非天然发生的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)和使用方法技术

本文中提供了非天然发生的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)，并且还提供了生成和使用非天然发生的PRRSV的方法。

Unnaturally occurring porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and its use

This article provides a non naturally occurring porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), and also provides a method for the generation and use of non naturally occurring PRRSV.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】非天然发生的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)和使用方法对相关申请的交叉引用本申请要求2014年3月21日提交的美国申请No.61/968,465的35U.S.C.§119(e)下的优先权的权益。专利
一般而言，本公开内容涉及非天然发生的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)和使用方法。专利技术背景目前的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗对于控制和根除猪生殖和呼吸综合征(PRRS)不是充分有效的。目前的PRRSV疫苗的主要限制是其针对趋异的PRRSV株的亚最佳覆盖。迄今，使用天然的PRRSV株配制所有商业PRRSV疫苗，但是PRRSV株间的实质性遗传变异是开发广泛保护性PRRSV疫苗的最大障碍。专利技术概述本公开内容提供了非天然发生的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)和生成和使用非天然发生的PRRSV的方法。提供了PRRSV-CON核酸，其中核酸与SEQIDNO:1具有至少50％序列同一性(例如至少75％，至少95％，或至少99％序列同一性)。在一些实施方案中，核酸具有SEQIDNO:1中显示的序列。病毒颗粒，其包含本文中描述的PPRSV-CON核酸。组合物，其包含本文中描述的PPRSV-CON核酸和药学可接受载剂。组合物，其包含本文中描述的病毒颗粒和药学可接受载剂。本文中描述的组合物，其进一步包含佐剂。还提供了PRRSV-CON核酸，其中核酸与选自下组的序列具有至少95％(例如，至少99％)序列同一性：SEQIDNO:2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，和42。在一些实施方案中，核酸具有选自下组的序列：SEQIDNO:2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，和42。在一些实施方案中，核酸分别编码具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQIDNO:3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41和43。病毒颗粒，其包含本文中描述的PPRSV-CON核酸。组合物，其包含本文中描述的核酸和药学可接受载剂。组合物，其包含本文中描述的病毒颗粒和药学可接受载剂。本文中描述的组合物，其进一步包含佐剂。提供了PRRSV-CON多肽，其中所述多肽与选自下组的序列具有至少95％(例如，至少99％)序列同一性：SEQIDNO:3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41和43。在一些实施方案中，多肽具有选自下组的序列：SEQIDNO:3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41和43。在一些实施方案中，多肽由核酸编码，所述核酸分别具有选自下组的序列：SEQIDNO:2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，或42。病毒颗粒，其包含本文中描述的PPRSV-CON多肽。组合物，其包含本文中描述的多肽和药学可接受载剂。组合物，其包含本文中描述的病毒颗粒和药学可接受载剂。本文中描述的组合物，其进一步包含佐剂。提供了用于在猪中引发针对PPRSV的免疫应答的方法。此类方法通常包括对猪施用：(i)有效量的本文中描述的任何核酸；(ii)有效量的本文中描述的任何多肽；(iii)有效量的本文中描述的任何病毒颗粒；或(iv)有效量的本文中描述的任何组合物。代表性的施用路径包括但不限于肌肉内、腹膜内、和口服。提供了用于治疗或预防猪中的PPRS的方法。此类方法通常包括对猪施用：(i)有效量的本文中描述的任何核酸；(ii)有效量的本文中描述的任何多肽；(iii)有效量的本文中描述的任何病毒颗粒；或(iv)有效量的本文中描述的任何组合物。代表性的施用路径包括但不限于肌肉内、腹膜内、和口服。除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语与方法和物质组合物所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然可以在方法和物质组合物的实践或测试中使用与本文中描述的方法和材料相似或等同的方法和材料，但是下文描述了合适的方法和材料。