治疗HBV的融合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术涉及含ＨＢＶ抗原的组合物，其可用于治疗或预防ＨＢＶ感染。正如在此所描述的，该组合物的成分可以变化，但其中包含了应激蛋白或其部分（如片段）或衍生物，以及ＨＢＶ抗原。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术的领域是乙肝病毒的免疫疗法。
技术介绍
乙肝病毒(HBV)是一种感染人类的非细胞病变的DNA病毒，它可导致两种临床后果。在大多数成年人的临床感染病例(90-95％)中，病毒在几个星期或几个月后被清除，病人发展出一种终生的抗再次感染的免疫力。然而在其它病例中，病毒并没从组织中消除，病人仍处于慢性感染之中。慢性感染的后遗症相当严重，这些个体的肝组织非常可能发展成瘢痕化(肝硬化)并最终可能发展为肝细胞癌。针对HBV已有预防性疫苗，许多发达国家已经进行了儿童接种计划以降低感染的总风险。不幸的是，因为由慢性HBV感染引起的发病和死亡时间跨度可达几十年，预防接种的影响要到将来才能实现。事实上，成年人HBV感染的年发生率在今后的八年中预计减少5％以下。到2008年，每年仅在美国就将新增150,000例感染，而在欧洲和日本预计有更多的病例。这些个体将构成一个巨大的病毒库，其中每年将出现多达20,000到40,000例慢性感染。可以清楚地看到，尽管已有疫苗可用，慢性HBV感染在今后许多年仍将继续是一个严重的健康难题。现有的慢性HBV治疗方法包括α-干扰素(IFN-α)和拉米夫定(lamivudine)。评判这些疗法可根据它们减少病毒携带量以及引起血清转变或减少HBe抗原的能力，HBe抗原是HBV复制和高滴度病毒血症的标志。α-干扰素可以消除HBe，但是只在大约三分之一的病人中有效，这些病人所带病毒量较少。这种治疗方法价格昂贵，并有显著的令人讨厌的副作用。拉米夫定是一种小分子抗病毒剂，口服时具有良好的耐药性。这种化合物可以有效减少病人的病毒携带量，但是只有相对极少的病人能够减少HBe，而且治疗中断后病毒携带量经常会增加。另一方面，连续的治疗可能导致筛选出抗拉米夫定的突变株。使用α-干扰素和拉米夫定的组合疗法并没显示出增强的疗效。显然，一种成功的治疗HBV感染的免疫疗法非常值得期待。专利技术概述本专利技术的特征是组合物，这些组合物中包含应激蛋白或其部分，以及HBV抗原。这些组合物将在下面进行详细讨论。在此我们应注意的是，它们的成分可以有广泛的来源，它们的长度和成分可以变化。例如，该应激蛋白可以是由任何哺乳动物(如人或非人的灵长类动物)或任何其它能够表达应激蛋白的生物(如细菌或分枝杆菌)所天然表达的一种；该应激蛋白和/或HBV抗原可以是全长的、截短的或通过添加一个或多个氨基酸残基而延长的；此外，该应激蛋白或HBV抗原的组成可以变化(例如，应激蛋白或其部分，以及HBV抗原可以含有一个或多个氨基酸替代)。然而，任何变化必须仍然能够导致产生一种组合物，它在哺乳动物中可以诱导或增强针对HBV的免疫应答。在优选情况下，免疫应答足够强，从而使得HBV感染的病人在感染的症状中能够经历增强的过程(主动或被动的)。因此，抗原既包括全长和天然存在的抗原，也包括它的片段和其它变体，当给个体施用后(例如采用在此描述的方法)，可以引发针对该片段或变体中存在的一个或多个抗原决定簇的免疫应答。同样地，除了全长的或天然存在的应激蛋白外，本专利技术的组合物也可以含有具有免疫刺激性的应激蛋白的片段(即可以促进针对抗原的免疫应答的片段)。应激蛋白或其片段可以促进免疫应答，此时免疫应答强于或总之优于HBV抗原单独给药时通常产生的免疫应答。免疫应答可以是体液介导的也可以是细胞介导的反应。例如，抗原片段可以含有一个或多个HLA I型肽抗原，如在此所述。细胞介导的免疫应答包括免疫系统的抗原特异性细胞，如细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，可能还有辅助性T淋巴细胞(Th)，以及天生的免疫系统的细胞，如单核细胞、巨嗜细胞、树突状细胞、自然杀伤性细胞和γδT细胞。