液体植酸酶稳定性的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种测定液体植酸酶稳定性能的方法，该方法包括：1)将液体植酸酶在6℃～60℃的温度震荡处理10分钟～120小时；2)在步骤1)的处理过程中选取至少一个时间点测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度和酶活；3)根据步骤2)中的吸光度的变化评价澄清度的稳定性，以及根据步骤2)中酶活的变化评价酶活的稳定性。该方法提供一种可以有效地定量比较各种液体植酸酶的稳定性能优劣的方法，特别是提供一种通过比较震荡前后液体植酸酶的吸光度和酶活活性的变化来判断不同液体植酸酶稳定性的优劣的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
磷是动物所必需的矿物元素之一，在动物日粮中提供充足的磷非常重要。植物性饲料原料中虽然含有大量的磷，但是其中有60-80%是以植酸磷的形式存在，而在单胃动物和水产动物中缺乏分解植酸磷所需的酶，磷的利用率仅为0-30%，因此需要在饲料中添加大量的无机磷来补充磷的不足。这样会造成饲料成本的大量增加，同时饲料中的植酸磷不能被动物所利用，被大量排泄到动物体外，造成对土壤和水的严重污染。植酸酶是一种能将饲料中的植酸磷水解成为无机磷和肌醇的饲用酶制剂，对单胃动物的饲喂效果已经得到了广泛的认可。单胃动物饲料中加入植酸酶后，可以将植物性饲料中本身磷的利用率提高到60 %以上，减少50-70 %的无机磷用量，粪便中磷的排出量减少30-40 %以上，并且大大降低植酸盐的抗营养作用，对提高畜牧生产效益、降低环境污染具有重要的意义。然而，在中国的饲料工业中，70%以上的饲料是颗粒饲料。在饲料制粒过程中，一般温度要达到80-85°C，高者可达到90°C，其对作为热敏物质的植酸酶活性破坏严重。对经过颗粒机环模挤压成型冷却后的颗粒饲料使用液体植酸酶以雾化方式喷涂于颗粒表面，可以防止颗粒饲料热加工过程对植酸酶活性的破坏，同时可以适当降低酶制剂的使用量，降低饲料成本，这就是液体植酸酶后喷涂技术。液体植酸酶中含有大量的水，而水是所有化学反应的介质，相对于固体植酸酶来说，液体植酸酶在储存、运输和使用过程中的稳定性比较差。液体植酸酶的稳定性能是评价其品质优劣的关键。液体植酸酶是一种有机物溶液，某些杂质含量(包括有机物和无机物)，在一定条件下会引起液体植酸酶产生大量不溶性沉淀，然后产生两种不良后果，一是引起植酸酶变性，酶活性降低；二是引起植酸酶后喷涂喷雾效果差，单位体积雾滴数减少，甚至堵塞管道和喷头。目前消除这种负面作用的方法有两个途径:一是尽量降低液体中杂质含量。二是通过特定稳定技术促进有机物溶解，防止析出不溶物。现有的评价液体植酸酶稳定性的方法，一是只通过观察有无沉淀来定性的判断其稳定性，二是未考虑实际运输、储存和使用过程中震荡因素对其澄清度和酶活的重要影响。从下表I可以看出，有些液体植酸酶震荡相对静置来说，酶活失活严重；吸光度上升，澄清度严重下降。表I为植酸酶样品在静置或震荡条件下的酶活、吸光度变化情况的比较权利要求1.一种,该方法包括: 1)将液体植酸酶在6°c 60°C的温度震荡处理10分钟 120小时； 2)在步骤I)的处理过程中选取至少一个时间点测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度和酶活； 3)根据步骤2)中的吸光度的变化评价澄清度的稳定性，以及根据步骤2)中酶活的变化评价酶活活性的稳定性。2.根据权利要求1所述的，其中，步骤I)中，所述温度为30 45°C，所述震荡处理的时间为30分钟 24小时，以及所述震荡处理的强度为100 300次/分钟。3.根据权利要求1所述的，其中，步骤I)中，所述温度为37°C或45°C，所述时间为24小时或I小时，并且震荡处理的强度为200次/分钟。4.根据权利要求1 3中任一项所述的，其中，所述时间点为震荡处理时间。5.根据权利要求1所述的，其中，步骤2)中，在546nm下使用分光光度计测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度；以及按照GB/T18634-2009方法测定该液体植酸酶的酶活。