药用组合物制造技术

一种用于预防或治疗涉及细胞的应激损伤的疾病或症状的药用组合物，该组合物包括 （ａ）具有脂质部分的含脂物质，其结构上与神经酰胺相同或相似， 其缀合于 （ｂ）一种可以如下方式结合所述含脂物质的蛋白，当该缀合物与活细胞接触时，含脂物质激活神经酰胺激活的蛋白磷酸酶，导致细胞代谢的下调，和 （ｃ）一种可以药用的稀释剂或载体。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白-脂质缀合物，由肝素结合蛋白(HBP)和一种神经酰胺类似物组成，以及该缀合物在涉及细胞应激损伤的疾病治疗方面的药用。由对严重感染所致的败血症性休克，例如，在伴有细胞因子级联激活的感染或发炎部位(如腹腔)的革兰氏阴性菌血症在过去50年中的发病率一直在增加，而且，目前是在美国被密切关注的最常见的致死原因。上述增加以及败血症性休克的原因被认为有诸如血管内插管的广泛应用、细胞毒性及免疫抑制药物的大量应用、易患脓毒症的患者的寿命的延长以及由抗生素抗性生物导致的感染的增加。与脓毒症相关的疾病有菌血症(又被称作败血症)其特征为阳性血培养物；以对感染的系统性反应为特征的脓毒症，其表现形式为呼吸急促、心动过速、高温、低温；脓毒性综合征，其中，具有脓毒症的临床症状和改变了的器官灌注迹象，其表现为乳酸含量的异常增高、少尿或急性改变的精神状态；其中具有败血症性综合征的临床证据的早期败血症性休克，以及持续不到1小时的低血压和对常规疗法有反应；以及顽固性败血症性休克，其中，具有脓毒性综合征的临床症状，而且尽管采取常规治疗低血压也持续1小时以上。由革兰氏阴性脓毒症引起的持续的高死亡率和发病率促进了对能够对抗循环细菌LPS的致死作用的治疗剂的深入研究。众多的文献报导了大剂量静脉内服用免疫球蛋白的显著治疗作用。不过，这种治疗需要源于筛选的天然存在大量抗核心LPS抗体的供体血浆或源于大群供体(＞1000)的IgG。被建议用于治疗菌血症的抗LPS的单克隆抗体(例如WO 88/03211)表现出较小作用或无作用，可能是因为其不能抑制由LPS诱发的细胞因子级联反应。另外，有较少的脓毒症患者表现出循环内毒素血症和菌血症，因此，能中和循环LPS的抗体不适用于出现脓毒症的部位。因长期的氧化作用而在高等脊椎动物中产生的一个普遍特征是轻度氧化应激反应。在正常情况下，由抗氧化剂的复杂的砷杂物组成的有效的防卫系统能够通过保持氧自由基与抗氧化剂之间的平衡确保该生物能处理氧自由基。不过，在感染或受伤部位，由吞噬细胞(激活的嗜中性白细胞、巨噬细胞和单核细胞)分泌杀死导致感染的侵入的外源病原体的大量攻击性氧化基(氧自由基)。在这些部位，氧自由基的产生远远超过周围细胞的抗氧化能力，这些细胞因氧自由基引起的坏死或程序死亡而受损或死亡。在感染或损伤部分，引发细胞因子级联反应，该反应又激活嗜中性白细胞。细胞因子级联反应的起始子(在革兰氏阴性细菌中)是在感染或发炎部位所释出的内毒素(又被称作脂多糖，简称LPS)，在这些部位，它能诱导巨噬细胞和其它细胞释出肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介素-1、白介素-6、白介素-8和白小板激活因子(PAF)。在释出TNFα、白介素-1和PAF后，花生四烯酸被代谢生成白细胞三烯、血栓烷A2和前列腺素。白介素-1和白介素-6能激活T-细胞产生干扰素-γ、白介素-2、白介素-4和粒细胞-单核细胞集落刺激因子。大多数上述介体能直接激活嗜中性白细胞。因此，在脱粒期间会发生嗜中性白细胞诱发的损伤，这种损伤是因氧自由基和溶酶体酶的释放而引起的，或发生于感染或发炎部位的聚集作用期间。尽管决定LPS介导的细胞因子级联反应的开始的分子机理尚不完全清楚，但最近有关细胞因子TNFα、vitD3和INF-γ的信号转导的报导对这些现象有所启示。已证实细胞因子vitD3和INF-γ能通过刺激膜结合中性鞘磷脂酶而促进HL-60细胞中神经酰胺的产生，这种酶能将膜鞘磷脂水解成神经酰胺和磷酸胆碱(参见T.Okazaki等，J.Biol.Chem.265，1990，pp.15823-15831)。