用于诱发抗过敏原保护性免疫应答的重组核酸制造技术

本发明专利技术提供了一种用于诱发抗过敏原保护性免疫应答的重组核酸。该重组核酸编码一个过敏原和一个介导过敏原转运进入内质网的信号肽，并且还优选编码一个把基因靶向至核内体或溶酶体的第二信号肽。该重组核酸，在向患者施用时，能诱发Ｔｈ１型免疫并且抑制ＩｇＥ产生，因此可以用于预防和治疗过敏反应。因此在许多方面，本发明专利技术还提供一种包含该重组核酸的疫苗和免疫原组合物。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于诱发抗过敏原保护性免疫应答的重组核酸及包含该核酸的疫苗。
技术介绍
近年来过敏疾病发病率在世界范围内急剧增加，尤其在发达国家，如美国、西欧、澳大利亚、日本和新加坡，这使得旨在抑制或改变遗传性过敏症的个体由于暴露于过敏原而诱发的免疫应答的新的治疗和预防药剂及方法的需求日益显现(1-8)。简而言之，免疫应答的活化需要激活T细胞，要么是细胞毒性T(杀伤)细胞，要么是T辅助细胞。细胞毒性T细胞(一般称作CD8+细胞)负责基于细胞的免疫。抗原表位在抗原提呈细胞表面MHC I类分子复合物中的提呈刺激了这些细胞。然后抗原活化的细胞毒性T细胞诱导出现特异性抗原表位的被感染细胞摄入。进入MHC I类提呈途径的抗原通常来自于宿主细胞胞质中增殖的病原体，如病毒。T辅助细胞(一般称作CD4+细胞)涉及体液免疫。T辅助细胞通过抗原表位在MHC II类分子复合物中的提呈而活化，并且活化的T辅助细胞产生能刺激抗原特异性抗体产生的细胞因子。源自胞外病原体的抗原，如来自细菌的，或在巨噬细胞中合成的，典型进入MHC II类提呈。MHC II类相关的恒定链(Ii)伴随新合成的MHC II类分子从内质网进入核内体途径，而且与溶酶体相关膜蛋白(LAMP-1)相关联的信号用于把抗原靶向到核内体系统以增强MHC II类提呈(17和18)。效应器T辅助细胞可以被分成两个亚群，分泌IFN-？的Th1亚群，和分泌IL-4、IL-5以及IL-13的Th2亚群。源自巨噬细胞胞囊中的抗原一般刺激Th1亚群，然后其诱导产生IgG型抗体。胞外抗原趋于刺激产生Th2细胞，其诱导B细胞产生IgM，随后刺激产生包括IgE的不同异体，并且诱导某些类型的IgG抗体。抗原特异性IgE与过敏原诱发的疾病中的I类超敏反应有关。I类超敏反应相关的症状包括哮喘、鼻炎、结膜炎和过敏性皮炎。有报道说CD8+抑制性T细胞会对IgE的产生起调节的作用。把DNA用作抗过敏原诱发的过敏疾病的预防和治疗新药是非常吸引人的应用方法。至今，过敏疾病的DNA治疗涉及使用各种DNA制剂，包括基于基因的疫苗；与免疫刺激性脱氧寡核苷酸(ISS-ODN)混合的蛋白质抗原；抗原-ISS-ODN配合物(AIC)；以及利用ISS-ODN单独进行免疫调节。可是，基于ISS-ODN的疫苗的应用增加了在宿主内诱导自身免疫反应的潜在危险(9&10)。相反，由基于基因的疫苗诱导的自身免疫性风险却显得非常低(11)。典型地，基于基因的疫苗是质粒，其编码感兴趣的过敏原基因，该基因处于广泛特异性的强真核启动子的控制下，如细胞肥大病毒(″CMV″)启动子。DNA可由多种细胞处理，包括抗原提呈细胞，其表达过敏原并且通过MHC分子途径提呈处理它。过敏原可来自于各种各样的来源，包括尘螨、真菌、花粉、宠物、食品、水果等。以往已证实了用编码过敏原基因的质粒肌肉注射实验室啮齿动物会造成诱发Th1主导的过敏原特异性体液免疫和细胞免疫(12&13)。通过施用过敏原基因而产生的特异性免疫应答显示出能够在过敏原敏感的动物中下调过敏原特异性IgE的生成并且抑制气管的超应激性(12&13)。可是，该方法并不适用于所有的过敏原，因为一些过敏原会刺激基于IgG2a的弱免疫应答，或基于IgE的提高了的免疫应答(14-16)。体内表达这种过敏原会妨碍过敏原基因免疫应用于抗过敏原诱发的疾病的预防和治疗中。