6.根据权利要求1所述的，其中，步骤3)中，所述酶活的变化可为下列公式(I)表示的酶活存留率: 酶活存留率=存留酶活/初始酶活X 100%(I)， 其中，存留酶活为震荡处理后的酶活，初始酶活为震荡处理前的酶活。7.根据权利要求1所述的，其中，步骤3)中，所述吸光度的变化可为下列公式(2)表示的吸光度变化率: 吸光度变化率=震荡后吸光度值/初始吸光度值X 100% (2)， 其中，初始吸光度值为震荡处理前的吸光度值。8.一种，该方法包括以下步骤: 1)根据液体植酸酶运输、储存、使用环境温度等实际情况，将恒温振荡器设定温度为6°C 60°C，震荡处理时间设定为10分钟 120小时，在震荡处理的时间范围内选取至少一个时间点，恒温振荡器转速设定为100 300转/分钟； 2)将待测液体植酸酶摇匀后，等分到m个具塞玻璃瓶中，塞紧瓶口，备用，其中，m为大于或等于2的整数； 3)调节恒温振荡器至上述温度和速度，待恒温恒速后，同时放入上述准备好的m个具塞玻璃瓶，放入后立即开始计时，震荡到待测时间点后取出具塞玻璃瓶，将液体植酸酶充分混勻，测定植酸酶的活性和546nm下相对于蒸懼水的吸光值,记录结果；剩余的m个未震荡液体植酸酶同时测定植酸酶的活性和546nm下相对于蒸馏水的吸光值，作为震荡前的初始对照； 4)根据步骤3)中的数据计算酶活存留率和吸光度变化率，其中， 该时间点震荡的m个样品的酶活测定结果取算术平均值为该温度点存留酶活，未震荡的m个样品酶活测定结果平均值作为初始酶活， 该时间点的酶活存留率=存留酶活/初始酶活X 100%，其中，存留酶活为震荡处理后的酶活，初始酶活为震荡处理前的酶活， 该时间点震荡的m个样品的吸光度测定结果取算术平均值为该温度点震荡后吸光度值，未震荡的m个样品吸光度测定结果平均值作为初始吸光度值， 该时间点的吸光度变化率=震荡后吸光度值/初始吸光度值X 100%，其中，初始吸光度值为震荡处理前的吸光度值。9.根据权利要求8所述的，其中，步骤I)中，将恒温振荡器设定温度为37°C或45°C，震荡处理时间设定30分钟，恒温振荡器转速设定为200转/分钟。10.根据权利要求8所述的，其中，在546nm下使用分光光度计测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度，以及按照GB/T18634-2009方法测定植酸酶的活 性。全文摘要本专利技术涉及一种测定液体植酸酶稳定性能的方法，该方法包括1)将液体植酸酶在6℃～60℃的温度震荡处理10分钟～120小时；2)在步骤1)的处理过程中选取至少一个时间点测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度和酶活；3)根据步骤2)中的吸光度的变化评价澄清度的稳定性，以及根据步骤2)中酶活的变化评价酶活的稳定性。该方法提供一种可以有效地定量比较各种液体植酸酶的稳定性能优劣的方法，特别是提供一种通过比较震荡前后液体植酸酶的吸光度和酶活活性的变化来判断不同液体植酸酶稳定性的优劣的方法。文档编号G01N21/31GK103196844SQ201210001858公开日2013年7月10日 申请日期2012年1月5日 优先权日2012年1月5日专利技术者苏俊兵, 魏秀莲, 郭宝林 申请人:北京昕大洋科技发展有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种液体植酸酶稳定性的测定方法，该方法包括：1)将液体植酸酶在6℃～60℃的温度震荡处理10分钟～120小时；2)在步骤1)的处理过程中选取至少一个时间点测定该液体植酸酶震荡前后的吸光度和酶活；3)根据步骤2)中的吸光度的变化评价澄清度的稳定性，以及根据步骤2)中酶活的变化评价酶活活性的稳定性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏俊兵，魏秀莲，郭宝林，
申请(专利权)人：北京昕大洋科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：