用于核酸药物线性DNA含量的检测方法技术

本发明专利技术提出了用于核酸药物线性DNA含量的检测方法，该方法包括：将待测核酸药物进行液相色谱分析，基于液相色谱分析的结果，确定所述待测核酸药物线性DNA的含量。利用根据本发明专利技术实施例的用于核酸药物线性DNA含量的检测方法，可快速、准确、灵敏地对核酸药物中线性质粒DNA进行分离和定量分析，可作为核酸药物(包括中间过程样品、原液、半成品、成品)的常规质控手段，可以为核酸药物的生产提供可靠的质控证据，为重组生物制品的研发和安全生产提供重要支持，进而保证临床用药的安全。

A method for the determination of linear DNA content of nucleic acid drugs

The invention provides a detection method for the linear DNA content of nucleic acid drugs. The method comprises the following steps: liquid chromatographic analysis of the nucleic acid drugs to be tested, and determination of the content of the linear DNA of the nucleic acid drug to be determined based on the results of liquid chromatography analysis. According to the method for detecting nucleic acid drug linear DNA content of the embodiment of the invention can be fast, accurate and sensitive method for separation and quantitative analysis of nucleic acid drugs in linear plasmid DNA, can be used as nucleic acid drugs (including intermediate process, sample solution, semi-finished products and finished products) of the conventional control method, can provide reliable evidence for quality control the nucleic acid drug production, provide important support for the development and safe production of recombinant biological products, and ensure the safety of clinical medication.

【技术实现步骤摘要】
用于核酸药物线性DNA含量的检测方法
本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及用于核酸药物线性DNA含量的检测方法。
技术介绍
细胞内双螺旋DNA分子很长，通常是细胞长度的1000倍至几万倍，所以细胞内的DNA必须要经过折叠和包装。DNA双螺旋轴可进一步弯曲、缠绕成DNA的三级结构--拓扑结构。最常见的三级结构是DNA的超螺旋DNA(SupercoiledCircularDNA，简称SC)、线性DNA(LinearDNA，简称LDNA)和开环DNA(OpenCircularDNA，简称OC)。在细菌细胞内，共价闭环质粒(cccDNA)以超螺旋形式存在。在提取质粒过程中，除了超螺旋DNA外，还会产生其它形式的质粒DNA。如果质粒DNA两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，形成松弛型的环状分子，称开环DNA；如果质粒DNA的两条链在同一处断裂，则形成线状DNA。
技术实现思路
本专利技术是基于专利技术人对以下问题和事实的发现而做出的：专利技术人发现，以质粒为载体的核酸药物，其中，线性DNA的含量是影响核酸药物活性的关键因素，线性DNA的含量越高，核酸药物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于核酸药物线性DNA含量的检测方法，其特征在于，包括：将待测核酸药物进行液相色谱分析，基于液相色谱分析的结果，确定所述待测核酸药物线性DNA的含量，其中，所述液相色谱分析的条件是：流动相A为25mM硼酸，NaOH或KOH溶液调pH9.0,流动相B为25mM硼酸含1M NaCl或KCl，NaOH或KOH溶液调pH9.0，上样量为5μl～10μl，流速为0.5～1.0ml/min，柱温25～40℃，检测波长260nm，采集时间10min，高斜率梯度洗脱，梯度斜率为5％～15％，梯度洗脱程序：

【技术特征摘要】
1.一种用于核酸药物线性DNA含量的检测方法，其特征在于，包括：将待测核酸药物进行液相色谱分析，基于液相色谱分析的结果，确定所述待测核酸药物线性DNA的含量，其中，所述液相色谱分析的条件是：流动相A为25mM硼酸，NaOH或KOH溶液调pH9.0,流动相B为25mM硼酸含1MNaCl或KCl，NaOH或KOH溶液调pH9.0，上样量为5μl～10μl，流速为0.5～1.0ml/min，柱温25～40℃，检测波长260nm，采集时间10min，高斜率梯度洗脱，梯度斜率为5％～15％，梯度洗脱程序：其中，所述线性DNA的含量是通过如下方式确定的：确定线性DNA含量在总DNA含量中的比值，所述比值是通过液相色谱分析所得到线性DNA对应的峰面积与总峰面积的比值确定的；将待测核酸药物的总DNA含量与所述比值相乘，确定所述线性DNA的含量，其中，所述总DNA含量是通过对待测核酸药物进行紫外分光光度检测确定的。2.一种用于核酸药物线性DNA含量的检测方法，其特征在于，包括：将待测核酸药物进行液相色谱分析，基于液相色谱分析的结果，确定所述待测核酸药物线性DNA的含量。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述液相色谱分析的流动相A为25mM硼酸，流动相B为25mM硼酸含1MNaCl或KCl。4.根据权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：周昌茂，王学海，许勇，马铮，黄璐，马梵辛，肖强，刘哲，
申请(专利权)人：湖北生物医药产业技术研究院有限公司，武汉珂美立德生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42