高效支原体培养基及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种高效支原体培养基及其制备方法。其配方为：蛋白胨、新鲜牛肉提取纯粉、氯化钠、磷酸二氢钾和蒸馏水组成基础培养基。使用前加入：新生牛血清、新鲜酵母浸液、１０％尿素溶液或１０％精氨酸溶液、０．４％酚红溶液及青霉素。在固体培养基中还加有琼脂。在同样实验条件下，本高效支原体培养基具有生长速度快、检出率高的特点。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，特别是一种能使解脲支原体快速生长、分离的的高敏感性和高特异性的培养基及其制备方法。非淋菌性尿道炎是世界上发病人数最多的性病，仅次于淋病。解脲支原体和人型支原体是引起非淋菌性尿道炎的病原体之一。在性病的预防和治疗工作中，对患者作支原体检测是十分重要的。而对支原体的各种实验室诊断方法中，分离培养仍被作为最可靠的“金标准”。现有技术中的支原体培养基有多种，例如U9B尿素酶颜色试验培养基基础肉汤胰酶消化肉汤(粉剂) 0.75g氯化钠 0.50g磷酸二氢钾 0.02g去离子水 100ml用IN HCL调pH值到5.5。经121℃高压灭菌15分钟，分离备用。完全培养基(pH6.0)灭菌的基础肉汤(pH 5.5) 95ml灭菌的未加热马血清5ml灭菌的10％尿素贮存液0.5ml灭菌的2％L-半胱氨酸(盐酸盐) 0.1ml灭菌的1％酚红溶液 0.1ml青霉素G钾盐10万u/ml 1.0ml再如新鲜牛肉浸液100mlNaCl 0.5gK2HPO40.15g蛋白胨 1.0g尿素0.05g酚红 0.02g临用前加青霉素 1000u/ml无菌的胎牛血清 10ml调整pH至6.0±0.1固体培养基加1.4％琼脂另外还有“A7B鉴别琼脂”等多种不同配方，均可以在科研或临床上用于支原体的分离培养。但现有技术的共同缺点是，支原体在培养基中的生长速度较慢，同时其检出阳性率也不够理想。针对现有技术的缺点，本专利技术的任务是提供一种新的培养基配方，它应具有使支原体生长速度快、分离的敏感性和特异性高的特点。同时，本专利技术还提供出该培养基的制备方法。高效支原体培养基的配方如下首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨 9.0-11.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 9.0-11.0g3、氯化钠4.0-6.0g4、磷酸二氢钾0.4-0.6g5、蒸馏水 1000ml使用前加入下列成分，制成液体培养基6、新生牛血清90-110ml7、新鲜酵母浸液 90-110ml8、10％尿素溶液或10％精氨酸溶液5-15ml9、0.4％酚红溶液4-6ml10、青霉素 500-2000u/ml在固体培养基中还有11、琼脂1.2-1.4％。上述培养基的制备方法为一、制备基础培养基取上述1-4的成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，过滤，高压灭菌后即为基础培养基，备用。二、制备液体培养基使用前加入上述6-10的成份，用HCL调pH为6.0，分装备用。三、制备固体培养基取上述基础培养基，加入琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，摇匀，倒入灭菌平皿中，备用。本专利技术所提供的培养基同现有技术中的几种培养基的比较结果表明，在同样实验条件下，本高效支原体培养基具有生长速度快、检出率高的特点。比较结果见表1、表2表1 解尿支原体培养基比较培养基 检查例数 阳性数 生 长 速 度(％)≤24hr(％) ＞24hr(％) ≥48hr(％)本专利技术 91 29(31.9) 25(86.2)4(13.8) 0(0)现技术A 91 18(19.8) 4(22.2) 8(44.4) 6(33.4)本专利技术 54 18(33.3) 17(94.4)1(5.6) 0(0)现技术B 54 3(5.6)0(0)0(0)3(94.4)本专利技术 144 53(36.8) 42(79.2)11(20.8)0(0)现技术C 144 38(26.4) 14(36.9)17(44.7)7(18.4)表2 两种人型支原体培养基比较培养基 检查例数 阳性数 生 长 速 度(％)≤24hr(％) ＞24hr(％) ≥48hr(％)本专利技术52 4(7.7)0(0)4(7.7) 0(0)现技术B 52 0(0) 0(0)0(0)0(0)本专利技术144 21(14.6) 1(4.8) 12(57.1)8(38.1)现技术C 144 19(13.2) 0(0)8(42.1) 11(57.9)现结合实施例作进一步说明。