogrelate hydrochloride impurity III for the preparation of enhanced CIK cell proliferation and cytotoxicity of drug use, sarpogrelate hydrochloride impurity III can be used to enhance the proliferation of CIK cells and the tumor cell killing ability, which breaks through the cognitive level of existing technology of acid salt of sarpogrelate impurity III; the the invention also provides a pharmaceutical preparation of sarpogrelate hydrochloride impurity III, this preparation contains at least PVP K 90, PVP K 90 can be used to improve the thermal stability of sarpogrelate hydrochloride impurity III, inhibit the degradation level in high temperature conditions.
【技术实现步骤摘要】
一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于增强CIK细胞活性的用途
本专利技术属于药物领域，涉及已知化合物的新用途，具体涉及一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于增强CIK细胞活性的用途。
技术介绍
盐酸沙格雷酯片1993年在日本首次上市，商品名为Anplag，是一种5-HT2受体阻滞剂，能够抑制血小板凝聚、抑制血管收缩，具有抗血栓作用以及改善微循环。其适应症为改善慢性动脉闭塞症引起的溃疡、疼痛以及冷感等缺血性诸症状。盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ是盐酸沙格雷酯的一种光降解杂质，其化学结构式如下：现有技术中，盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ主要用于盐酸沙格雷酯原料及制剂的质量控制，没有关于其药理活性的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于增强CIK细胞活性的用途。本专利技术通过下面的技术方案得以实现：盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于制备增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物的用途。一种用于增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物制剂，含有上述盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ。优选地，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂制成药学上可以接受的剂型。优选地，所述载体或赋形剂为PVPK-90。PVPK-90在增强盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ热稳定性方面的应用。本专利技术的优点：本专利技术提供了盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于制备增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物的用途，盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ可以用于增强CIK细胞的增殖能力和对肿瘤细胞的杀伤能力，这突破了现有技术对盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的认知水平；本专利技术还提供了一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的药物制剂，该制剂中至少含有PVPK-90，PVPK-90可以用于提高盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的热稳定性，抑制其在高温条件下的降解水平。附图说明图1为不同浓度盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ对CIK细胞增殖的影响(OD450值比较)；图2为盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ对CIK细胞体内外杀瘤活性的影响。具体实施方式下面结合具体实施例进一步介绍本专利技术的技术方案。实施例1盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性一、实验材料DMEM、RPMI-1640和GT-T551培养液，以及胎牛血清均为美国Gibco公司产品。青霉素-链霉素溶液产自碧云天。淋巴细胞分离自健康志愿者外周血。SMMC-7721肝癌细胞系于上海中科院购买，本实验室长期保存。盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ自制，HPLC归一化纯度大于98％。二、实验方法1、CIK细胞分离及原代培养采集健康志愿者血液20mL，平衡温度至室温。取50mL离心管若干，将血样转移至离心管，用生理盐水稀释至30mL，充分吹打均匀。将稀释后的血样缓缓加入另一管装有15mL淋巴细胞分离液的上方，形成上下两相。22℃，390g离心30min。离心后血浆层与分离液之间有白膜层可见，分别收集上层血浆和中间白膜层至新的离心管。于收集白膜层的离心管中加入RPMI-1640至45mL，混匀，22℃，1000g离心10min。重复上一步骤两次，离心速度分别改为400g和201g，最后一次离心之前取20μL混匀的细胞悬液进行台盼蓝染色计数。离心后重悬细胞，按细胞数5×106个/mL加含有500μg/LCD3mAB，1000U/mLIL-2和10％FBS的GT-T551培养基诱导培养成CIK细胞。