另外，材料、方法、和例子仅仅是例示性的，而并不意图为限制性的。通过提及完整收录本文中提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献。附图简述图1，小图(A)是从一组60种PRRSV全基因组序列构建的系统发生树。将这60种PRRSV基因组分类成4种亚组。通过箭标示交叉保护实验中牵涉的病毒的位置。图1，小图(B)的图显示了天然的PRRSV株间的遗传距离和自本文中描述的PRRSV-CON至天然的PRRSV株的遗传距离。盒的下和上边界分别标示第25和第75百分位数。盒内的实线代表中值。高于和低于盒的须标示数据的最小值和最大值。图2显示了PRRSV-CON病毒的生成和表征。小图(A)的示意图显示了构建PRRSV-CON全基因组cDNA克隆的策略。小图(A)的上半部描绘了病毒基因组的图示，以及用于克隆目的的独特的限制酶位点。水平黑线(在顶部有字母A-D)代表合成的DNA片段。线下方的括号内部的数目标示每个相应的片段的长度(以核苷酸计)。ΦT7代表T7RNA聚合酶启动子。将基因组的个别的DNA片段以片段A至片段D的次序序贯插入穿梭载体(在小图(A)的下半部中显示)中。小图(B)的照片显示了指定的病毒与不同PRRSV特异性单克隆抗体的反应性。假感染或用PRRSV-CON或PRRSV野生型毒株FL12感染MARC-145细胞。在感染后48小时时，用对病毒核壳体蛋白(N蛋白；照片的底部行)或对病毒非结构蛋白1β(nsp1b；照片的顶部行)特异性的抗体染色细胞。小图(C)显示了MARC-145细胞中的病毒的噬斑形态学。小图(D)显示了多步骤生长曲线。以0.01的感染复数(MOI)用指定的病毒感染MARC-145细胞。在感染后(p.i.)的不同时间点时，收集培养上清液，并且通过在MARC-145细胞上滴定测定病毒滴度。图3的数据证明了PRRSV-CON在猪中的复制。小图(A)显示了自感染前1天至感染后13天(p.i.天)每日测量的直肠温度。小图(B)显示了接种后14天内的平均每日重量增加(ADWG)。小图(C)显示了通过商业的通用RT-qPCR(TatracoreInc.,Rockville,MD)测定的病毒血水平。小图(D)显示了通过IDEXXELISA测定的接种后的抗体应答的水平；水平点线标示测定法的截留。图4的数据证明了由本文中描述的PRRSV-CON提供的针对PRRSV株MN-184的交叉保护。小图(A)显示了攻击感染后15天内的平均每日重量增加(ADWG)。小图(B)显示了通过商业的通用的RT-qPCR(TetracoreInc.,Rockville,MD)测定的攻击后的病毒血水平。小图(C)显示了在攻击后15天时收集的不同组织中的总病毒RNA水平，如通过商业的通用的RT-qPCR(TetracoreInc.,Rockville,MD)测定的。小图(D)显示了MN-184特异性RNA水平，如通过内部开发的差异RT-qPCR测定的。图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PRRSV‑CON核酸，其与SEQ ID NO:1具有至少50％序列同一性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种PRRSV-CON核酸，其与SEQIDNO:1具有至少50％序列同一性。2.权利要求1的核酸，其与SEQIDNO:1具有至少75％序列同一性。3.权利要求1的核酸，其与SEQIDNO:1具有至少95％序列同一性。4.权利要求1的核酸，其与SEQIDNO:1具有至少99％序列同一性。5.权利要求1的核酸，其具有SEQIDNO:1中显示的序列。6.一种病毒颗粒，其包含权利要求1至5中任一项的PPRSV-CON核酸。7.一种组合物，其包含权利要求1至5中任一项的核酸和药学可接受载剂。8.一种组合物，其包含权利要求6的病毒颗粒和药学可接受载剂。9.权利要求7或8的组合物，其进一步包含佐剂。10.一种PRRSV-CON核酸，其与选自下组的序列具有至少95％序列同一性：SEQIDNO:2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，和42。11.权利要求10的核酸，其与选自下组的序列具有至少99％序列同一性：SEQIDNO:2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，和42。12.权利要求10的核酸，其具有选自下组的序列：SEQIDNO:2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，和42。13.权利要求10至12中任一项的核酸，其中所述核酸分别编码具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQIDNO:3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41和43。14.一种病毒颗粒，其包含权利要求10至13中任一项的PPRSV-CON核酸。15.一种组合物，其包含权利要求10至14中任一项的核酸和药学可接受载剂。16.一种组合物，其包含权利要求14的病毒颗粒和药学可接受载剂。17.权利要求15或16的组合物，其进一步包含佐剂。18.一种PRRSV-CON多肽，其与选自下组的序列具有至少95％序列同一性：S...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·L·X·乌，F·奥索里奥，W·W·莱格雷德，A·K·帕特奈克，马方瑞，
申请(专利权)人：纽泰克温图斯公司，伊利诺伊大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US