靶向人凋亡抑制蛋白家族成员存活蛋白mRNA的反义寡核苷酸，含有它们的药物组合及其用于治疗癌症的用途制造技术

本发明专利技术涉及靶向人凋亡抑制蛋白家族成员存活蛋白ｍＲＮＡ的反义寡核苷酸序列，含有它们的药物组合物及其用于治疗癌症的用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及靶向人凋亡抑制蛋白家族成员存活蛋白(Survivin)mRNA的反义脱氧寡核苷酸，含它们的药物组合及其用于治疗癌症的用途。
技术介绍
癌症由至少两种癌基因经多阶段变化而引起，传统的基于细胞毒化学治疗具有选择性差、毒副作用强等缺点，目前人们希望寻找特异性强、尤其是干扰与肿瘤行为密切相关的基因表达的药物。反义药物是以Watson-Crick碱基配对原理与靶mRNA结合，干扰其翻译的脱氧寡核苷酸类药物。它能特异性的抑制肿瘤相关基因，在癌症治疗方面有广阔的应用前景。凋亡是基因控制的细胞死亡过程，凋亡减少与肿瘤的发生、发展及抗药性密切相关。凋亡由多种因素严密控制，包括Fas/TNF受体，bcl-2家族成员，以及凋亡抑制蛋白IAP(Inhibitor of ApoptosisProtein)。现已发现了六种人类IAP成员(Deveraux QL，Reed JC.，IAP家族蛋白质-凋亡的抑制物，Genes Dev.1999；13(3)239-252)，其中大部分能够直接抑制凋亡执行过程中的中心环节天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)。存活蛋白是近来发现的人IAP成员，它在最终分化的成人组织中不表达，而在一系列人类肿瘤中呈高表达。有实验表明存活蛋白强烈抑制由caspase-3或-7过度表达诱发的凋亡(Tamm I，Wang Y，Sausville E，et al.IAP家族蛋白质存活蛋白抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性以及由Fas(CD95)、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶和抗癌症药物诱导的凋亡，Cancer Res.1998；58(23)5315-20)。存活蛋白表达对于细胞存活或癌症中的化学药物抗性很重要。Kato J.等的研究表明，存活蛋白的高表达能够对抗抗癌药引起的凋亡(Kato J，Kuwabara J，Mitani M，等人，在食管癌中存活蛋白的表达与预后和对化疗的反应之相关性，Int.J.Cancer.2001；95(2)92-5)。存活蛋白在一些肿瘤细胞中的特异表达及其重要功能，使它成为一个肿瘤治疗的新的靶点。因此，需要寻找靶向存活蛋白的反义核苷酸药物是积极治疗肿瘤的手段之一。本专利技术者经广泛深入研究，通过固相合成法(全自动DNA合成仪)合成了一系列硫代寡核苷酸并进行了筛选。现已发现一组针对癌症中存活蛋白mRNA高表达的肿瘤的生长有抑制作用，特别是如肺腺癌A549细胞株和胃癌BGC823细胞株中的高表达有良好的抑制作用的反义硫代寡核苷酸。专利技术概述本专利技术第一方面涉及可以反向互补性结合到人凋亡抑制蛋白家族成员存活蛋白mRNA的反义脱氧寡核苷酸，其选自如下所示的SEQID NO1-10，或其功能等同物。SEQ ID NO15’-GGTCCCGCGATTCAAATCTG-3’，简称TXM001；SEQ ID NO25’-ACCCATGCCGCCGCCGCCAC-3’，简称TXM002；SEQ ID NO35’-GGGCCAGTTCTTGAATGTAG-3’，简称TXM003；SEQ ID NO45’-CAGTGGATGAAGCCAGCCTC-3’，简称TXM004；SEQ ID NO55’-CTTTTTATGTTCCTCTATGG-3’，简称TXM005；SEQ ID NO65’-GTTTCAAAAATTCACCAAGG-3’，简称TXM006；SEQ ID NO75’-AGAGGCCTCAATCCATGGCA-3’，简称TXM009；SEQ ID NO85’-CTGTGACAGCCTCAACAACA-3’，简称TXM012；SEQ ID NO95’-AACAATTCAAACAAAATAAG-3’，简称TXM014；和SEQ ID NO105’-GTATCTGCCAGACGCTTCCT-3’，简称TXM016。