2、肿瘤细胞培养在37℃，5％CO2及90％相对湿度的细胞培养箱中用DMEM完全培养液(含10％胎牛血清和100mg/L青-链霉素溶液)培养SMMC-7721细胞。3、CCK-8检测细胞增殖活力将培养7d的CIK细胞数调整至3×105个/mL，于96孔平底细胞培养板每孔加入细胞悬液50μL，设干预组和对照组，对照组为生理盐水组，干预组分为低、中、高浓度组，分别加入盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ终浓度为5、10、20μM的培养基各50μL，每个浓度4个平行对照孔，置于细胞培养箱中处理细胞72h，加入10μLCCK-8溶液，4h后用酶联免疫检测仪检测OD450值，测定低、中、高浓度干预组OD450值。4、肿瘤杀伤实验将培养9d的CIK细胞均分为两组，分别为对照组和干预组，对照组为生理盐水组，干预组为培养基终浓度为10μM的盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ，置于细胞培养箱中处理细胞72h(至12d)。另外，在CIK细胞培养11d时，将培养至对数生长期的SMMC-7721细胞调整细胞密度为2×105个/mL，于96孔板中铺板每孔100μL细胞悬液，培养箱中培养24h。CIK培养至第12天进行CIK杀伤肿瘤细胞实验，弃去SMMC-7721旧的培养液，分别按n(效应细胞)/n(靶细胞)为10:1调整两组CIK细胞至相应数目加入SMMC-7721细胞孔中，每个比例3个复孔，同时设单独靶细胞和单独效应细胞对照组，于细胞培养箱中培养4h。4h后每孔加入10μLCCK-8溶液，细胞培养箱中孵育4h，酶标仪测定OD450值A。按下式计算杀伤率：杀伤率(％)＝[1-(实验组A值-单独效应细胞组A值)/单独靶细胞组A值]×100％。5、对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用裸鼠先经3Gy60Co照射后，随机分成对照组及干预组，每组雌雄各半。每只裸鼠于左肩胛部皮下接种处于对数生长期的SMMC-7721肝癌细胞2×105。次日，对照组裸鼠在接种肿瘤细胞部位处注射5×107个常规诱导培养12d的CIK细胞，干预组裸鼠在接种肿瘤细胞部位处注射5×107个经盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ诱导培养12d的CIK细胞(将培养9d的CIK细胞用含10μM盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的培养基继续培养3d)，体积均为0.25ml，连续注射6d。观察肿瘤生长情况，5周后裸鼠颈椎脱臼处死，剥离肿瘤块并称重，用游标卡尺测量肿瘤的大小，并计算肿瘤的体积。6、统计分析数据以均数±标准差表示，采用SPSS19.0统计软件及Graphpad软件进行方差及显著性分析，检验水准(P)设为0.05。三、实验结果1、盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ对CIK细胞增殖的影响结果可见，低、中、高浓度盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ干预组OD450值显著高于对照组，各组OD450值如下表和图1所示。该结果证明，盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ对CIK细胞的增殖具有促进作用，且呈一定的浓度依赖关系。对照组低浓度干预组中浓度干预组高浓度干预组OD450值0.503±0.0420.654±0.0490.772±0.0410.985±0.0462、盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ对CIK细胞体内外杀瘤活性的影响体外杀伤试验结果可见，10μM盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ干预后的CIK细胞比常规培养的CIK细胞具有更强的杀灭肿瘤细胞活性，干预组杀伤率显著高于对照组；体内杀瘤试验结果可见，10μM盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ干预后的CIK细胞比常规培养的CIK细胞具有更强的体内杀瘤活性，干预组肿瘤块的重量和体积均小于对照组。结果如下表和图2所示。体外杀伤率(％)肿瘤块重量(g)肿瘤块体积(cm3)对照组42.61±5.231.57±0.571.15±0.42干预组70.24±6.410.95±0.510.66±0.34实施例2固体分散体的制备将盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ和PVPK-90按质量比1:5溶于无水乙醇中配置成盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ质量浓度为10mg/mL的溶液，常温磁力搅拌4h(100r/min)，于50℃减压旋转蒸发除去溶剂，真空干燥24h，粉碎过5号筛，置于干燥器内保存备用。设置对比实施例，该实施例中将PVPK本文档来自技高网...
【技术保护点】
盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于制备增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物的用途。
【技术特征摘要】
1.盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于制备增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物的用途。2.一种用于增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物制剂，其特征在于：含有权利要求1所述的盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ。3.根据权利要求2所述的药物制剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨豪伟，张思静，王斌，
申请(专利权)人：南京普氟生物检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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