细胞的活化及扩增制造技术

本发明专利技术一般涉及活化及扩增细胞的方法，更具体而言，涉及活化和／或刺激细胞使其最大限度扩增以获得极高密度的新方法。在各种实施方案中，细胞在短时间内被活化及扩增到很高密度。在某些实施方案中，细胞在短时间内被活化及扩增到很高细胞数。本发明专利技术进一步提供了利用此处方法活化并扩增的细胞组合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
专利
本专利技术一般涉及刺激并活化细胞的方法，更具体而言，涉及活化并扩增细胞到很高密度以及扩增细胞到很高数量的方法。本专利技术也涉及细胞组合物，包括高浓度以及扩增到高数量的经活化及扩增的T细胞。相关技术描述T细胞抗原受体(TCR)是一种多亚基免疫识别受体，和CD3复合物结合，并与抗原提呈细胞(APCs)表面的主要组织相容性复合体(MHC)I类和II类蛋白质提呈的肽相结合。TCR与APC上抗原性肽的结合，在T细胞和APC触点的免疫突触处发生，是T细胞活化中的重要事件。为维持T细胞活化，T淋巴细胞一般需要第二共刺激信号。共刺激一般为T辅助细胞所必需，以产生足以诱导克隆扩增的细胞因子水平。Bretscher，Immunol.Today 1374，1992；June等人，Immunol.Today15321，1994。活化的抗原提呈细胞(APC)上B7家族配基(CD80(B7.1)或CD86(B7.2))的成员与T细胞上CD28结合时，发生主要共刺激信号。刺激某些T细胞亚群扩增的方法，有可能产生多种用于免疫治疗的T细胞组合物。通过有效刺激，增加T细胞的反应性和数量，有助于成功的免疫治疗。现有的扩增人T细胞的各种技术主要有赖于使用辅助细胞和/或外源生长因子，例如白细胞介素-2(IL-2)。IL-2已经与抗CD3抗体结合用于刺激T细胞增殖，主要扩增T细胞的CD8+亚群。据认为，理想的T细胞活化、扩增以及T细胞再输注后的长期存活需要这两种APC信号。由于APC相对短命，对于长期培养系统而言，要求以MHC相合的APC作为辅助细胞是一个重要难题。为此，长期培养系统必须连续不断地由来源获得和补充APC。为治疗辅助细胞受影响的免疫缺陷，必须重复供给辅助细胞，这很困难。此外，治疗病毒性感染时，如果辅助细胞携带病毒，长期培养期间该细胞则可能污染整个T细胞群体。缺少外源生长因子或辅助细胞时，例如通过使细胞接触附着于固相表面、例如小球上的CD3配基和CD23配基，可以将共刺激信号传递给T细胞群体。参见C.June等人(美国专利5,358,358)；C.June等人WO 99/953823。虽然这些方法能够获得可用于治疗的T细胞群体，但在提高T细胞制品的强壮和容易方面尚不甚理想。此外，本领域现有方法尚未关注T细胞的短期扩增、或获得更强壮的T细胞群体及其益处。另外，扩增T细胞的应用局限于只有少数病状。理论上，为使体内效率最高，离体或体内产生的活化的T细胞群体应当处于能够最大限度安排针对癌症、感染性疾病或其它病态的免疫应答的状态。本专利技术提供了产生数量增多的更高度活化、更纯的T细胞的方法，该T细胞具有表面受体及细胞因子生成之特征，较之其它扩增方法显得更为健康、天然。此外，本专利技术提供任意靶细胞的细胞群体组合物，包括T细胞群体和产生该群体的参数，也提供其它相关的优点。专利技术简述本专利技术提供了通过细胞表面部分连接来活化及扩增T细胞群体的方法，其包含a)提供其中至少一部分包含T细胞的细胞群体；b)该细胞群体接触一种表面，其中所述表面上附着有一种或多种与至少一部分T细胞的细胞表面部分相连并刺激该T细胞的因子(agent)，并且其中该T细胞在少于约两周后扩增到浓度约6×106-约90×106细胞/ml。在一个实施方案中，该T细胞来源于单一个体，并且该T细胞在少于约两周后从开始细胞数约100-500×106扩增到总计约100-500×109细胞。权利要求1的方法，其中所述T细胞在少于约两周后达到浓度约50×106细胞/ml。在一个实施方案中，该T细胞在约第7-12天达到浓度约40-60×106细胞/ml。在另一实施方案中，该T细胞在约第5-12天中约24小时扩增至少约1.5倍。在另一实施方案中，将该T细胞群体接种到容纳约0.1-约200升体积的培养容器中。