实施例1高效支原体培养基的配方及制备方法如下一、首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨 10.0g2、新鲜牛肉提取纯粉10.0g3、氯化钠 5.0g4、磷酸二氢钾 0.5g5、蒸馏水 1000ml取上述成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，用滤纸过滤，置高压灭菌器内，经15磅20分钟灭菌后备用。二、制备液体培养基使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂6、新生牛血清 100ml7、新鲜酵母浸液 100ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体)5-15ml或10％精氨酸溶液(检测人型支原体)5-15ml9、0.4％酚红溶液 5ml10、青霉素500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基在液体基础培养基内加入11、琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。实施例2配制方法与上例基本相同，但配方比例如下一、首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨9.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 9.0g3、氯化钠4.0g4、磷酸二氢钾0.4g5、蒸馏水 1000ml取1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，用滤纸过滤，置高压灭菌内，经15磅20分钟灭菌后备用。二、液体培养基使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂6、新生牛血清 90ml7、新鲜酵母浸液 90ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体) 5-15ml或10％精氨酸溶液 5-15ml9、0.4％酚红溶液 4ml10、青霉素500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基在液体基础培养基内加入11、琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。实施例3、与上两例基本相同，但配方比例如下一、首先用下列成分制成基础培养基1、蛋白胨11.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 11.0g3、氯化钠 6.0g4、磷酸二氢钾 0.6g5、蒸馏水 1000ml取上述1-4成份混合、搅拌，使之完全溶入蒸馏水中，用滤纸过滤，置高压灭菌内，经15磅20分钟灭均后备用。二、制备液体培养基使用前，取基础培养基加入下列无菌制剂6、新生牛血清 110ml7、新鲜酵母浸液 110ml8、10％尿素溶液(检测解脲支原体) 5-15ml或10％精氨酸溶液(检测人型支原体) 5-15ml9、0.4％酚红溶液6ml10、青霉素 500-2000u/ml用HCL调pH为6.0，灭菌试管分装备用。三、制备固体培养基在液体基础培养基内加入11、琼脂 1.2-1.4％高压灭菌后，冷却至50℃左右，以无菌手续逐一加入6-10的成份，调pH值到6.0，摇匀，倒入灭菌平皿中，凝固后置冰箱中备用。权利要求1.一种高效支原体培养基，其特征是配方如下基础培养基1、蛋白胨9.0-11.0g2、新鲜牛肉提取纯粉 9.0-11.0g3、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效支原体培养基，其特征是配方如下：基础培养基：１、蛋白胨 ９．０－１１．０ｇ２、新鲜牛肉提取纯粉 ９．０－１１．０ｇ３、氯化钠 ４．０－６．０ｇ４、磷酸二氢钾 ０．４－０．６ｇ５、蒸馏水 １０００ｍｌ液体培 养基内还加有：６、新生牛血清 ９０－１１０ｍｌ７、新鲜酵母浸液 ９０－１１０ｍｌ８、１０％尿素溶液或１０％精氨酸溶液 ５－１５ｍｌ９、０．４％酚红溶液 ４－６ｍｌ１０、青霉素 ５００－２０００ｕ／ｍｌ固体培养基内还加 有：１１、琼脂 １．２－１．４％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王荷英，
申请(专利权)人：中国医学科学院皮肤病研究所，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]