一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法，它包括以下步骤：（1）制作植酸含量比色卡；（2）根据植酸含量比色卡，测出作物中植酸含量等级值X1；（3）制作植酸酶活性比色卡；（4）根据植酸酶活性比色卡，测出作物中植酸酶活性等级值X2；（5）结合步骤（2）测出的植酸含量等级值X1及步骤（4）测出的植酸酶活性等级值X2，根据植酸含量和植酸酶活性综合评价材料。该方法能够快速预测小麦材料中植酸含量、植酸酶活性状况，综合评价小麦籽粒抗营养因子状况。

A method for rapid identification of plant materials with low phytate content and high phytase activity and its application

The invention relates to a method of crop materials for rapid identification of low phytic acid content of high phytase activity, which comprises the following steps: (1) making the content of phytic acid colorimetry; (2) according to the content of phytic acid colorimetry, phytic acid content in crop level measured value X1; (3) making the phytase activity than colorcard; (4) according to the the phytase activity of phytase activity level measured colorimeter, crop value X2; (5) with step (2) level of phytic acid content measured by X1 and step (4) phytase activity measured by X2 grade, according to the content of phytic acid and phytase activity evaluation materials. This method can quickly predict the content of phytic acid and phytase activity in wheat, and comprehensively evaluate the status of wheat grain anti nutrition factors.