已证实神经酰胺为第二信使，它反过来又能激活属于X Ser/Thr Pro蛋白激酶家族的神经酰胺激活的蛋白激酶(参见S.Mathias等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88，1991，pp.10009-10013)。还证实神经酰胺能激活神经酰胺激活的Ser/Thr蛋白磷酸酶(参见R.T.Dobrowski和Y.A.Haunun，J.Biol.Chem.267，1992，pp 5048-5051)。已证实上述起始反应能导致在复合体中进一步的信号传输，而且作为较差的理解方式，涉及MAP激酶级联反应的激活，刺激诸如c-Myc和c-Fos的因子的转录，激活NF-KB以及刺激导致PLA2形成花生四烯酸衍生物。在循环中的脂蛋白结合蛋白(LBP)能结合LPS并介导LPS与特异性CD14受体的结合。在最近的由HL-60细胞上的CD14受体引起的LPS信号转导研究中，已证实LPS能刺激其细胞响应，例如，通过刺激神经酰胺激活的蛋白激酶启动细胞因子级联反应。结构分析已证实，LPS的脂质A部分的部分还原末端与神经酰胺的一部分高度相近(参见C.K.Joseph等，J.Biol.Chem.269，1994，pp.17606-17610)。因此，看上去是由LPS通过进入细胞的神经酰胺途径而产生其活性。业已惊奇地发现，LPS在与LBP之外的其它蛋白缀合时能够以不同于激活神经酰胺激活的蛋白激酶的其它方式模拟神经酰胺的第二信使功能。因此，本专利技术涉及一种用于预防或治疗涉及细胞的应激损伤的药用组合物，该组合物包括(a)具有脂质部分的含脂物质，其在结构上与神经酰胺相同或相似，其缀合于(b)一种能以如下方式结合所述含脂物质的蛋白，当该缀合物接触活细胞时，含脂物质激活神经酰胺激活的蛋白磷酸酶，导致细胞代谢的下调，以及(c)一种可以药用的稀释剂或载体。另一方面，本专利技术涉及一种预防或治疗涉及细胞的应激损伤的疾病或症状的方法，该方法包括给需要这种治疗的患者服用有效量的(a)具有脂质部分的含脂物质，其在结构上与神经酰胺相同或相似，其缀合于(b)一种能以如下方式结合所述含脂物质的蛋白，当该缀合物接触活细胞时，含脂物质激活神经酰胺激活的蛋白磷酸酶，导致细胞代谢的下调。再一方面，本专利技术涉及将(a)具有脂质部分的含脂物质，其在结构上与神经酰胺相同或相似，其缀合于(b)一种能以如下方式结合所述含脂物质的蛋白当该缀合物接触活细胞时，含脂物质激活神经酰胺激活的蛋白磷酸酶，导致细胞代谢的下调用于生产用于预防或治疗涉及细胞的应激损伤的疾病或症状的药物的用途。在一种优选实施方案中，本专利技术的组合物中作为与含脂物质缀合的蛋白含有糖基化形式的肝素结合蛋白(HBP)，其表观分子量为28kD(在还原条件下通过SDS-PAGE测定)，这种蛋白是在多形核白细胞的嗜苯胺蓝粒中产生。最近测定了自人和猪的外周嗜中性白细胞中分离的肝素结合蛋白的共价结构(参见H.Flodgaard等，Eur.J.Biochem.197，1991，pp.535-547；J.Pohl等，FEBS Lett.272，1990，p.200ff)。人和猪蛋白与嗜中性弹性蛋白酶具有高度相似性，但由于活性丝氨酸195和组氨酸57的选择突变(chymotrypsin numbering(B.S.Harrtley，“Homologies in SerineProteinases”，Phil.Trans.Roy.Soc.Series.257，1970，p.77ff.)，该蛋白缺乏蛋白酶活性。这种蛋白分别被称为人肝素结合蛋白(hHBP)和猪肝素结合蛋白(pHBP)，因其对肝素具有高亲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：H·弗洛德伽德，P·B·拉斯姆森，
申请(专利权)人：洛伊科泰克有限公司，
类型：发明
国别省市：