在相关实施方案中，该培养容器包含至少一个进口滤器和一个出口滤器。在另一实施方案中，该T细胞群体按起始浓度约0.2×106-5×106细胞/ml进行接种。在一个实施方案中，本专利技术的细胞扩增发生于密闭系统中。在一个实施方案中，该密闭系统包含一种含有至少一个进口滤器、一个出口滤器以及一个取样口的容器。在另一实施方案中，培养基通过该密闭系统进行灌注。在某些实施方案中，灌注在约第4-8天按约0.5ml/分钟-约3ml/分钟的速度开始。典型的培养基包括但不限于RPMI1640、AIM-V、DMEM、MEM、α-MEM、F-12、X-Vivo 15和X-Vivo20。在另一实施方案中，该培养基包含细胞因子，例如IL-2、IFN-γ、IL-4、GM-CSF、IL-10、IL-12、TGFR和TNF-α、或维生素。在另一实施方案中，该培养基包含表面活化剂、抗体、人血浆蛋白制品(plasmanate)或还原剂(例如N-乙酰半胱氨酸、2-巯基乙醇)。在另一实施方案中，本专利技术的密闭系统包含位于可转动平台上的生物反应器培养容器。在某些实施方案中，该转动平台的速度和角度可变。在另一实施方案中，所述平台在约第3天按约5-15转/分钟开始转动。在另一实施方案中，该平台进一步包含可变的加热元件、磁体和气体歧管。在某些实施方案中，该密闭系统进一步包含注射器泵和控制器，用于进出该密闭系统的无菌传递。在另一实施方案中，本专利技术方法提供了一种表面，其上附着有与T细胞的第一T细胞表面部分相连的第一因子，相同或第二表面，其上附着有与所述T细胞的第二部分相连的第二因子，其中所述第一与第二因子的连接可诱导该T细胞增殖。在相关实施方案中，该相同或第三表面上附着有与所述T细胞的第三部分相连的第三因子，其中所述第一、第二及第三因子的连接可诱导该T细胞增殖。在某些实施方案中，至少一种因子是抗体或抗体片段。在其它实施方案中，第一因子是抗体或其片段，第二因子是抗体或其片段。在另一实施方案中，第一和第二因子是不同的抗体。在某些实施方案中，第一因子是抗CD3抗体、抗CD2抗体、或抗CD3、抗CD2抗体的抗体片段，第二因子是抗CD28抗体或其抗体片段。在另一实施方案中，第一因子是抗CD3抗体，第二因子是抗CD28抗体。在另外的实施方案中，抗CD3抗体和抗CD28抗体按约1∶1-1∶100的比例存在。在某些实施方案中，第一因子是抗CD3抗体，第二因子是CD28的配基，例如天然配基B7。在另外的实施方案中，第三因子是抗体或其抗体片段。在另一实施方案中，第三因子是抗4-1 BB抗体或其抗体片段。本专利技术还提供根据此处所述方法产生的T细胞群体。本专利技术一方面提供一种装置，其包含一种含有至少一个出口滤器和一个进口滤器的密闭培养容器；所述密闭培养容器内部含有大量培养基，其中包含密度为约6×106-约90×106细胞/ml的扩增的T细胞。在某些实施方案中，该扩增的T细胞密度约10-50×106细胞/ml。在另外的实施方案中，该装置的培养基进一步包含一种表面，其中所述表面上附着有与T细胞的第一细胞表面部分相连的第一因子，相同或第二表面上附着有与所述T细胞的第二部分相连的第二因子。本专利技术一方面提供了组合物，其中包含总计100×109的来源于单一个体的活化及扩增的T细胞。本专利技术另一方面提供了通过细胞表面部分连接来扩增细胞群体的方法，其包含提供细胞群体；该细胞群体接触一种表面，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过细胞表面部分连接来活化及扩增Ｔ细胞群的方法，其包含：ａ．提供其中至少一部分包含Ｔ细胞的细胞群体；ｂ．将该细胞群体接触一种表面，其中所述表面上附着有一种或多种与至少一部分Ｔ细胞的细胞表面部分相连并刺激该Ｔ细胞的因子，并且其 中该Ｔ细胞在少于约两周扩增到浓度约６×１０↑［６］－约９０×１０↑［６］细胞／ｍｌ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：R贝伦森，C劳，M博奈哈迪，N桑德，S克雷格，AR哈德威克，D卡拉玛兹，D麦克米伦，HS钱那，
申请(专利权)人：埃克斯西特治疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]