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法及其应用
本专利技术属于农作物检测
，尤其涉及一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法及其应用。
技术介绍
小麦是世界上和我国主要粮食作物之一，全世界有超过35%的人口以小麦为主粮。不仅提供了人类必须的热量和蛋白质，同时是多种矿质营养元素的供应者。植酸又称肌酸、环己六醇六全-二氢磷酸盐，它主要存在于植物的种子、根干和茎中。植酸是人类和单胃动物的“抗营养因子”，具有很强的鳌合能力，摄入体内的植酸与各种食物中摄入的Fe、Zn、Ca等营养元素形成不溶性的盐类；同时还可与蛋白质形成复合体，使体内内源性消化酶的活性受到抑制，甚至失活。这些无法被人和单胃动物所吸收利用的植酸复合物，最终被排出体外，严重降低了微量元素和蛋白质等营养物质的生物有效性（Raboy1997;Lott等2000）；由此可见，植酸不但影响了食物源中微量元素的利用度，同时还阻碍了内源性微量元素的再吸收。同时，由于植酸磷生物有效性的下降，大量不能被人和单胃动物吸收的植酸磷以粪便形式排泄到环境，造成水体中磷素的富营养化等严重的环境污染问题（Raboy2001;Oltmans等2005)。植酸酶能将磷酸残基从植酸上水解下来，因此破坏了植酸对矿物元素强烈的亲和力，所以说植酸酶能增加矿物元素的营养效价。因此，选育低植酸含量高植酸酶活性品种是提高营养品质一个重要途径。植酸含量及植酸酶活性测定有多种方法，有的方法操作繁琐，有的需要昂贵的仪器，因此不适宜育种中大量材料的筛选。同时，多数育种家要么只从降低植酸含量角度着手，要么从增加植酸酶活性角度出发，并没有同时考虑植酸含量和植酸酶活性，并且建立一套完整快速的评价方法。因此，建立一种准确、快速、且考虑全面的筛选植酸含量低植酸酶活性高的方法十分必要。
技术实现思路
为了解决技术背景所提出的问题，本专利技术提供一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法及其应用，该方法能够快速预测小麦材料中植酸含量、植酸酶活性状况，综合评价小麦籽粒抗营养因子状况。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供了一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法，它包括以下步骤：（1）制作植酸含量比色卡；植酸含量比色卡是指一组由颜色深浅不同的色带制成的卡片，同时颜色深浅用数值标示，数值大小反映植酸含量高低；颜色越深、数值越小反映植酸含量越低；（2）根据步骤（1）制作的植酸含量比色卡，测出作物中植酸含量等级值X1；（3）制作植酸酶活性比色卡；植酸酶活性比色卡是指一组由颜色深浅不同的色带制成的卡片，同时颜色深浅用数值标示，数值大小反映植酸酶活性高低；颜色越深、数值越大反映植酸酶活性越高；（4）根据步骤（3）制作的植酸酶活性比色卡，测出作物中植酸酶活性等级值X2；（5）结合步骤（2）测出的植酸含量等级值X1及步骤（4）测出的植酸酶活性等级值X2，将P定义为综合评价值，根据公式P=X2/X1计算出综合评价值；（6）作物等级按照如下数值范围进行划分，P取值6.0~5.0为一等，P取值5.0~3.0为二等，P取值3.0~1.5为三等，P取值<1.5为四等，根据步骤（5）计算的综合评价值得出等级，根据等级可获得低植酸含量高植酸酶活性的作物材料。本专利技术还提供了一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法在小麦材料上的应用。上述的快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法在小麦材料上的应用，它包括以下步骤：（1）植酸含量比色卡的制作：s1：称取0.22g无水磷酸二氢钾定容于500mL的去离子水中，得到溶液a；s2：依次量取不同体积的溶液a，量取的体积量分别为1mL、1.5mL、3mL、4.5mL、6mL和8mL，将不同体积量的溶液a分别置于规格相同的离心管中，将含有1mL溶液a的离心管定义为1号离心管，将含有1.5mL溶液a的离心管定义为2号离心管，将含有3mL溶液a的离心管定义为3号离心管，将含有4.5mL溶液a的离心管定义为4号离心管，将含有6mL溶液a的离心管定义为5号离心管，将含有8mL溶液a的离心管定义为6号离心管，每个离心管内用去离子水补充至10mL；s3：将s2中每个编号的离心管内依次加入质量百分比浓度为0.015%的硫酸联氨溶液8.0mL和质量百分比浓度为2.5%的钼酸钠稀硫酸溶液2.0mL，然后于100℃加热10min后冷却至常温，用去离子水稀释至30mL，根据各个离心管中颜色，拍照，打印，制作比色卡，1号离心管中颜色最浅，设置数值最高，为6.0，2号离心管中的颜色设置为数值5.0，3号离心管中的颜色设置为数值4.0，4号离心管中的颜色设置为数值3.0，5号离心管中的颜色设置为数值2.0，6号离心管中的颜色设置为数值1.0；（2）小麦材料中植酸含量等级值X1的测定：s1：称取500mg磨碎的小麦籽粒，向小麦籽粒中加入浓度为0.4mol/L的盐酸溶液5mL，于温度40℃下过夜处理；s2：量取s1过夜处理后的上清液500μL，向上清液中加入5.5mL的反应液，静止反应2小时，然后根据步骤（1）制作的植酸含量比色卡，测出相应植酸含量等级值X1；所述反应液是由6mol/L硫酸溶液、质量百分比浓度为2.5%钼酸铵溶液、质量百分比浓度为10%抗坏血酸溶液和去离子水制成，反应液是由6mol/L硫酸溶液、质量百分比浓度为2.5%钼酸铵溶液、质量百分比浓度为10%抗坏血酸溶液和去离子水的质量比为1:1:1:2；（3）植酸酶活性比色卡的制作：s1：称取0.2126g磷酸二氢钾定容于500mL的乙酸缓冲液中，得到溶液A；s2：依次量取不同体积的溶液A，量取的体积量分别为1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3mL和3.5mL，将不同体积量的溶液A分别置于规格相同的离心管中，将含有1mL溶液A的离心管定义为1号离心管，将含有1.5mL溶液A的离心管定义为2号离心管，将含有2mL溶液A的离心管定义为3号离心管，将含有2.5mL溶液A的离心管定义为4号离心管，将含有3mL溶液A的离心管定义为5号离心管，将含有3.5mL溶液A的离心管定义为6号离心管，每个离心管内用pH=5.5的醋酸钠溶液补充至4mL；s3：将s2中每个编号的离心管内依次加入4ml钒钼酸铵终止液，混合摇匀，转速4800rpm下离心10min，根据各个离心管中颜色，拍照，打印，制作比色卡，1号离心管中颜色设置数值最低，为1.0，2号离心管中的颜色设置为数值2.0，3号离心管中的颜色设置为数值3.0，4号离心管中的颜色设置为数值4.0，5号离心管中的颜色设置为数值5.0，6号离心管中的颜色设置为数值6.0；所述钒钼酸铵终止液是由浓度为500g/L硝酸溶液B、浓度为100g/L钼酸铵溶液C和浓度为2.35g/L钒酸铵溶液D按照质量比为2:1:1制成；所述硝酸溶液B的配制：将纯硝酸与去离子水按照质量比1:2配制；钼酸铵溶液C的配制：先将10g钼酸铵溶于100mL容量瓶中，接着向100mL容量瓶中加入质量百分比浓度为25％的氨水1.0mL，最后用去离子水溶解定容至刻度；钒酸铵溶液D的配制：称取0.235g钒酸铵于100mL棕色容量瓶中，加入浓度为500g/L硝酸溶液B2mL，用去离子水溶解定容至刻度；（本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法，其特征在于它包括以下步骤：（1）制作植酸含量比色卡；植酸含量比色卡是指一组由颜色深浅不同的色带制成的卡片，同时颜色深浅用数值标示，数值大小反映植酸含量高低；颜色越深、数值越小反映植酸含量越低；（2）根据步骤（1）制作的植酸含量比色卡，测出作物中植酸含量等级值X1；（3）制作植酸酶活性比色卡；植酸酶活性比色卡是指一组由颜色深浅不同的色带制成的卡片，同时颜色深浅用数值标示，数值大小反映植酸酶活性高低；颜色越深、数值越大反映植酸酶活性越高；（4）根据步骤（3）制作的植酸酶活性比色卡，测出作物中植酸酶活性等级值X2；（5）结合步骤（2）测出的植酸含量等级值X1及步骤（4）测出的植酸酶活性等级值X2，将P定义为综合评价值，根据公式P=X2/X1计算出综合评价值；（6） 作物等级按照如下数值范围进行划分，P取值6.0~5.0为一等，P取值5.0~3.0为二等， P取值3.0~1.5为三等，P取值 <1.5为四等，根据步骤（5）计算的综合评价值得出等级，根据等级可获得低植酸含量高植酸酶活性的作物材料。