本领域一名普通专业技术人员能够充分检测或评估免疫应答，其通过例如细胞毒性T淋巴细胞的诱导(参见下面的实施例)、细胞增殖反应、细胞因子的诱导或这些事件的组合是显而易见的。在特定的实施方案中，HBV抗原可以是HBV核心抗原或其片段或衍生物。HBV抗原的衍生物包括HBV的变体，比如那些含有一个或多个氨基酸替代的变体(例如保守的氨基酸替代)。例如，HBV抗原的变体可以含有1-2、2-5、5-10、10-25或更多个替代的氨基酸残基。或者，替代或其它的突变，比如缺失或截短，可以占全长HBV抗原序列的1-2％、2-5％、5-10％或10-25％。如同组合物中的抗原部分，应激蛋白的变体也可以含有一个或多个氨基酸替代(例如保守的氨基酸替代)。例如，应激蛋白的变体可以含有1-2、2-5、5-10、10-25或更多个保守的氨基酸替代。这里的替代或其它突变，比如缺失或截短，仍然可以占全长应激蛋白序列的1-2％、2-5％、5-10％或10-25％。在本专利技术的范畴内，应激蛋白和HBV抗原也有多种组合方式。例如，本专利技术的组合物包括了那些组合，其中全长的HBV抗原与全长的应激蛋白相结合；由HBV抗原的片段或其它变体组成的抗原与全长的应激蛋白相结合；全长的HBV抗原与应激蛋白的片段或其它变体相结合；以及HBV抗原的片段或其它变体与应激蛋白的片段或其他变体相结合。当然，如在此所述，可以存在一个以上的每种这些成分(即多于一个的HBV抗原和多于一个的应激蛋白)，并且每一个成分可以以全长的蛋白或其具有免疫活性的片段或变体的形式存在。此外，在此所述的任何排列方式中，HBV抗原和应激蛋白可以以任何形式相结合。例如，应激蛋白和HBV抗原可以以融合多肽的形式存在(其中在融合的可读框进行翻译的过程中应激蛋白和HBV抗原是共价连接的。或者，应激蛋白和HBV抗原也可以在分别翻译或合成后通过化学结合作用相连接。这些组分也可以是非共价结合的(例如以混合物或更有序的组成方式)。术语“多肽”和“蛋白”在此可以互换使用用于描述一条氨基酸残基组成的链，除非从上下文中可明显看出是为了表明截然不同的意义。应激蛋白将在后面进一步讨论，在此我们应注意到应激蛋白可以是热休克蛋白(Hsp)。此外，热休克蛋白可以是分枝杆菌的热休克蛋白，如Hsp65(例如牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)的Hsp65)，或来自任何物种的热休克蛋白家族的任何成员。本专利技术的组合物可以以多种方式配制给个体施用，并可任选添加佐剂。在本专利技术组合物中可随意添加的成分包括在药物上可接受的稀释剂、赋形剂和载体。本专利技术的特征还包括通过将本专利技术的组合物施用给被HBV感染的个体(例如哺乳动物，比如人)以治疗该个体的HBV感染的方法，以及在个体(例如哺乳动物，比如人)感染HBV以前将本专利技术的组合物施用给个体以防止HBV对该个体的感染(或减少其可能性)的方法。该组合物的成分不必以多肽的形式直接施用给个体。相反，为应激蛋白、HBV抗原或含有一个或多个每种组分的融合蛋白编码的核酸也可以施用，蛋白、抗原或融合蛋白将在个体中体内表达。该核酸可以是病毒载体的一部分，例如病毒载体基因组的一部分，或包埋于例如脂质体中。或者，核酸还可以以裸核酸的形式递送，例如由可以在真核或哺乳动物细胞中可操作的调控序列所驱动的质粒DNA。给药核酸分子的方法在本领域内众所周知。本专利技术进一步包括了本专利技术组合物(如含有HBV抗原的融合蛋白、编码它们的核酸分子以及包含它们的药物组合物)在生产用于按照在此描述的方法治疗HBV感染的药物中的应用。本专利技术的其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的融合蛋白，其含有应激蛋白或其部分以及乙肝病毒（ＨＢＶ）核心抗原，其中所述融合蛋白当施用给个体时，诱导或增强针对ＨＢＶ核心抗原的免疫应答。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：李米兹恩，刘宏伟，马文西格尔，
申请(专利权)人：斯特雷斯根生物技术公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]