本专利技术再一方面涉及选自SEQ ID NO1-10的反义寡核苷酸序列用于制备用于治疗癌症的药物的用途。本专利技术再一方面涉及的是药物组合物，其中含有治疗有效量的至少一种选自SEQ ID NO1-10的反义寡核苷酸序列，或其混合物，以及药学可接受的载体，佐剂或赋型剂。本专利技术再一方面涉及一种利用至少一种选自SEQ ID NO1-10的反义寡核苷酸序列用于治疗癌症的方法。附图说明图1。显示来自不同肿瘤细胞中存活蛋白mRNA表达的检测结果。高表存活蛋白mRNA的肿瘤细胞包括KCC853肾癌细胞；BGC823胃腺癌细胞；A549肺腺癌细胞；SGC7901胃腺癌细胞；GLC-82肺癌细胞；HCT结肠癌细胞；MKN-45胃腺癌细胞；HEPG-2肝癌细胞。而在KB口腔癌细胞、HELF人胚肺成纤维细胞、小鼠黑色素瘤B1 6细胞中未检测出表达的存活蛋白mRNA. 图2。显示本专利技术所述TXM004反义硫代脱氧寡核苷酸对肺腺癌A549细胞抑制的剂量效应关系。图3。显示RT-PCR方法检测TXM004反义硫代脱氧寡核苷酸对肺腺癌A549细胞中存活蛋白mRNA表达的抑制。图4。显示RT-PCR方法检测TXM004反义硫代脱氧寡核苷酸对肺腺癌A549细胞中存活蛋白mRNA表达抑制的剂量效应关系。显示TXM004在100、20、400nM下，抑制存活蛋白mRNA的表达分别为51％、84％和94％。图5。显示TXM004反义硫代脱氧寡核苷酸对肺腺癌A549细胞中存活蛋白水平的下调作用。图6。显示TXM004反义硫代脱氧寡核苷酸诱导肺腺癌A549细胞的凋亡。图7。显示TXM004反义硫代脱氧寡核苷酸与常规化疗药物的协同作用。专利技术详述根据已知的存活蛋白mRNA序列(SEQ ID NO21.NM 001168，人-杆状病毒IAP重复，其含有5(存活蛋白)(BIRC5)，mRNA.1619个碱基)，本专利技术人针对存活蛋白mRNA的下列区域靶点而设计反义硫代寡核苷酸，所述靶点包括1)存活蛋白mRNA的5’-非翻译端，例如5’-CAGAUUUGAAUCGCGGGACC-3’(SEQ ID NO11)2)翻译起始密码子区域，例如5’-GUGGCGGCGGCGGCAUGGGU-3’(SEQ ID NO12)3)蛋白编码区，例如5’-CUACAUUCAAGAACUGGCCC-3’(SEQ ID NO13)5’-GAGGCUGGCUUCAUCCACUG-3’(SEQ ID NO14)5’-CCAUAGAGGAACAUAAAAAG-3’(SEQ ID NO15)5’-CCUUGGUGAAUUUUUGAAAC-3’(SEQ ID NO16)4)终止密码子区域，例如5’-UGCCAUGGAUUGAGGCCUCU-3’(SEQ ID NO17)5)3’-非翻译端，例如5’-UGUUGUUGAGGCUGUCACAG-3’(SEQ ID NO18)5’-CUUAUUUUGUUUGAAUUGUU-3’(SEQ ID NO19)5’-AGGAAGCGUCUGGCAGAUAC-3’(SEQ ID NO20)经大量研究发现，针对上述靶序列之本专利技术所要求保护的反义脱氧寡核苷酸序列SEQ ID NO1-10，分别对涉及存活蛋白mRNA高表达的癌症具有良好的抑制作用。本专利技术中所述具有存活蛋白mRNA高表达的癌症包括但不限于肺癌、胃癌、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可反向互补性结合到人凋亡抑制蛋白家族成员存活蛋白ｍＲＮＡ的反义脱氧寡核苷酸，其选自：ＳＥＱＩＤＮＯ：１、２、３、４、５、６、７、８、９、或１０，或其功能等同物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：袁守军，马静，田增月，徐兰平，韩昌明，丁林茂，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]