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法，其特征在于它包括以下步骤：（1）制作植酸含量比色卡；植酸含量比色卡是指一组由颜色深浅不同的色带制成的卡片，同时颜色深浅用数值标示，数值大小反映植酸含量高低；颜色越深、数值越小反映植酸含量越低；（2）根据步骤（1）制作的植酸含量比色卡，测出作物中植酸含量等级值X1；（3）制作植酸酶活性比色卡；植酸酶活性比色卡是指一组由颜色深浅不同的色带制成的卡片，同时颜色深浅用数值标示，数值大小反映植酸酶活性高低；颜色越深、数值越大反映植酸酶活性越高；（4）根据步骤（3）制作的植酸酶活性比色卡，测出作物中植酸酶活性等级值X2；（5）结合步骤（2）测出的植酸含量等级值X1及步骤（4）测出的植酸酶活性等级值X2，将P定义为综合评价值，根据公式P=X2/X1计算出综合评价值；（6）作物等级按照如下数值范围进行划分，P取值6.0~5.0为一等，P取值5.0~3.0为二等，P取值3.0~1.5为三等，P取值&lt;1.5为四等，根据步骤（5）计算的综合评价值得出等级，根据等级可获得低植酸含量高植酸酶活性的作物材料。2.一种快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法在小麦材料上的应用。3.如权利要求2所述的快速鉴定低植酸含量高植酸酶活性的作物材料的方法在小麦材料上的应用，其特征在于它包括以下步骤：（1）植酸含量比色卡的制作：s1：称取0.22g无水磷酸二氢钾定容于500mL的去离子水中，得到溶液a；s2：依次量取不同体积的溶液a，量取的体积量分别为1mL、1.5mL、3mL、4.5mL、6mL和8mL，将不同体积量的溶液a分别置于规格相同的离心管中，将含有1mL溶液a的离心管定义为1号离心管，将含有1.5mL溶液a的离心管定义为2号离心管，将含有3mL溶液a的离心管定义为3号离心管，将含有4.5mL溶液a的离心管定义为4号离心管，将含有6mL溶液a的离心管定义为5号离心管，将含有8mL溶液a的离心管定义为6号离心管，每个离心管内用去离子水补充至10mL；s3：将s2中每个编号的离心管内依次加入质量百分比浓度为0.015%的硫酸联氨溶液8.0mL和质量百分比浓度为2.5%的钼酸钠稀硫酸溶液2.0mL，然后于100℃加热10min后冷却至常温，用去离子水稀释至30mL，根据各个离心管中颜色，拍照，打印，制作比色卡，1号离心管中颜色最浅，设置数值最高，为6.0，2号离心管中的颜色设置为数值5.0，3号离心管中的颜色设置为数值4.0，4号离心管中的颜色设置为数值3.0，5号离心管中的颜色设置为数值2.0，6号离心管中的颜色设置为数值1.0；小麦材料中植酸含量等级值X1的测定：s1：称取500mg磨碎的小麦籽粒，向小麦籽粒中加入浓度为0.4mol/L的盐酸溶液5mL，于温度40℃下过夜处理；s2：量取s1过夜处理后的上清液500μL，向上清液中加入5.5mL的反应液，静止反应2小时，然后根据步骤（1）制作的植酸含量比色卡，测出相应植酸含量等级值X1；所述反应液是由6...

【专利技术属性】
技术研发人员：寇潇，
申请(专利权)人：寇潇，
类型：发明
国别省市：河南,41