Kwon等(The effect of vaccination with DNA encoding murine T-cellepitopes on the Der p1 and 2 induced immunoglobulin E sythesis.S.S.Kwon，N.Kim和T.J.Yoo.2001，Allergy 56741-748.)报道用编码T细胞表位的基因免疫能激活CD8+细胞并抑制过敏原诱导的IgE合成(也可参见美国专利第5,958,891和6,251,663号)，并且提示了CD8+T细胞的活化可以为其后过敏反应提供保护。除了宠物家猫(Felis domesticus)和蟑螂，住宅尘螨物种Dermatophagoides pteronyssinus、(ID.p.)Dermatophagoides farinae(D.f.)以及Blomia tropicalis(B.t.)是室内过敏原诱发的疾病的主要引发因素。在地理上Blomia tropicalis分布于热带和亚热带地区，而Dermatophagoidespteronyssinus很好地适应于温带、热带和亚热带地区，Dermatophagoidesfarinae在寒温带地区更普遍(1&2)。这些物种中鉴定出的住宅尘螨主要过敏原有Der p1、Der p2、Der f1、Der f2和Blo t5，它们与超过60％的螨的皮肤提取物穿刺测试阳性患者中的IgE反应有关(1-3，6-8)。D.p.和D.f.的主要过敏原的人特异性IgE有着高度的交叉反应性，而在B.t.和D.p.之间仅有很小程度的IgE交叉反应。开发出安全有效的预防或治疗过敏疾病中IgE反应和I型超敏反应的疫苗仍旧是重要的目标。
技术实现思路
本专利技术提供一种重组核酸，其包含与编码过敏原基因可操作相连的编码第一信号肽的基因，其中第一信号肽介导过敏原进入内质网的转运。在一个实例中，当在细胞内表达时，核酸进一步包含一种可操作相连的基因，其编码把过敏原靶向至核内体或溶酶体的第二信号。该重组核酸可用于诱发抗过敏原的免疫保护应答，并且本专利技术在一个方面提供一种包含如本专利技术所述重组核酸的疫苗。本专利技术也提供包含如本专利技术所述重组核酸的组合物或疫苗，以及药学上可接受的载体或稀释剂。本专利技术另一方面提供i)免疫患者抗过敏；ii)诱发Th1型免疫应答；iii)抑制过敏原特异性IgE的产生；iv)预防或治疗针对过敏原的过敏反应的方法，这些方法包括施用如本专利技术所述的重组核酸、疫苗或组合物。本专利技术在另一方面提供了如本专利技术所述的重组核酸、疫苗或组合物在i)免疫患者抗过敏；ii)诱导Th1型免疫应答；iii)抑制过敏原特异性IgE的产生；iv)预防或治疗针对过敏原的过敏反应上的应用，以及在制备i)免疫患者抗过敏；ii)诱导Th1型免疫应答；iii)抑制过敏原特异性IgE的产生；iv)预防或治疗针对过敏原的过敏反应的药物中的应用。患者可以是哺乳动物，在一个实例中，患者是人。本专利技术在另一方面提供一种新的免疫患者抗过敏的方法，包括在第一阶段向患者施用多剂包含可表达的过敏原基因的核酸，其经过一段时间从而足以诱导出患者的长期记忆，并在第二阶段施用过敏原。在一个实例中，在第一阶段施用核酸约一年以上。在不同的实例中，过敏原可与佐剂一起施用，并且可以施用多剂过敏原。附图说明图1显示了在用明矾吸附的重组Blo t5蛋白免疫的BALB/cJ小鼠中的典型Th2型免疫应答，其由Th2和Th1特异性细胞因子产生的量、过敏原特异性IgE产生的水平、和气管过度反应的应答所测得。图2显示了在用编码全长Blo t5基因的DNA疫苗免疫的BALB/cJ小鼠中诱发的特异性Th1型体液应答。图3显示了在用编码嵌合蛋白的DNA疫苗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组核酸，其包含与编码过敏原基因可操作相连的编码第一信号肽的基因，其中第一信号肽介导过敏原进入内质网的转运。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡考圆，刘立人，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，
类型：发明
国别省市：SG[新加坡]